血清NSE、ProGRP 与肺癌患者病理学特征及化疗效果的关系

冷 涛，杨贵萍，吴进军

肺癌（lung cancer，LC）的整体发病率和死亡率均明显上升，全国肿瘤登记中心统计显示，肺癌每年的新发病例数量超过70 万人，且存在逐年增高的趋势［1］。 肺癌可导致恶性肿瘤患者短期内病情恶化速度的增加，影响患者预后［2］。 如何评估肺癌的严重程度、制定合适的治疗方案及评估疗效在综合治疗肺癌方面具有重要意义。 目前的研究结果显示，血清学肿瘤指标能够在肺癌患者的诊疗和病情评估工作提供一定的参考，指导临床上预后和高危随访工作。 神经源性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）的表达上升能够催化磷酸甘油的降解，参与到丙酮酸的代谢，影响肺泡上皮细胞的异常代谢， 提高上皮细胞的增殖速度， 大量研究也显示了NSE 在肺癌患者外周血呈高表达，可用于辅助诊断肺癌［3-4］。胃泌素释放肽前体（pro-gastrin-releasing peptide，ProGRP）既往认为其主要存在在消化道腺体上皮组织中，近年来发现在呼吸系统上皮细胞中也存在 ProGRP 表达［5］。 ProGRP 的表达上升，能够反应上皮细胞DNA 增殖和分裂的速度，提高上皮细胞的细胞周期调控异常的风险［6］。 肺癌按病理学类型可分为鳞癌、 腺癌和小细胞癌3 类， 尽管大量研究分析了NSE、ProGRP 在肺癌高表达的意义， 但NSE、ProGRP 与各类肺癌的病变的关系还尚不完全明晰。 为揭示NSE、ProGRP 的表达与肺癌及与各类病变的关系， 本次研究选取2017 年1 月 ~2018 年 1 月确诊的肺癌患者 180 例，探讨 NSE、ProGRP 的表达及其与肺癌患者临床病理特征和治疗预后的关系。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2017 年1 月 ~ 2019 年1 月云梦县人民医院确诊的肺癌患者180 例 （肺癌组）、 健康体检对象180 例（对照组）。 肺癌组，年龄 44 ~ 76 岁，平均年龄（60.3 ± 11.6）岁 ；男 102 例 、女 78 例 ；体 质 量 指 数 （21.56 ± 1.36）kg/m2；TNM 分期Ⅰ期 44 例、Ⅱ期 60 例、Ⅲ期 58 例、Ⅳ期 18 例；病理学腺癌80 例、鳞癌36 例、小细胞肺癌64 例；其中未接受手术治疗、仅接受化疗的患者有76 例。 对照组，年龄45 ~ 78岁，平均年龄（61.6 ± 10.9）岁，男 96 例、女 84 例；体质量指数（21.58 ± 1.45）kg/m2。 两组研究对象的年龄、性别和体质量指数比较差异无统计学意义（P ＞0.05）。

纳入标准：（1） 肺癌患者的诊断标准依据人民卫生出版社《诊断学》、《外科学》第八版中的标准；（2）经胸部 CT、MRI检查初步确诊，具有影像学可见的实体病灶，经纤支镜病理学检查或术后病理学检查证实；（3）年龄≤79 岁；（4）均为首诊患者；（5）对照组为健康体检志愿者；（6）本研究获得医学伦理委员会的批准，患者的各项基础资料完整。

排除标准：（1）长期使用免疫抑制剂；（2）既往具有放化疗病史；（3）转移性肺癌、其他部位伴有恶性肿瘤；（4）伴有结缔组织疾病、强直性脊柱炎、风湿性疾病的患者。

1.2 方法 采集患者入院后24 h 内或者治疗后6 ~ 8 h 内的肘部静脉血4 ml，离心半径10 cm、1 500 r/min 离心15 min，收集上清液， 在每个聚苯乙烯板中加入上述液体0.1 ml，4℃过夜孵育，加入磷酸盐缓冲液洗涤3 次，每次3 min，在每个聚苯乙烯板孔中加入 NSE、ProGRP 抗体（1∶800，购自南京伯斯金生物公司），37℃孵育30 min，加入磷酸盐缓冲液洗涤 3 次，每次 3 min，每孔中加入 TMB 溶液底物 0.1 ml，37℃、20 min，加入 2 mol/L 硫酸 0.05 ml 终止反应，采用 DG5033A酶标仪（南京华东电子科技公司）进行OD 值检测。

