CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞在变异性鼻炎与支气管哮喘的差异性表达

杨萍 ，徐峰圣 ，陈沁

1.福建中医药大学附属人民医院（福建省人民医院）呼吸科，福建福州 350000；2.福建中医药大学，福建福州 350122；3.福建中医药大学中西医结合学院，福建福州 350004

哮喘是由多种细胞以及细胞组分参与的慢性气道炎症性疾病，临床表现为反复发作的喘息、气急，伴或不伴胸闷或咳嗽等症状， 同时伴有气道高反应性和可变的气流受限，随着病程延长可导致气道结构改变，即气道重塑[1]。 变应性鼻炎是机体暴露于变应原后主要由IgE 介导的鼻黏膜非感染性慢性炎症疾病[2]。 上述两种疾病存在高度关联性，临床研究结果证明，治疗变应性鼻炎可改善哮喘症状[4-5]。 在两者的发病过程中，调节性T 细胞具有重要作用。 该文于2020 年3 月—2021 年3月通过设立过敏性鼻炎组和支气管哮喘组， 检测两组外周血CD4+CD25+Treg 含量及Foxp3 水平并做比较，以了解过敏性鼻炎患者、支气管哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg 含量及Foxp3 水平是否下降，并对过敏性鼻炎患者和支气管哮喘患者外周血CD4+CD25+Treg 含量及Foxp3 水平进行相关性分析，以期探究过敏性鼻炎与支气管哮喘是否存在免疫递进关系， 为临床更好地认识过敏性鼻炎和哮喘是“一个呼吸道,一种疾病”提供理论依据， 并为临床提供一种早期发现过敏性鼻炎可能发展为哮喘的预测指标，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

便利选取福建中医药大学附属人民医院门诊确诊变异性鼻炎27 例，所有病例均符合变应性鼻炎诊断标准；支气管哮喘患者33 例，所有病例均符合支气管哮喘防治诊断标准；且27 例变异性鼻炎患者中常年性14例，季节性13 例；33 例哮喘患者中发作期18 例，缓解期15 例。 20 名健康者为对照组。

1.2 纳入标准

均符合诊断标准；年龄在14～90 岁；男女不限；受试者对研究知情同意，且自愿受试。

1.3 排除标准

不符合诊断标准者； 该次发病已用过相应治疗药物者；合并肺炎、支气管炎者；妊娠期、哺乳期妇女；具有严重的原发性心、肝、肾、血液疾病及糖尿病，或影响其生存的严重疾病者。

1.4 外周血CD4+CD25+Treg 含量及Foxp3 水平测定

从肝素钠抗凝全血1 mL 中经密度梯度离心法分离外周血单核细胞（PBMCs），调整细胞为 1×106／mL，取100 μl 细胞悬液加入 10 μl 抗人 CD4-FITC，CD25-PE单抗，室温避光染色30 min，用染色缓冲液洗涤1 次，再加入1 mL 经稀释的固定、 透膜剂，4℃暗孵40 min，加 2 mL 透膜缓冲液洗涤 2 次并重悬，加入 2 μl（2%）正常大鼠血清封闭15 min，再加入PE 标记的抗人FOXP3抗体 10 μl，4℃暗孵 30 min 后洗涤 2 次，加入适量的染色缓冲液混匀重悬， 应用流式细胞仪检测，CellQues 软件获取并分析数据， 用三色荧光抗体染色阳性细胞百分率记录结果。

1.5 统计方法

采用SPSS 22.0 统计学软件分析数据，计量资料用（）表示，比较采用t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者 CD4+CD25+Foxp3 及调节 T 细胞（Treg）水平比较

哮喘组患者外周血中CD4+CD25+Foxp3 低于鼻炎组和对照组，调节性T 细胞（Treg 细胞）水平显著高于鼻炎组和对照组患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者 CD4+CD25+Foxp3 及调节 T 细胞（Treg）水平比较（）

表1 两组患者 CD4+CD25+Foxp3 及调节 T 细胞（Treg）水平比较（）

组别CD4+CD25+Foxp3（%） Treg（KU/L）对照组（n=20）鼻炎组（n=27）哮喘组（n=33）7.88±1.68 5.60±1.28 4.77±0.93 20.58±16.83 174.58±110.59 460.21±320.47

2.2 CD4+CD25+Foxp3 在变异性鼻炎不同分型与哮喘不同分期表达比较

鼻炎组患者CD4+CD25+Foxp3 常年表达为 （5.08±0.78）%、季节性为（6.20±1.51）%，差异有统计学意义（t=2.448，P＜0.05）。 哮喘组患者 CD4+CD25+Foxp3 发作时表达为（3.23±0.65）%、缓解时表达为（4.72±1.18）%，差异有统计学意义（t=2.744，P＜0.05）。

