丹顶鹤免疫禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6、Re-7、Re-8）后的消长规律

2021-09-13任妙璇汪明权熊家炳宋文安

畜牧兽医科技信息 2021年7期

任妙璇，汪明权，熊家炳，宋文安，熊康

（武汉动物园，湖北武汉 430050）

禽流感（Avian Influenza AI）是由正黏病毒科-A型禽流感病毒（AIV）感染家禽和野生鸟类引起的一种感染和疾病的综合征。目前已成为危害禽类健康发展的一种重要传染源，2006年青海湖发生野鸟暴发禽流感疫情，2020年山西也出现了野生天鹅感染禽流感，研究表明，水禽是禽流感病毒的天然宿主，可长期无症状携带病毒并经消化道排毒污染水源而感染其他鸟类或者其他哺乳动物。随着研究的深入，H5亚型的高致病性禽流感，不仅可以导致水禽发病死亡，甚至能直接感染人。动物园承担着珍稀鸟类异地保护的重要职能，而禽流感病毒严重威胁到园内珍禽的健康，丹顶鹤是我国一级保护动物，针对目前国内外尚无针对包括丹顶鹤等野生珍禽的专用禽流感疫苗，且免疫方法、剂量无统一标准的情况，为了进一步掌握禽流感H5亚型三价油乳剂灭活疫苗对丹顶鹤免疫效力及免疫期，使丹顶鹤群保持高而持久的抗体水平，对免疫后不同阶段的丹顶鹤群进行了抗体水平监测，以期掌握其抗体消长规律，为制定我园丹顶鹤最佳的禽流感免疫程序提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 重组禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6、Re-7、Re-8）；生产厂家：易邦生物，由武汉市动物卫生监督所提供。

1.1.2 检测试剂禽流感H5亚型HI试验抗原及禽流感病毒H5亚型标准阳性血清，由农业部哈尔滨兽医研究所研制，武汉市疾病控制中心馈赠。

1.1.3 实验动物健康丹顶鹤15只，年龄为0.5～8岁，其中半岁未成年幼鹤1只，雄性；2岁青年鹤8只，雄性2只，雌性6只；6～8岁成年鹤6只，雄性4只，雌性2只，该丹顶鹤群由武汉动物园提供，除半岁的幼鹤未进行禽流感疫苗免疫，其余丹顶鹤每年春秋二季均进行禽流感疫苗免疫。

1.2 实验方法

1.2.1 免疫前采样免疫前对15只受试丹顶鹤腿静脉采血2mL，对禽流感抗体滴度进行测定。

1.2.2 疫苗接种对全群丹顶鹤于胸部肌肉注射禽流感病毒H5亚型三价油乳剂灭活疫苗，青年鹤、成年鹤每羽2头份，未成年鹤每羽1头份，于免疫后1、2、3、4、8、12、16、20、24周定期采集受试丹顶鹤静脉血2mL，析出血清，-20℃保存、备用。

1.2.3 应用血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验进行抗体滴度检测，具体参照《GB/18936-2003高致病性禽流感诊断技术》。

1.2.4 结果判定禽流感H5抗体滴度≥4，判定为免疫合格。

2 结果

2.1 禽流感疫苗免疫前禽流感抗体检测结果

丹顶鹤群疫苗免疫前，禽流感H5亚型抗体滴度分别为成年组抗体滴度水平在免疫前处于较高水平（4.5±1.6），83.3%（6/5）高于或等于4；青年组抗体滴度水平在免疫前也处于较高水平（6.2±1.0）未成年组抗体滴度为0。疫苗免疫后，成年组H5抗体滴度于第2、3、4周相对免疫前显著升高（P<0.05）,自第5周起抗体水平逐渐稳定在一定水平（6.1±0.2），明显高于免疫前抗体水平。青年组H5抗体滴度于第2、3周相对免疫前显著升高（P<0.05）,自第5周起抗体水平逐渐稳定在一定水平（6.1±0.2），与免疫前无明显差异。未成年组抗体滴度，在免疫后迅速升至4，在第3周达到顶峰，随后缓慢下降，于第4周降至4，第16周降至0，20周曾短暂回升至4，随后再次降至4以下。

3 讨论

3.1 我园丹顶鹤种群未出现禽流感感染病例，从本实验的数据来看，成年组及青年组丹顶鹤，在进行疫苗免疫前，抗体滴度均处于较高水平，92.8%（13/14）的抗体滴度高于4，说明我园去年对丹顶鹤群进行的禽流感疫苗免疫仍给予了丹顶鹤有效的保护，本实验通过对禽流感病毒H5亚型三价灭活疫苗（Re-6、Re-7、Re-8）免疫后，抗体滴度为时半年的监测显示，在免疫6个月后，青年鹤和成年鹤抗体滴度均高于4，再次印证春秋两次免疫禽流感灭活疫苗，能较好的达到了预防禽流感的目的。

3.2 半岁未成年鹤禽流感疫苗免疫前，H5抗体滴度为0，说明该鹤母源抗体已完全消失，并从未接触过禽流感病毒。疫苗免疫后，抗体滴度迅速上升至4，于第4周降至4，第16周降至0，20周曾短暂升至4，随后降低。为了保证产生足够的抗体保护幼鹤免于禽流感病毒侵袭，应于首免后第4周对该幼鹤进行二次免疫。第20周出现的抗体再次上升的情况，考虑是否该丹顶鹤再次接触到禽流感病毒，导致机体产生免疫应答反应。

3.3 8只青年鹤和6只成年鹤在疫苗免疫后，大多数有轻微且短暂的不适，但都能保持正常的采食、运动和排泄，其中1只雌性青年鹤和1只雄性成年鹤前后出现较为明显不良反应，主要表现为精神沉郁，采食量下降，体温升高，双腿无力，后经过2周左右的对症治疗后，均恢复正常。此不良反应考虑是个体存在较为激烈的抗原应激反应。此外，还有1只雌性青年鹤于免疫第2周出现突发性死亡，该鹤疫苗免疫后，未见明显的不良反应，死亡前曾在笼舍内展翅腾空，后背部落地，经解剖发现该鹤肾脏破裂导致死亡，怀疑是地面湿滑导致的意外死亡。此点应考虑个体差异及疫苗的注射量，接下来我们可对肌肉注射疫苗剂量进行进一步实验，减少不良反应，以期达到最佳效果。