分光光度法测定药品中D-氨基葡萄糖盐酸盐的探析

丁振中 张超 龚劲松 方祥

摘要：我国经济发展推动人们经济收入水平的提高，进而提升生活品质需求。作为与人们人体健康相关的药品，自然也成为人们重点的关注内容。本文以该内容为切入点，使用分光光度法对药品中D-氨基葡萄糖盐酸盐测定，无论是精密度还是重复性，其RSD均符合要求。该方法操作简便，结果稳定且可靠，可以用于实际测定作业，旨在为我国药品测定贡献力量。

关键词：分光光度法;药品测定;D-氨基葡萄糖盐酸盐

【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2021）06-117-01

前言：D-氨基葡萄糖盐酸盐，是通过盐酸处理甲壳素，完成降解作业的还原糖，可以在摄入后于胃部将其从化合态转化为游离态，通过被肠道吸收提供人体养分。而我国多将氨基葡萄糖申报成药物，而甲壳素则申报成保健食品，又因为D-氨基葡萄糖盐酸盐可以对关节功能起到良好效果，所以测定其在药品中含量则是成为我国药物研究重点内容。

1仪器与药品

1.1仪器

本试验涉及到三种仪器，分别是由天津市德安特传感技术有限公司生产的高精度电子天平，试验精度可控制在十万分之一;由Multiskan Sky生产的紫外分光光度计;由江苏天翎仪器有限公司生产的恒温水浴锅。

1.2药品

本文使用分析纯主要有透明液体的乙酰丙酮（C5H8O2）、淡白色粉末对二甲氨基苯甲醛（C9H11NO）、白色碳酸钠（Na2CO3）、无色清澈液体盐酸（HCL）、无色无醛乙醇均设置成;为避免发生其他干扰因素影响试验结果，本文使用水均为超纯水[1]。

称取2毫升的乙酰丙酮，向其加入每升0.5摩尔的碳酸钠溶液，将液体增加到50毫升，充分摇匀混合，制成乙酰丙酮试液。因为其会产生化学反应，所以仅在临使用前完成配置即可。

称取0.8克对二甲氨基苯甲醛，将其置入容量瓶中，并加入15毫升的无醛乙醇与盐酸，充分摇匀混合，制成对二甲氨基苯甲醛试液。

D-盐酸氨基葡萄糖对照品则要选择由中国食品药品检定研究院认可产品，生产批号为140649-201505。

应用电子天平称取已被105摄氏度高温充分干燥至恒重，D-盐酸氨基葡萄糖对照品10.13毫克，将其放置在10毫升规格容量瓶中，将超纯水注入其中，并定容至刻度，将溶液充分摇匀后，作为储备液备用。在使用时则量取1毫升储备液，并将超纯水注入其中，定容至10毫升，保证其浓度是每毫升101.3微克，即本试验使用的对照品溶液[2]。

样品则由某医药企业提供，现将编号分别设为1、2、3。

2供试品溶液

2.1提取

采用电子天平称取已经提前充分混合0.07克供试品，并将其放置在100毫升量瓶中，向其加入超纯水，将样本充分溶解后，向量瓶注入超纯水，充分稀释，并保持刻度位置，充分摇匀，无固体物质后滤过[3]。量取1毫升滤液，将其置于10毫升量瓶内，再次加入超纯水，在稀释至刻度摇匀，制成供试品溶液。

2.2测定

量取3毫升供试品溶液，将其分别在25毫升带有橡胶软塞的比色管内，向其补加超纯水到5毫升，并將其加入1毫升乙酰丙酮，充分摇匀后放置于沸水浴，保持25分钟恒温加热，从沸水中取出，直接将其放入冰水，让试液充分冷却，再向其加入3毫升的无醛乙醇后，在60摄氏度水浴条件，保温时间控制在10分钟，再向溶液中滴入1毫升二甲氨基苯甲醛试液，充分、剧烈完成振摇，再次放回60摄氏度的水浴条件，保温时间控制在60分钟，将其自然冷却到室温。使用紫外分光光度计，针对525纳米波长完成测定，而对照组选择空白试剂，使用1厘米比色皿对供试品溶液的吸光度值进行测定。

3实验方法和结论

3.1线性关系

以0.2毫升为区间，从0至1.2毫升分别设置7个区间，将对照品溶液精准量取，并使用带有橡胶软塞比色管作为存放仪器，加入超纯水到5毫升。使用紫外分光光度计，对525纳米波长完成测定，而对照组选择空白试剂。将D-氨基葡萄糖盐酸盐的质量作为横坐标，单位为微克，将吸光度以纳米为单位设置纵坐标，以数据为标准，将标准曲线进行描绘，观察其变化情况。而回归方程则要设定成，相关系数设为0.9991。通过观察曲线与分析结果，可以发现D-氨基葡萄糖盐酸盐均处于20.27微克至121.57微克范围内，线性关系保持良好状态。