2.3 变异性鼻炎不同分型与哮喘不同分期时调节T 细胞（Treg）水平比较

鼻炎组患者 Treg 常年表达为 （215.55±115.74）%、季节性为 （130.08±95.12）%， 差异有统计学意义 （t=2.087，P＜0.05）。 哮 喘 组 患 者 Treg 发 作 时 表 达 为（618.39±323.24）%、缓解时表达为（368.22±290.33）%，差异有统计学意义（t=2.317，P＜0.05）。

3 讨论

从病理生理上讲， 鼻与支气管及肺的关系非常密切[6-8]。 上呼吸道黏膜和下呼吸道黏膜有解剖上的连续性,过敏性鼻炎的上呼吸道炎症极易向下蔓延,导致过敏性支气管炎症和哮喘。 同时过敏性鼻炎的上呼吸道和哮喘的下呼吸道有相同的免疫抑制功能缺陷,过敏性鼻炎和哮喘也有相似的发病机制。 在最新的指南中，有无合并变应性鼻炎也被认为是哮喘严重程度重要的评估内容[9-10]。

大量研究显示，Treg 细胞作为免疫负调节的角色出现,在免疫耐受中发挥着举足轻重的作用[11-13]。特应性个体在遇到过敏原后不能正常地建立起免疫抑制状态,继而发生过敏性炎性反应。 有报道指出，Treg 细胞根据其来源、 表位特征及发挥效应的机制可划分为天然Treg 细胞（natural regulatory T cell）和获得性 Treg 细胞（adaptive regulatory T cell） 两大类， 据此定义，CD4+CD25+Treg 细胞属于前者[14]。 Foxp3,一个叉头状螺旋转录因子, 被报道是CD4+CD25+Treg 细胞特有的一个标记物,它表达在大多数的CD4+CD25+highT 细胞和少部分 CD4+CD25intT 细胞,且其与CD4+CD25+Treg 细胞表型和功能的维系密切相关。 CD4+CD25+Treg 细胞膜表面的 CTLA-4 和可溶性 TGF-β 提供免疫抑制信号已被证实。 通过对胸腺的CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞抑制机制研究表明Th2 细胞较Th1 细胞对 CTLA-4/TGF-β 介导的免疫抑制机制更为敏感。 由此可以得出CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞通过抑制Th2 在过敏性疾病中的优势发挥免疫抑制作用。 而在过敏性患者体内CD4+CD25+Treg 是有缺陷的，从而成为过敏性疾病发生的重要原因。 在小鼠和人的实验研究中有报道[15], CTLA-4和可溶性 TGF-β 的联合作用可阻断靶细胞 CD4+或CD8+CD25-T 细胞增生和功能实现。 通过对胸腺的CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞抑制机制研究表明，Th2 细胞较Th1 细胞对 CTLA-4/TGF-β 介导的免疫抑制机制更为敏感[16]。 由此可以得出 CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞通过抑制Th2 在过敏性疾病中的优势发挥免疫抑制作用。 而在过敏性患者体内CD4+CD25+Treg 是有缺陷的，从而成为过敏性疾病发生的重要原因。

该研究发现，在变应性鼻炎和哮喘患者的比较中，哮喘组患者外周血中 CD4+CD25+Foxp3 （4.77±0.93）%低于鼻炎组，调节性T 细胞（Treg 细胞）水平显著高于鼻炎组和对照组 （P＜0.05）。 鼻炎组患者 CD4+CD25+Foxp3 常年、季节性表达差异有统计学意义（P＜0.05）。哮喘组患者发作、 缓解时表达差异有统计学意义 （P＜0.05）。 鼻炎组患者Treg 常年、季节性表达差异有统计学意义（P＜0.05）。 哮喘组患者 Treg 发作、缓解时表达表达明差异有统计学意义（P＜0.05）。 这与陈菲菲等[14]学者在相关研究中得出， 哮喘患者外周血中CD4+CD25+Foxp3 （4.62±0.87）%低于变异性鼻炎，Treg （458.21±311.37）高于变异性鼻炎患者的结果相近。 表明获得适应性Treg 作为一种反馈形式， 调节传统的抗原特异性免疫反应。 FoxP3 是免疫抑制效应程序的转录调节因子。 既往有研究[17]分析过CD4+T 细胞群中FoxP3 的表达， 观察到的FoxP3 表达的增加可能是由于一小部分FoxP3+ Treg 细胞群的扩张或外周非调节性CD4+ T 细胞向Treg 的转化，该研究认为，持续的抗原刺激和频繁的气道炎症与FoxP3 表达的增加以及随后的Treg 细胞亚群的增加有关。 哮喘的过敏反应和症状表现明显强于过敏性鼻炎，CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞水平的差异性可能和这一趋势存在相关联系[18]。

综上所述， 外周血中CD4+CD25+Foxp3 及调节T细胞与患者的病情过敏性鼻炎与支气管哮喘存在免疫递进关系，CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞水平可能与过敏的严重程度有关。