不同提取方法对二翅六道木嫩叶凝胶提取率的研究

牛 睿，方欢乐，韩慧恩，何焕焕，罗 航

（西安培华学院医学院，陕西西安 610116）

二翅六道木为忍冬科植物六道木属落叶灌木，主产于陕西、湖北等地。叶子卵形，顶端渐尖，底部楔形或钝形，叶子边缘是稀疏锯齿状，花为红色的花冠，生于侧小枝顶部的叶腋处[1]。根据陕西商洛《山阳县志》记载，陕西商洛将此叶作为“神仙粉”食用已有上百年历史[2]。研究发现，二翅六道木嫩叶中的蛋白质、脂肪、粗多糖、果胶、钾、钙、铁、锌、硒、泛酸、β-胡萝卜素、烟酸含量均较高[3]。其中，锌和硒有助于提高人体免疫力及增强记忆力。二翅六道木的嫩叶当中含有多种氨基酸，其中以谷氨酸含量最高，具有较高的营养价值[4]。

本文研究水提醇沉法和超声波辅助提取法对二翅六道木嫩叶凝胶提取率的影响，通过检测其果胶含量，对比分析最适宜的提取方法，为二翅六道木的叶的应用，提供一定的参考价值。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

二翅六道木嫩叶、D-半乳糖醛酸、咔唑、95%乙醇、无水乙醇、浓硫酸、盐酸、30%过氧化氢、水杨酸、焦性没食子酸、硫酸亚铁。

1.2 试验仪器

电热恒温干燥箱（H2674，北京科伟永兴仪器有限公司）；恒温水浴锅（HH-1，金坛市华峰仪器有限公司）；超声波萃取机隔音箱（Xinyi-2400C，宁波新艺超声设备有限公司）；电子天平（JA1003，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；多功能粉碎机（SL-250，浙江省永康市松青五金厂）；循环水式多用真真空泵（SHB-III，上海瑞智仪器有限公司）；紫外可见分光光度计（UV-2102C，上海科晓科学仪器有限公司）；台式高速离心机（TGL-16C，上海利鑫坚离心机公司）；冷冻干燥机（LGJ-40G，四川福瑞仪器科技发展有限公司）；酸度计（PHS-25，上海仪电科学仪器股份有限公司）

1.3 试验方法

1.3.1 样品处理

用粉碎机将二翅六道木的嫩叶粉碎成粉末，用100目细筛筛过后，将其粉末混合均匀，于50 ℃烘干备用。

1.3.2 水提醇沉法

取10.0 g二翅六道木干燥嫩叶粉，用1 000 mL热水于90 ℃恒温水浴锅中搅拌均匀，提取90 min，用纱布过滤，滤液中加入1.5 g活性炭，将滤液放在恒温水浴锅中搅拌提取90 min，脱色10 min，趁热用滤纸过滤。滤液用旋转蒸发仪进行减压浓缩至100 mL，向浓缩液中加入100 mL的95%乙醇，浓缩液呈凝胶状，使其沉淀完全，然后用滤纸过滤，将凝胶沉淀物用95%乙醇洗涤3次,洗涤后的凝胶放在烘箱中烘干，称其凝胶物质量，计算凝胶物提取率[5]。

提取率=凝胶物质量/10×100%

1.3.3 超声波提取法

称取10.0 g预处理后的二翅六道木干燥嫩叶粉末，按照1∶20的料液比，加入pH为1～2的盐酸溶液中，于40 ℃下超声萃取15 min，超声功率设为1 200 W，萃取后趁热抽滤，滤液用旋转蒸发仪在65 ℃条件下减压蒸馏，使得滤液浓缩至30 mL为止。向滤液中缓慢加入50 mL的95%乙醇溶液，可见絮凝物析出，静置4 h后抽滤，收集沉淀。用95%的乙醇溶液洗涤沉淀物，将沉淀物冷冻干燥72 h，取出后称取凝胶物质量，计算凝胶物提取率。

