母-婴IgG 抗体效价与新生儿溶血病关系的研究

张勤，闫烨，王丽娜，郭华，兰炯采，吕毅

（1.河南大学附属郑州颐和医院，河南 郑州450018）；2.南方医科大学南方医院，广东 广州 510515）

新生儿溶血病（Hemolytic disease of newborn,HDN）是指由于母婴血型不合而引起的新生儿免疫性溶血性疾病，主要临床表现为新生儿贫血、水肿、肝脾肿大，严重者出现核黄疸。血型血清学检测对于HDN 早期预防、诊断和治疗极为重要，项目包括孕产妇的ABO/Rh(D)血型鉴定、不规则抗体筛查和IgG 血型抗体效价，新生儿ABO/Rh(D)血型鉴定、不规则抗体筛查和HDN 三项试验（直接抗人球蛋白试验、游离试验、释放试验），目的是确定母-婴血型是否相合，新生儿血液中是否有来自母体的抗体，以及新生儿红细胞是否被来自母体的抗体所致敏[1]。为研究新生儿血型抗体与HDN的关系，在本研究中我们选取本院2019年11 月-12月期间30例疑似HDN 进行了上述血清学检测，并对新生儿血型抗体效价进行检测，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 选取本院2019年11 月-12 月期间就诊的疑似HDN 30例，其中27例产妇为O型RhD 阳性，不规则抗体筛查阴性；另外3例不规则抗体阳性。产妇临产时采集乙二胺四乙酸二钾（EDTA）抗凝血3ml 左右，宝宝出生后立即采集脐带血3ml 左右进行检测。

1.2 仪器与试剂 孵育器、离心机和抗人球蛋白卡均由长春博迅配套提供，不规则抗体筛查细胞和谱细胞由上海血液生物医药责任有限公司提供。抗A、抗B 血型定型试剂和人ABO 反定型用红细胞试剂盒由北京金豪制药股份有限公司提供，抗D血型定型试剂由珠海贝索提供。数显电热恒温水温箱由上海跃进医疗器械有限公司提供。

1.3 试验方法 参照 《全国临床检验操作规程》[2]、试剂说明书和实验室标准操作规程对产妇进行ABO/Rh（D）血型鉴定、不规则抗体筛查和血型IgG抗体效价检测，对新生儿进行ABO/Rh（D）血型鉴定、不规则抗体筛查和HDN 三项试验（直接抗人球蛋白试验、游离试验、释放试验）和血型IgG 抗体效价检测。ABO/Rh（D）血型鉴定采用试管法，其余试验均采用抗人球蛋白卡检测。

1.4 判断标准 直接抗人球蛋白试验、游离试验、释放试验3 项试验中，只要释放试验阳性即可判定为ABO-HDN，若只有直接抗人球蛋白试验或/和游离试验阳性均不足以判定为ABO-HDN[3]。对于产妇不规则抗体阳性者，根据新生儿直接抗人球蛋白试验、血浆和放散液不规则抗体筛查结果，判定新生儿是否存在其他血型系统HDN。

1.5 统计学处理 试验结果采用SPSS 21.0 进行处理，计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。变量之间的相关性用Pearson 相关系数表示，P＜0.01 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ABO-HDN 发生率在本研究中，母-婴ABO血型不合共18例，其中7例母-婴血型为O-A型，HDN 阳性7例，阳性率100%；11例母-婴血型为O-B型，阳性8例，阳性率72.7%；ABO-HDN 阳性率合计为83.3%。母-婴血型O-A 组比O-B 发病率高（P<0.05），差异有统计学意义。见表1。

表1 ABO-HDN 发病率

2.2 新生儿ABO 血型抗体来源及性质在本研究中，新生儿血型判读以正定型为准，反定型试验结果显示90%（27/30）新生儿血浆中存在盐水介质反应的ABO 血型抗体。为进一步研究新生儿血型抗体性质，用2-Me 进行破坏，结果2-Me 破坏前后盐水介质抗体效价没有改变，所以新生儿ABO 血型抗体是来自于母体的能够在盐水中出现凝集反应的IgG 性质抗体。

2.3 母-婴ABO 血型系统IgG 抗体效价的关系在本研究中，母-婴血型为O-O 组，母亲与新生儿血浆IgG-抗A、抗B 效价呈正相关，相关系数0.880。新生儿血型抗体效价与母亲IgG 血型抗体效价显著相关（P<0.01）。见图1。

