HPLC 同时测定参茸补酒中6 种成分

2021-09-17万勇钟国豪谢二磊

药品评价 2021年14期

万勇，钟国豪，谢二磊

江西省药品检查员中心，江西南昌 330029

参茸补酒是由人参、白芍、甘草、当归、川芎、何首乌等15 味中药组成的复方制剂，具有补益气血功效，用于身体虚弱，气血两亏，脑力不足，精神疲倦等［1］。方中白芍具有养血调经、柔肝止痛等功效［2］，白芍中活性成分芍药苷内酯、芍药苷具有保肝、抗炎、抗抑郁等方面的药理作用［3-7］；甘草具有补脾益气、祛痰止咳、调和诸药等的功效［8］，其主要活性成分甘草苷和甘草酸具有抗病毒、抗肿瘤、抗抑郁等药理作用［9-11］；何首乌的活性成分二苯乙烯苷具有抗炎、预防帕金森病和阿尔茨海默病等药理作用［12-14］；阿魏酸作为当归和川芎共同的活性成分，具有抗血栓、降血脂等作用［15-16］。目前，对参茸补酒质量研究仅为对阿魏酸或芍药苷的测定［17］，较为简单，为此，本实验建立了同时测定芍药苷内酯、二苯乙烯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、甘草酸6 个成分含量的高效液相色谱法（HPLC），为提高参茸补酒的质量标准提供参考。

1 材料

1.1 仪器

安捷伦公司Agilent 1260II 型高效液相色谱仪；瑞士梅特勒-托利多公司XSE－205 电子天平（十万分之一），ME204TE 电子天平（万分之一）。

1.2 试剂与试药

2,3,5,4′四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（二苯乙烯苷，批号110844-201915，含量：90.7%）；芍药苷（批号110736-201943，含量：95.1%）；阿魏酸（批号110773-201915，含量：99.4%）；甘草苷（批号111610-201607，含量：93.1%）；甘草酸铵（批号110731-201619，含量：93.0%）均购自中国食品药品检定研究院；芍药苷内酯（批号DST190912-071，含量：98.0%）购自乐美天医药科技有限公司。参茸补酒（批号200190901、200190902、200190903，江西金顶药业有限公司，规格：100 mL）。乙腈（Sigma公司）为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Inert Sustain Swift C18 色谱柱；进样量10 μL；流动相乙腈（A）-0.1%磷酸（B）梯度洗脱（0～25 min，12%A；25～42 min，12%～37%A；42～65 min，37%A；65～66 min，37%～12%A；66～75 min，12%A）；柱温30 ℃；体积流量1.0 mL/min；0～25 min 在230 nm 检测芍药苷内酯、芍药苷，25～42 min 在310 nm 检测阿魏酸、甘草苷、二苯乙烯苷，42～75 min 在250 nm 检测甘草酸。

2.2 溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备精密称取对照品芍药苷内酯16.78 mg、芍药苷20.00 mg、阿魏酸10.28 mg、甘草苷19.95 mg、二苯乙烯苷19.68 mg、甘草酸铵20.10 mg（甘草酸质量=甘草酸铵质量/1.020 7），置于50 mL 量瓶中，50%乙醇定容至刻度，摇匀，分别精密吸取10、20、2、7、4、10 mL，置于250 mL 量瓶中，50%乙醇定容至刻度，摇匀，即得（浓度分别为13.156、30.432、1.645、10.401、5.731、14.651 μg/mL）。

2.2.2供试品溶液精密量取参茸补酒2 mL，置10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，摇匀，过滤，即得。

2.2.3阴性对照溶液按照参茸补酒的处方，分别制备缺白芍、甘草、当归和川芎以及何首乌的阴性对照溶液，按“2.2.2”项下方法制备，即得。

2.3 专属性试验

吸取对照品、供试品、阴性对照溶液各10 μL；在“2.1”项色谱条件下进行测定，色谱图如图1。分离度良好（R>1.5），且阴性无干扰，表明该方法专属性良好。

图1 各成分HPLC色谱图：A.对照品；B.供试品；C.缺白芍阴性样品；D.缺当归、川芎阴性样品；E.缺甘草阴性样品；F.缺制何首乌阴性样品

2.4 线性关系考察

精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液1、2、5、10、20 µL，在“2.1”项色谱条件下分析，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线并进行回归计算，得到6 个成分的回归方程，结果见表1。

表1 各成分线性关系

2.5 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10 μL，按“2.1”项色谱条件下连续进样6 次，测定峰面积，结果芍药苷内酯、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、二苯乙烯苷、甘草酸峰面积RSD（n=6）分别为0.41%、0.09%、0.09%、0.33%、0.09%、0.11%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.1”项色谱条件，于0、2、4、8、12、16、24 h 分别进行测定，测得芍药苷内酯、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、二苯乙烯苷、甘草酸峰面积的RSD（n=7）分别为0.10%、0.23%、0.25%、0.17%、0.11%、0.43%，表明样品在24 h 内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批供试品（批号20190901）6 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件进行测定，测得芍药苷内酯、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、二苯乙烯苷、甘草酸平均含量（n=6）分别为0.38%、0.20%、0.54%、0.34%、0.34%、0.41%。

2.8 加样回收率试验

精密量取已测得含量的同一批供试品（批号20190901）6 份，各1 mL，按100%水平精密加入“2.2.1”项下对照品溶液5 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，并按“2.1”项色谱条件进行测定，计算平均回收率，结果见表2。

表2 各成分加样回收率试验结果

2.9 耐用性试验

考察了CAPCELL PAK C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）；ACE Excel C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）；Inert Sustain Swift C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱，结果3 根色谱柱色谱峰分离情况均无明显差别，表明耐用性良好。