云南贯众提取物急性毒性试验

杨美兰 张爱平 吕琼芬

摘要：为研究云南贯众提取物的急性毒性作用，用云南贯众提取物作为供试药对昆明系小白鼠进行一次性灌胃给药，测定药物的半数致死量（LD50），用Wistar大鼠进行云南贯众提取物的蓄积毒性试验和亚慢性毒性试验。结果表明云南贯众提取物是一种低毒、可靠且可在安全用量范围内使用的中药材。

关键词：云南贯众;提取物;急性毒性

中图分类号：S853.7文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2021.24.005

Acute Toxicity Test of Guanzhong Extract

YANG Meilan1，ZHANG Aiping2，LV Qiongfang3

（l.Qujing Veterinary Drug and Feed Supervision Institute，Qujing Yunnan 655000，China;2.Qujing Zhanyi District Animal husbandry and Veterinary Bureau，Qujing Yunnan 655000，China;3. Animal Husbandry and Veterinary Bureau of Huize County，Qujing City，Qujing Yunnan 655000，China）

Abstract：In order to study the acute toxicity of Yunnan Guanzhong extract，a single gavage dose of Yunnan Guanzhong extract was administered to Kunming strain mice as the test drug，and the LD50 was determined. The results showed that the extract of Yunnan Guanzhong is a low-toxic，reliable and safe herb for use within the dosage range.

Keywords：Yunnan Guanzhong，extract，acute toxicity

0引言

有研究利用云南貫众经甲醇分离提取得到的化合物山奈酚-3-a-L-（4-O-乙酰基）鼠李糖基-7-a-L-鼠李糖甘作为试验用药驱杀猪蛔虫，用药前后试验动物的生理生化指标没有明显的差异，说明使用云南贯众后没有对动物机体的肝肾功能产生损伤。为更深入了解云南贯众的毒性，特进行云南贯众的急性毒性试验[1-3]。

1材料与方法

1.1材料

（1）供试药物。云南贯众提取物：由中国科学院昆明植物研究所提供。

（2）供试动物。昆明系小白鼠（体重30±10 g）和6～7周Wistar大鼠：购自昆明医学院实验动物中心。

1.2方法

（1）药物分离提取。云南贯众用95%乙醇超声振荡提取，减压回收得到总浸膏状物后用环己烷、乙酸乙酯萃取，萃取液分别减压回收溶剂至干，得到环己烷部位，乙酸乙酯部位，经反复硅胶柱层析，分别用环己烷-乙酸乙酯-甲醇、环己烷-三氯甲烷系统梯度洗脱，薄层检测，合并相同组分。最后从乙酸乙酯部位得到一类黄酮类化合物，用化学方法和波普法鉴定该化合物为山奈素-3-a-L-鼠李糖基-7-a-L-鼠李糖甘。

（2）云南贯众提取物半数致死量的测定。预试验得出贯众提取物的试验小鼠全活和全死的剂量范围在5 000～12 000 mg/kg。急性毒性试验采用一次性灌胃给药（给药前禁食12h），灌胃给药最小剂量为12 063 mg/kg，剂量间组距为1：1.45。取小鼠50只，雌雄各半，随机分成5组。第1组至第5组分别灌胃给药12 063 mg/kg，17 491 mg/kg，25 362 mg/kg，36 775 mg/kg，53 324 mg/kg，给药后前6 h每小时观察一次小鼠的反应情况，之后每天观察1次，连续观察7 d，记录小白鼠毒性反应情况和死亡动物分布情况，记录小鼠死亡数。及时解剖死亡小鼠，记录病变情况，并计算其半数致死量（LD50）值和LD50的95%可信区间。

（3）云南贯众提取物蓄积毒性试验。取Wistar大鼠40只，体重120～150 g/只，雌雄各半，随机分为试验组和对照组，每组10只，按剂量递增法给药，第1天给予0.1 LD50剂量，每4天递增1.5倍，试验期为20 d，观察动物情况，计算药物蓄积系数K。