提取率=凝胶物质量/10×100%

1.3.4 半乳糖醛酸的鉴定

称取0.05 g二翅六道木嫩叶凝胶提取物于容量瓶中，加5 mL水搅拌使其溶胀，用稀盐酸调整溶液pH值为2，于95 ℃恒温水浴中搅拌水解60 min，之后1 500 r/min离心l5 min，取部分上清液与咔唑试剂反应，若生成紫红色化合物，则说明水解液中含有半乳糖醛酸。

1.3.5 半乳糖醛酸标准曲线的绘制

精准称取半乳糖醛酸10 mg于烧杯中，用少量蒸馏水使其充分溶解，再用蒸馏水将其定容到10 mL的容量瓶中，摇匀，得到1 mg/mL的半乳糖醛酸标准液。使用1 mL的吸量管分别吸取配制好的半乳糖醛酸标准溶液0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL和0.9 mL，分别用蒸馏水将吸取不同含量的半乳糖醛酸标准液定容至10 mL，摇匀，得到一组浓度依次为0～0.9 mg/mL的半乳糖醛酸标准溶液。

分别吸取不同浓度的标准溶液1 mL于试管中，每个试管分别加入6 mL的浓硫酸，充分混合，随即将试管放进冰浴中冷却，使温度降至室温。然后在水浴锅中70 ℃水浴加热10 min，迅速用流动水冷却至室温。每个试管中加入现配的0.5 mL的0.15%的咔唑试剂，充分混匀，放置室温下30 min后，将待测液于530 nm处对其进行比色，测定其吸光度，得到一组不同浓度待测液的吸光度。以半乳糖醛酸含量（μg/mL）为横坐标，吸光度为纵坐标，得到半乳糖醛酸的标准曲线。

1.3.6 样品的测定

准确移取1.00 mL浓度为0.1 mg/mL的果胶溶液于试管中，向试管中加入6 mL浓硫酸，充分混合，将试管放在冰块中，使其温度降至室温后，于85 ℃的水浴锅中水浴加热10 min，迅速用流动水将每个试管冷却至室温。然后分别向试管中加入现配制好的0.5 mL 0.15%的咔唑试剂，混合均匀，在室温下放置30 min，将待测液于530 nm处测定其吸光度，对照半乳糖醛酸的标准曲线图，计算出样品中的半乳糖醛酸含量。

2 结果与分析

2.1 半乳糖醛酸的标准曲线

由1可知，其回归方程为y=0.008 7x＋0.011，相关系数R²=0.995 9.

图1 半乳糖醛酸的标准曲线

2.2 样品的测定

由表1可知，在相同条件下，超声波提取法的凝胶提取率为20.4%，水提醇沉提取法凝胶提取率为17.3%。二翅六道木嫩叶凝胶提取用超声波辅助提取方法更好。咔唑硫酸法测定两种提取方法中样品的半乳糖醛酸含量也不同，超声波提取样品中的半乳糖醛酸含量高于水溶醇沉提取的半乳糖醛酸含量，其测定的半乳糖醛酸含量为41.2%。因此，与水提醇沉提取方法相比，超声波提取法提取的凝胶提取率和样品中的半乳糖醛酸含量均显著增高。

表1 不同提取方法的二翅六道木嫩叶凝胶测定结果

3 讨论

根据食品化学试验研究中记载，测定食品中果胶含量常选用半乳糖醛酸进行检测。将果胶水解，得到的半乳糖醛酸可在强酸环境中与咔唑试剂产生缩合反应，产生紫红色化合物，其呈色深浅与半乳糖醛酸含量成正比，由此可进行比色定量测定果胶的含量。选择530 nm作为吸收波长，选用紫外可见分光光度法测定其吸光度，进而得到果胶的含量。

经过研究发现，在相同条件下，超声波辅助提取法能显著提高二翅六道木嫩叶当中的凝胶成分的提取率及半乳糖醛酸含量，差异明显。超声波提取法可以使提取凝胶的时间降低、提高凝胶的提取率、节约成本、提高效益。且超声波提取法能够有效控制提取温度，降低高温对果胶成分的碳化改变。研究发现，二翅六道木果胶具有较强的抗氧化活性，可以开发成天然抗氧化食品进行推广，提高当地种植，给社会发展带来更多的经济效益。