虹彩病毒疫苗在鳜鱼脾肾坏死病防疫中的试验

孙 青，丁文玲，方丽君，冯桃健

(1.扬州市江都区水产技术服务站，江苏 扬州 225200；2.扬州市江都区渌洋湖水产养殖场，江苏扬州 225262)

扬州市江都区鳜鱼养殖起步于20世纪90年代末，经过20年多年的发展，鳜鱼已成为江都区水产养殖主要品种之一，也是江都区渔业乡村振兴的支柱产业。长期以来，江都区鳜鱼养殖的苗种主要依赖于南方，由于其亲本退化，苗种质量得不到保证，造成近几年来池塘养殖鳜鱼抗病力下降、成活率低、养殖效益严重下滑状况。据调查，2020年江都区邵伯镇鳜鱼养殖传染性脾肾坏死病(病原为细胞肿大虹彩病毒)，6－9月发病率70%以上，发病塘死亡率48%以上，直接经济损失达1 200万元，已成为该地区鳜鱼养殖的“头号杀手”。目前，该病生产上尚缺乏有效的防范机制。为探索鳜鱼传染性脾肾坏死病有效预防方法，2019－2020年笔者在中山大学生命科学学院指导下，在江都区渌洋湖水产养殖场鳜鱼养殖池塘，采用虹彩病毒灭活疫苗对鳜鱼大规格鱼种进行接种注射免疫，取得了较好的效果。现将疫苗接种方法及试验情况报告如下。

一、材料与方法

1.池塘选择

试验池塘选泽江都区渌洋湖水产养殖场鳜鱼养殖池塘。2019年试验池塘为5排6号、6排4号，对照塘为3排2号；2020年为4排3号、4排1号，对照塘为5排8号。池塘交通方便，有独立进排水系，水质无污染，水深1.6～1.8米，淤泥厚度小于30厘米。池塘池底平坦，水源充足，排灌方便，每3亩水面配1台3千瓦叶轮式增氧机。

2.池塘清整

冬季进行清淤、池埂修复、进排水系疏通等池塘改造工作，苗种下塘前30～45天用生石灰带水清塘，用生石灰120千克/亩化浆后全池泼洒，清除黄鳝、乌鳢、小龙虾等鳜鱼苗敌害。

3.苗种来源

4月25日－5月10日，鳜鱼苗种培育户从我国南方购进规格为1厘米左右的鳜鱼乌仔，先进行20～35天苗种培育，5月中下旬－6月上旬鳜鱼苗培育成大规格鱼种(5厘米左右)，开始向鳜鱼成鱼养殖户供应。试验组购进鳜鱼大规格鱼种后，先放养在靠近成鱼养殖池的鳜鱼饵料鱼池进行10～15天标粗，当鳜鱼规格达到8～12厘米时准备疫苗接种免疫。

4.流行病学调查

调查近几年发病史，主要调查上年度鳜鱼传染性脾肾坏死病发病状况、病原来源、发病鱼日龄及规格，发病池塘水温、水质、饲料情况，发病时间与病程、发病率与病死率，根据当年天气、水温、鳜鱼苗培育规格及池塘准备情况，预测当年鳜鱼传染性脾肾坏死病首次发病时间，确定疫苗接种时间。

5.杀虫消毒、抗应激

拉网注射前5天检查鱼体，如有寄生虫，应先用杀虫药杀虫，两天后用消毒药对鱼体消毒；无虫则直接用消毒药进行消毒。注射拉网前全池泼洒VC，提高鳜鱼苗对拉网、捕捞、注射等的抗应激能力。

6.疫苗接种

(1)疫苗的选择。①选择鳜鱼传染性脾肾坏死病病原细胞肿大虹彩病毒灭活疫苗；②应选择有资质厂家生产，明确标识疫苗名称、批准文号、生产批号、出厂日期、保存期、使用方法、保管容器、运输方法等；③应逐瓶检查疫苗瓶有无破损、瓶盖是否松动、疫苗瓶内容物的颜色、性状是否有异常，否则禁用；④选用乳剂疫苗为好。

(2)疫苗接种器具及工具的准备与处理。注射器、针头选用0～0.5毫升兽用连续注射器，注射针头根据免疫苗种规格选用6#、7#针头。免疫注射前，将连续注射器和针头反复清洗，开水煮沸15分钟备用。拉网需经曝晒3天以上，抄网、鱼桶、网箱、盛鱼器具使用前用3%～5%食盐溶液消毒。

(3)疫苗的保存和使用。疫苗购进后应及时放入冰箱保存，保存温度为4℃左右，保存期限越短越好，最长不超过6个月，保存过程中应经常翻动玻璃瓶装的疫苗。注射使用前，将疫苗从冷藏箱中取出，待疫苗温度升至接近当日温度时才可使用，同时充分摇匀。

(4)鳜鱼疫苗接种条件及准备。5月中下旬，水温15～25℃，选择无风、晴好天气，将鳜鱼苗拉网至背风遮阳的近岸处，暂养在靠近增氧机的网箱中并开动增氧机。待接种免疫的鳜鱼种应体质健壮、无病，已发病的鳜鱼不能注射疫苗。调整注射器注射刻度，疫苗瓶安装排气针，将疫苗瓶、注射器、连接导管内空气排空。