（4）亚慢性毒性试验。取Wistar大白鼠40只，体重120～150 g/只，按照雌雄各半随机分为4组，每组10只。I组为空白对照组。II、III、IV组为试验组，试验组分别以1/20 LD50、1/10 LD50和1/5 LD50的剂量灌服，连续给药30 d。空白组给予相同剂量的蒸馏水。每天观察、记录动物的精神状态、进食活动及两便情况。每周称重1次。

1.3半数致死量（LD50）计算

XK为最大质量浓度的对数值;d为相邻两组的质量浓度对数差;n为组数;∑Pi为死亡率之和。

2结果

2.1试验小鼠中毒症状

小鼠灌胃给药后，高剂量组小鼠在给药2 h后出现扎堆、不食、惊慌、呼吸困难等症状，5 h后陆续有小鼠死亡，在观察期内最低剂量组小鼠未见死亡，其余各剂量组都有部分小鼠死亡，最高剂量组在试验期内全部死亡。剖检死亡小鼠偶见心肺肿大，其余内脏器官未见肉眼可见的明显病理变化，其余存活小鼠不适症状逐渐减轻并恢复正常。

2.2急性毒性试验

通过小鼠灌胃试验，计算出云南贯众提取物的半数致死量（LD50），结果见表1。根据公式，计算得出云南贯众提取物的半数致死量（LD50）为22 617 mg/kg，LD50的95%可信区间为18 514 ～26 720 mg/kg。

2.3云南贯众提取物蓄积毒性试验

给药期间，试验动物的采食量、活动量、精神状态均无明显异常，至试验期结束，体重有明显增长。整个试验期未观察到动物有较明显且异常的表现，也未表现出明显的中毒症状。至20 d试验结束，试验动物无死亡，动物给药总剂量已达LD50的5.1倍，即药物蓄积系数K大于5，表明云南贯众提取物在动物体内无明显蓄积毒性作用。

2.4云南贯众亚慢性毒性试验

各组给药试验动物行为活动均正常，试验（II、III）组与对照组（I）相比体重增长正常，平均增重无明显差异（P>0.05），而试验IV组与对照组相比平均体重增长存在明显差异（P<0.05）。各试验组大鼠增重情况见表2。

3讨论

（1）试验用云南贯众提取物为试验用药，进行小鼠急性毒性试验，最终云南贯众提取物的半数致死量（LD50）为22 617 mg/kg，LD50的95%可信区间为18 514～26 720 mg/kg。

（2）云南贯众提取物蓄积毒性试验表明，在一定的给药范围内云南贯众未表现出明显的毒性。在亚慢性毒性试验中，大剂量使用云南贯众提取物虽然试验动物没有明显的行为活动异常，但是试验大鼠平均增重明显低于不用药组，解剖试验大鼠发现部分大鼠心脏和肺脏出现肿大，表明大剂量使用云南贯众对部分脏器有损伤。

（3）近年，绿色生态养殖技术得到了较大发展，无论是中草药饲料添加剂还是作为临床用药治疗动物疾病都被大力关注和发展。云南贯众作为药用植物具有低毒、无副作用、无污染等优点，可深入研究加以开发利用。

4结束语

本试验利用具有驱虫活性的云南贯众粗提物作为供试药物，研究云南贯众粗提物的急性毒性，以弄清云南贯众的药物毒性。通过小鼠急性毒性试验研究得到了该药物的半数致死量，经过药物蓄积毒性试验和亚慢性毒性试验表明在安全的用药范围内试验动物没有出现明显的药物中毒症状。由于试验条件有限，未能进行试验动物机体组织的药物残留检测及用药后对试验动物的生理生化指标的检测，对彻底弄清云南贯众的药物毒性留下了遗憾，同时也给后续的研究提供了思路。在当前国家禁用抗生素的大背景下，研究、开发、利用高效、低毒、无残留、无污染的中草药饲料添加剂将会得到大力发展，可加大对贯众的研究利用。

参考文献

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