1.3 临床效果评价 近期疗效评价标准参照WHO 实体瘤疗效评价标准分为完全缓解（complete response，CR）、部分缓解（partial response，PR）、疾病稳定（stable disease，SD）、疾病进展（progressive disease，PD）。 CR：可见病灶完全消失，维持一个月以上。 PR：肿瘤最大直径及最大垂直直径的乘积缩小达到50%以上。 SD：肿瘤最大直径及最大垂直直径的乘积缩小＜50%，增大＜25%。PD：患者出现1 个或多个病灶的肿瘤最大直径及最大垂直直径的乘积> 25%。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0 统计软件，计量数据表述采用（）表示，组间比较采用t 检验、单因素方差分析法，计数资料组间比较采用χ2检验， 以P ＜0.05 说明差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组研究对象血清NSE、ProGRP 水平比较 肺癌组患者 血 清 NSE、ProGRP 为 （29.41 ± 13.30）ng/L 、 （133.12 ±86.72）ng/L， 均显著高于对照组（4.52 ± 1.40）ng/L、（29.81 ±13.22）ng/L，差异有统计学意义（t=24.980、15.801，P ＜ 0.05）。

2.2 不同病理学特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比较Ⅲ期、 Ⅳ期肺癌组患者血清NSE、ProGRP 水平显著的高于Ⅰ期和Ⅱ期肺癌患者，差异具有统计学意义（P ＜0.05）；小细胞肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平显著的高于鳞癌、腺癌患者，差异具有统计学意义（P ＜0.05），鳞癌患者血清ProGRP水平显著的高于腺癌患者（P ＜0.05，表1）。

表1 不同病理学特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比较（）

表1 不同病理学特征肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比较（）

项目 例数 NSE（ng/L）TNM 分期Ⅰ+Ⅱ期 104 20.71 ± 9.04Ⅲ+Ⅳ期 76 43.91 ± 8.61病理学类型鳞癌 36 17.33 ± 7.51腺癌 80 19.01 ± 8.21小细胞癌 64 60.13 ± 12.53 t/F 值17.349 368.560 P 值 ProGRP（ng/L） t/F 值 P 值0.000 22.470 0.000 47.82 ± 23.01 238.51 ± 82.33 0.000 389.065 0.000 58.91 ± 28.11 34.22 ± 16.41 251.31 ± 76.22

2.3 不同化疗效果的肺癌患者血清NSE、ProGRP 水平比较76 例直接接受化疗的肺癌患者， 达到CR 4 例、 达到PR 36例、达到SD 32 例、达到PD 4 例；CR+PR 患者在化疗后的血清 NSE、ProGRP 水平为（6.91 ± 3.24）ng/L、（35.81 ± 15.22）ng/L， 均显著低于 SD+SD 患者（13.42 ± 6.11）ng/L、（84.72 ±39.62）ng/L，差异具有统计学意义（t=5.884、7.241，P ＜ 0.05）。

3 讨论

肺泡上皮细胞的周期调控紊乱、上皮细胞肿瘤易感性的改变或者家族性的遗传因素，均能够导致肺癌的发生［7］。 肺癌患者的临床预后分析研究显示， 其5 年生存率不足45%，治疗后的总体生存时间和中位生存时间均无明显的改善［8］。现阶段临床上主要通过血清糖类抗原125（carbohydrate antigen 125，CA125）或者糖类抗原 199（carbohydrate antigen 199，CA199）等肿瘤指标评估肺癌患者的临床转归。 虽然相关血清肿瘤相关指标能够提高肺癌患者的临床预后评估水平，但部分研究者认为，采用传统的CA125 等指标评估肺癌临床转归的灵敏度较低，不足35%，通过CA125 评估肺癌患者临床预后的一致性率不足40%［9］。 而继续寻找潜在的血清学肿瘤相关指标，具有重要的现实指导意义。