(5)疫苗注射方法。一人将暂养在网箱中的鱼(300～500尾)分批赶向网箱一端，鱼体仅背鳍露出水面。疫苗瓶悬挂于待免疫的鱼网箱上方，另一空网箱靠近并固定于暂养鱼网箱一侧。注射时一只手拿注射器，另一只手抓鱼，针头朝鱼头方向，并与鱼体成30～45°刺入鱼体胸鳍基部或背鳍基部，以胸鳍基部为佳。注射疫苗的部位应明显见到疫苗进入肌肉的“白线”痕迹。注射剂量为10厘米以下的苗种0.08毫升/尾、10厘米以上苗种0.1毫升/尾。注射时应做到“稳、准、快”，负责折网人员应注意鱼的活动情况，一旦发现小部分鱼浮头要及时泼水或提高水位。连续注射两小时后，将已注射的鱼及时移到附近已清塘消毒的成鱼养殖池。

7.养殖管理

(1)疫苗接种注射前后鳜鱼池四周要拦网，阻挡鸟类觅食，调节水质，泼洒VC、果酸等抗应激制剂。鳜鱼接种后放入成鱼池中第1天即用聚维酮碘清毒，连用2天，2周后加注新水。

(2)合理投喂饵料鱼，饵料鱼以鳜鱼2～3天吃完为好，前期用鲫鱼苗作饵料鱼，7月后改用广东鲮鱼，发病季节适当减少投喂，以减少鳜鱼发病。

(3)定期交替使用EM菌、芽孢杆菌、粪链球菌等生物制剂及底质改良剂，常开增氧机，保持溶氧充足；养殖后期水质老化，氨氮、亚硝酸盐偏高，应减少鳜鱼饵料投喂量，及时降解池水中的有害物质，适当加注新水、换水。

(4)鳜鱼养殖期间斜管虫病危害比较重，水温在20～25℃时应勤采鱼样，用显微镜检查斜管虫，镜检一旦发现斜管虫，立即用药；梅雨季节鳜鱼出血病也会经常发生，应及时预防、治疗。

8.注意事项

虹彩病毒疫苗只能预防传染性脾肾坏死病，不能用作治疗。当发现池塘中有疑似传染性脾肾坏死病鱼时就不能接种疫苗。接种前应停食24小时以上。疫苗一旦开瓶应一次用完，用过的疫苗瓶、器具和未使用完的疫苗应进行无害化处理。如意外将疫苗污染到人的眼、鼻、嘴中，应及时对患部采取清洗、消毒等措施。

9.苗种放养

鳜鱼试验塘、对照塘苗种放养情况见表1。

表1 试验塘、对照塘苗种放养情况

二、试验结果

试验塘鳜鱼上市时间在9月30日－10月7日，上市规格0.55～0.6千克/尾，基本达到“标鱼”标准。2019年试验塘平均售价50元/千克、单产800千克/亩、利润7 406元/亩、成活率92.5%，对照塘平均售价46元/千克、单产351千克/亩、利润-2 711元/亩、成活率52%；2020年平均售价60元/千克，试验塘单产644千克/亩、利润1.17万元/亩，对照塘单产337千克/亩、利润1 100元/亩、成活率45%。试验塘、对照塘投入与产出情况见表2。

表2 试验塘、对照塘投入与产出情况

三、讨论与分析

每年5－6月的水温升幅不同，病害发生时间可能提前或推迟，应注意调查池塘往年发病史，根据当年天气、水温实际情况，准确把握鳜鱼苗种接种时间，一旦时机适宜，立即准备接种注射，如发现塘鱼有疑似传染性脾肾坏死病，应取消该塘鳜鱼疫苗接种计划。

试验塘鳜鱼苗种经虹彩病毒疫苗接种注射，15天后产生免疫抗体，成活率达92%以上，而未接种注射的鳜鱼苗种感染虹彩病毒平均发病率70%以上，对照塘发病死亡率49%以上，未经接种免疫的鳜鱼苗种养成商品鱼平均死亡率34.3%以上。

鳜鱼苗种适宜接种规格在8～12厘米，接种苗种规格小，注射操作难度大、应激死亡量增加；接种苗种规格大，时间相对推迟，接近发病状态，鳜鱼未来得及产生抗体就开始发病，易造成免疫保护失败，风险较大。同一个池塘鳜鱼应全部免疫，应采取将接种免疫后的鳜鱼换塘放养的方式。如果鳜鱼接种免疫后仍放养在“标粗”塘中，原塘中鳜鱼拉网捕捞不能全部捕尽，未接种免疫的鳜鱼还会发病造成病死鱼损失，特别在8月下旬后传染性脾肾坏病第二波发病时，鱼的规格大、死亡数量多，发病塘难以坚持到中秋、国庆节捕捞上市，一般发病7～14天即被迫干塘出售，部分鳜鱼未达上市规格，售价不高，经济损失较大。