高效液相色谱法测定那如三味丸中的没食子酸的含量

2021-09-27格根塔娜成志平郝美玲

北方药学 2021年4期

格根塔娜，成志平，李强，郝美玲

(1.包头市药物警戒中心，内蒙古包头 014030；2.包头市检验检测中心，内蒙古包头 014060；3.内蒙古自治区药品检验研究院，内蒙古呼和浩特 010020)

那如三味丸为蒙药制剂经验方，是由诃子、荜茇、制草乌三味中药组成。具有消“粘”，除“协日乌素”，祛风，止痛，散寒。用于风湿，关节疼痛，腰腿冷痛，牙痛，白喉等症的作用。其中诃子是三味药中的主要药味之一，具有涩肠止泻、敛肺止咳、降火利咽的功效[1]。据文献[2]报道，诃子中的主要化学成分为鞣质类、酚酸类、三萜类黄酮类等，酚酸类主要成分为没食子酸。参照《中国药典》2015年版一部“健民咽喉片”项下的含量测定方法，做了没食子酸含量测定，经分析方法验证，表明该方法重现性好，专属性强。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp型检测器，岛津SIL-10AF进样器，CLASS-VP工作站，sartorious BP211D型电子天平，METTLER TOLEDO AB104型电子天平，惠普6010紫外分光光度仪。

1.2 试剂与试药

没食子酸对照品(批号110831-200803，中国食品药品检定研究院)样品收集了内蒙古蒙药股份有限公司(批号1709027、1703087)、乌兰浩特中蒙药制药有限公司(批号1608029、1608030)、阜新蒙药有限责任公司(批号20170627、20171006)和内蒙古库伦蒙药公司(批号1608411、1608412)四个厂家共8批次，模拟样品为自制。甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

采用Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，以甲醇-0.1%磷酸(2∶98)为流动相条件摸索。流速1.0mL/min，柱温 30℃，进样量10μL，理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于2000。

2.2 溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

取没食子酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含70μg的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备

取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率300W频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤取续滤液，即得。

2.3检测波长的选择

取没食子酸对照品溶液，置紫外分光光度计上，在250nm～300nm波长范围扫描。结果没食子酸在273nm处有最大吸收，故选择273nm作为检测波长。

2.4线性关系考察

取没食子酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL含700μg的标准储备溶液(实际为：695.75μg/mL)。分别精密吸取上述对照品储备溶液0.10mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL至10mL容量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10μL注入液相色谱仪测定，以峰面积对浓度进行回归分析，结果没食子酸在0.069 6～1.739 4μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=32 166X+14 786，γ2=0.999 9

2.5 稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h进行测定，没食子酸在24小时内的峰面积积分值基本稳定不变，RSD为0.58%(n=6)。

2.6 重复性试验

取同一份供试品6份，按供试品溶液制备方法处理并测定没食子酸含量，6份供试品没食子酸平均含量为7.314mg/g，RSD为0.46%，表明方法重复性良好。

2.7 精密度

取没食子酸对照品(浓度为0.092 767 mg/mL)，连续进样6次，其RSD为1.2%(n=6),表明方法的精密度良好。

2.8 准确度试验

取已测定含量的同一供试品(含量7.314mg/g)9份，每份约0.25g，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，分成三组，每组三份。每组分别精密加入浓度为4.552mg/mL(实际为：25.26mg×0.901/5mL =4.552μg/mL)的没食子酸对照品溶液各0.2mL、0.4mL、0.6mL(约相当于供试品含有量的50%、100%、150%)及50%甲醇各50mL，按供试品溶液制备方法处理并测定，计算回收率，结果见表1。