NSE 是神经源性相关蛋白，其能够参与到磷酸肌醇的代谢过程，影响到丙酮酸进入线粒体的速度。 肌醇方面的研究认为，NSE 不仅能够影响到癌细胞间生物信号通路的传递，同时还能够导致肿瘤细胞内PI3K 信号通路的激活， 增加癌细胞的增殖和调控的异常［10］。 ProGRP 主要存在于消化道或者呼吸道上皮组织， 在作为上皮细胞的骨架成分蛋白之一，在癌细胞异常增殖和凋亡的过程中，ProGRP 可以显著释放入血，导致外周血中ProGRP 表达升高。大多数小细胞肺癌或其他类型的肺癌细胞，能够通过分泌ProGRP，促进临近肿瘤细胞膜表面糖蛋白的激活，加剧癌细胞的粘附和转移［11］。 部分研究者以及探讨了NSE 或者ProGRP 的表达与肺癌的关系，认为两者的高表达与肺癌的发生密切相关，但缺乏对于治疗后的 NSE、ProGRP 比较［12］。

本研究对于肺癌患者血清中NSE、ProGRP 的表达分析研究可见，在病例组患者中，NSE、ProGRP 的表达浓度均明显上升，提示了NSE、ProGRP 的表达可能影响到了肺癌的病情进展。 分析其基础方面的原因，考虑与NSE、ProGRP 的下列几个方面的作用有关［13］：（1）NSE 的上升能够反应肺泡上皮细胞的异常核分裂过程，在癌细胞持续自我增殖的过程中，线粒体功能的增强能够显著促进囊泡释放NSE。 小细胞肺癌作为神经内分泌肿瘤，可表现神经内分泌细胞的特性，可产生NSE， 存在转移病灶的患者血清NSE 明显高于无转移病灶者。 本研究结果亦显示，与鳞癌与腺癌相比，小细胞肺癌的NSE 水平明显增高，具有较高的特异性和灵敏度。张志强等［14］也发现了与本次研究较为相似的结论，其认为在非小细胞肺癌患者中，NSE 的表达浓度可平均上升30%以上，在合并有明显的局部转移或者胸水的患者中，NSE 的表达浓度上升更为显著。 （2）ProGRP 是肺泡上皮细胞的结构性蛋白，在癌细胞凋亡和碎裂的过程中，ProGRP 可以释放入血，同时释放入血的ProGRP 还能够提高癌细胞内蛋白激酶B 或者转化生长因子-β1（TGF-β1）信号通路的激活程度，进而促进肺癌的病情进展。探讨相关指标的表达与肺癌患者临床病理特征的关系过程中发现， 在临床分期较晚的患者中，NSE、ProGRP 的表达浓度均明显上升， 提示了相关指标的表达与肺癌患者的临床病理特征的进展密切相关， 这主要由于NSE、ProGRP 的上升可影响肺泡上皮细胞的生物学特征，导致上皮细胞粘附和浸润能力的增强［15］。在不同的细胞来源类型肺癌中， 鳞癌患者中ProGRP 的表达较高， 这主要由于ProGRP 蛋白在鳞状上皮化细胞的结构中比例较高有关；而在小细胞肺癌患者中，但与NSE 相比，ProGRP 在辅助诊断小细胞肺癌的特异度与灵敏度更高。 总体上NSE、ProGRP 在小细胞肺癌均明显上升，提示两者的表达与小细胞肺癌的关系更为密切，临床上可以通过联合检测进行评估小细胞肺癌的发生风险并降低漏诊率。 在不同缓解程度的患者中，治疗后缓解程度较高的患者， 其NSE、ProGRP 的表达浓度较低，差异显著，提示了相关指标与肺癌患者的治疗结局还具有一定的关系。

综上所述， 在肺癌患者中，NSE、ProGRP 的表达明显上升，NSE、ProGRP 的表达与肺癌的临床分期或者癌细胞分型密切相关。 临床上同时检测NSE、ProGRP 表达可评估肺癌患者的临床治疗转归。