3.2重复性试验

重复性实际结果，会因为被测对象存在不稳定特点，造成实际结果产生影响。选择批号相同，并完成事前混合供试品，精密称取6份0.07克的内容物，将其放置于100毫升容量瓶内。在经过严密计算后，获得D-氨基葡萄糖盐酸盐相关数据，其平均含量为每100克供试品有33.4克纯物质，而RSD（相对标准偏差）则是0.90%。通过研究结果，可以证明使用该方法测定含量具有较好重复性。

3.3加标回收率

加标回收率，即将标准物质加入样品中，并以样品相关处理步骤，将获得结果和理论数值进行比较的一种方法。而使用分光光度法时，会使用校准曲线：

获得公式变形：

而使用物质量对加标回收率完成计算，则需要将其进一步变形成：

其中：与分别是加标试样与原始试样实际吸光度，而则是曲线斜率。而应用公式（4）具有前提条件，即， 是空白对照组吸光度，而是曲线截距。在时，则要应用公式（3）完成加标回收率， 避免出现回收率过大，造成正误差影响实际数据。

选择批号相同，并完成事前混合供试品，精密称取9份0.035克的内容物，分别制成低中高（0.07克样品含有80%、100%、120%纯物质）三个档次加标试验，每个档次需要3份样品，并将其加入适量D-氨基葡萄糖盐酸盐的对照品，分析对实际回收率。

整理试验结果，低浓度回收率在102.8%至103.7%之间波动，平均回收率可达103.4%，RSD为0.48%;中浓度回收率在102.6%至103.8%之间波动，平均回收率可达103.1%，RSD为0.61%;高浓度回收率在100.6%至102.5%之间波动，平均回收率可达101.7%，RSD为1.1%。应用该方法在回收率方面具有较好表现。

3.4检出限

以GB/T 5009.1-2003《食品卫生检验方法理化部分总则》为标准，检出限需要设置成空白值的三倍条件，将其作为标准偏差使用，同时要针对检出限完成二十次以上的测定，而吸光法则以IUPAC相关规定进行测试[6]。使用浓度对检出限进行表示，从而借助特定步骤完成最低浓度检测。其表达式为：

其中：是对照组平均值，为针对校准曲线处于低浓度斜率，则为对照组标准偏差，而则是置信浓度常数，通常情况下取3作为计算标准，而在高斯分布中，为3则是99.6%。整理数据后，可以发现20次吸光度从0.000至0.011范围内波动，为0.00342，为0.00706，检出限则为1.5微克。

3.5精密度

作为准确度的先行条件，精密度并没有与准确度有直接关系，后者是保证前者数据良好先决条件。即后者数据不佳，前者质量也会下降，而后者数据良好，前者质量并能与其拥有线性关系。出现这种情况，代表测定并没有太大随机误差，但却拥有可能具有严重影响数据的系统误差。

选择标准曲线的第四显色点溶液，以上文提到方法采用连续6次，对吸光度完成测定计算，可以计算溶液具有0.512平均吸光度，0.10%RSD，该试验拥有较好精密度。

3.6样品含量

对于三批供试品充分混合，并称取0.07克内容物，将其放置在100毫量瓶内，供试品溶液相关制备要求严格落實操作，并对计算样品的D-氨基葡萄糖盐酸盐计算含量。编号1每100克样品平均含量为33.4，编号2每100克样品平均含量为33.5，编号1每100克样品平均含量为33.3。

经过如上试验，从结果分析，使用分光光度法，对于药品D-氨基葡萄糖盐酸盐的含量测定具有良好效果。

结论：D-氨基葡萄糖盐酸盐当前应用检测方法较多，但是医学界都在积极寻求可以具备良好适用性，使用便利且结果准确的高效分析法。本文提出分光光度法，虽然拥有设备使用简单、检测成本投入较低等特点，但是却也存在时间控制较为严格、需要较强温度控制严苛试验条件。在未来应用中仍需要积极研究新型测定方法，或在现有基础上改进升级，推动我国医药检测更进一步。

参考文献：

[1]蔡泽宇，石骏，杨政芳，等.HPLC-ELSD法测定氨糖软骨素中硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖的含量[J].中南药学，2019，17;167（12）：136-139.

[2]骆治琼.滴定分析法和分光光度法测定保健食品中D-氨基葡萄糖盐酸盐含量[J].化工设计通讯，2019，045（007）：111-112.

[3]宫艳艳，钱亮亮.高效液相色谱-蒸发光法测定保健品中盐酸氨基葡萄糖的含量[J].食品安全质量检测学报，2019，10（05）：1336-1340.