图1 母-婴ABO 血型系统IgG 抗体效价的关系

2.4 母-婴IgG 抗体效价与ABO-HDN的关系在本研究中，母-婴血型为O-A 组的母亲IgG 抗-A效价均≥64，新生儿的IgG 抗-A 抗体效价较母亲降低7～8 个滴度，甚至检测不出；而新生儿的IgG抗-B 效价降低不明显，与母亲IgG 抗-B 效价仍存在正相关，如图2A 所示。母-婴血型为O-B 组的HDN 阳性母亲IgG 抗-B 效价均≥32，新生儿的IgG 抗-B 抗体效价较母亲降低6～10 个滴度；而新生儿的IgG 抗-A 效价降低不明显，与母亲IgG 抗-A 效价仍存在正相关，如图2B 所示。母-婴血型为O-B 组HDN 阴性母亲的IgG 抗-B 效价均≤32，而婴儿的IgG 抗-B 抗体未检出，放散试验阴性。

图2 母-婴IgG 抗体效价与ABO-HDN的关系

2.5 不规则抗体效价与HDN的关系在本研究中，3例母亲不规则抗体阳性，见表2。

表2 不规则抗体效价与HDN的关系

3 讨论

在本实验室工作中发现，大多新生儿的血型正反定型是相符的。要进一步确定新生儿的血浆抗体是自己产生的还是来自于母体，首先要确定抗体的性质是IgM 还是IgG。本研究中2-Me 破坏前后，抗体效价在盐水介质中变化不大，所以新生儿抗体主要是来自母体的IgG 抗体，该结论与周金安等[4]的研究一致。在本研究中通过检测O型母亲和O型新生儿的血型抗体效价发现，母-婴IgG的抗A/抗B 效价基本是一致的，呈高度正相关，因此孕妇的抗体效价可以直接反应胎儿的抗体效价。对于O型母亲，A型/B型的新生儿来说，相应血型抗体效价明显降低，一部分原因是致敏在红细胞表面，另一部分原因是破坏红细胞导致抗体被消耗，是诊断HDN的直接证据。于宏亮[5]的研究证明O型血孕妇IgG 抗-A(B)效价水平与ABO-HDN 发病率密切关，IgG 抗体效价末次检测水平较基础水平更有意义。

在已知的人类血型系统中，ABO 系统HDN 最为常见，其次是Rh 系统，近年来MNSs 系统引起的HDN 也时有报道[6]，其他如Kell、Duffy、Kidd 等系统也有报道，但极少见[7]。在本研究中，母-婴为O-A 或O-B 血型不合时,HDN的发病率高达83.3%,提示母-婴ABO 血型不合时极易发生HDN。ABO 系统以外的血型抗体统称不规则抗体，一般为IgG 性质，引起的HDN 严重程度与抗体性质和效价有关，可能比ABO-HDN 更加严重。由于二胎政策放开,孕产妇出现不规则抗体阳性的几率增加,为避免其他血型系统引起的HDN 漏检，建议产妇孕早期和新生儿出生时常规进行不规则抗体筛查，以期早期诊断和干预，降低HDN的危害[8,9,10]。

在本研究中我们发现了3例母亲不规则抗体阳性的情况，因抗体性质和效价的不同，新生儿发病情况不同。第1例母亲和新生儿体内都检出了IgG 抗-Lea，效价32，新生儿无贫血、高胆红素等HDN 症状。Lea 抗体多数为IgM 抗体，不能通过胎盘引起新生儿溶血病，但在本研究中的该母亲体内的抗-Lea 是IgG和IgM 混合存在的，这种情况是少见的。高效价的IgG 抗-Lea通过胎盘进入到了胎儿体内，但未致敏胎儿红细胞，故未引起HDN。抗-Lea 不引起严重的新生儿溶血病，可能由于Lewis 抗原通常不出现在胎儿红细胞上，而是分泌在胎儿体液中[11]。第2例母亲系第1 胎，但体内存在IgG 抗-M，效价高达64，胎儿出生后即出现极重度贫血。由抗-M 抗体引起的新生儿溶血病很罕见[12]，可能是由于抗-M 一般为IgM 抗体，但也有抗-M 导致死胎或需要换血治疗的报道。在第3例母亲体内检出IgG 抗-E，效价64，抗体进入胎儿体内致敏胎儿红细胞引起HDN。患儿症状较轻，经过蓝光照射、静注丙种球蛋白治愈出院。抗-E 是Rh系统最常见的抗体，多由免疫产生[13]。Rh 系统抗体效价≥16 易引起HDN[14]。不同血型系统抗体效价的高低与HDN 发生不成正相关，Koelewijn 等建议用重复检测母体抗体效价和抗体依赖性细胞毒性（ADCC）测试评估发生HDN的风险[15]。

HDN 临床症状与新生儿溶血程度基本一致，治疗的关键在于尽早诊断，实验室检查有助于明确诊断，早期干预，对降低新生儿死亡率及避免神经系统后遗症的发生具有重要意义[16]。在我院，对于血型为O型、RhD 阴性或不规则抗体阳性的孕妇，新生儿一旦出生立即抽取脐带血送检；儿科医师结合新生儿临床症状和实验室检查结果对新生儿进行HDN的评估和诊断，实现早发现、早诊断、早治疗，降低了HDN对新生儿的危害。