不同产地枸杞子中多糖含量的比较研究

孙红梅 李振 彭喜春 杨秀伟

摘 要：目的：建立枸杞子中多糖的测定方法，比较不同产地枸杞子中多糖含量的差异。方法：采用蒽酮-硫酸法测定宁夏、青海、新疆等3个产地86批次枸杞子中多糖的含量，分析差异，并进行方法学考察。结果：方法线性关系、回收率、精密度及重复性测定结果均符合要求，不同产地枸杞子中多糖含量范围为1.71%～4.56%，多糖含量高低顺序为青海>新疆>宁夏。结论：蒽酮-硫酸法可用于枸杞子多糖含量的测定，不同产地的枸杞子中多糖含量有一定差异，其中青海产地枸杞子中的多糖含量最高。

关键词：枸杞子;多糖;蒽酮-硫酸法;不同产地

枸杞子为茄科植物宁夏枸杞（Lycium barbarum ）的干燥成熟果实，味甘，性平，主要分布在中国宁夏、新疆、青海、甘肃、内蒙古等地[1]。作为药食同源类中药材，枸杞子具有滋补肝肾、益精明目的功效，用于虚劳精亏、腰膝酸痛、眩晕耳鸣、血虚萎黄等[2]。多糖是枸杞子的特征性成分，具有增强机体免疫力、降血糖、降血脂、抗氧化、抗辐射、抗肿瘤、保肝等多种生物活性[3-8]。目前测定枸杞子中的多糖含量主要采用2015年版《中华人民共和国药典》中规定的方法[2]，即苯酚-硫酸法。苯酚-硫酸法虽准确性高、重复性良好，但需用到高浓度硫酸和有一定毒性的苯酚，致操作安全性相对较低，不利于长期检测操作。而蒽酮-硫酸法是多糖含量测定的常用方法，此法不仅简便、快速、灵敏，而且重现性好[9]。本研究采用蒽酮-硫酸法对不同产地枸杞子中的多糖含量进行测定评价，以期为枸杞子的质量控制及相关产品的研究开发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

UV-1801紫外分光光度计，北京瑞利分析仪器有限公司;HH-4恒温水浴锅，江苏金坛市宏华仪器厂;RE-52旋转蒸发器，上海嘉鹏科技有限公司;BJ-150中药粉碎机，上海拜杰实业有限公司。

1.2 试剂

葡聚糖标准品（40 kDa），阿拉丁公司;浓硫酸（98%）、无水乙醇（分析纯）、蒽酮（分析纯），均购于广州化学试剂厂。

1.3 材料

枸杞子（产地宁夏、青海、新疆，每个产地约30个批次样品）于2018—2019年，购于天方健（中国）药业有限公司，经鉴定均为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum的干燥成熟果实。

1.4 方法

1.4.1 枸杞多糖供试液的制备 取枸杞子若干，于105 ℃烘箱中烘4 h后，粉碎，过筛（100目）。精密称取约1 g，置于锥形瓶中，加水120 mL，沸水提取2 h，趁热抽滤，将滤渣和滤纸放回瓶中，重复上述提取1次，合并两次滤液。减压浓缩至约45 mL，转移到100 mL容量瓶中，并用少量热水多次润洗烧瓶，合并洗液，定容，摇匀，备用。精密量取上述溶液1 mL，置10 mL离心管中，加入9 mL无水乙醇，涡旋振荡15 s，离心（4 500 r/min，15 min），倾去上清液，沉淀用10 mL无水乙醇洗涤1次，振摇、离心。置通风橱内挥发沉淀物至无醇味，用蒸馏水定容于100 mL容量瓶中，摇匀，即为供试液。

1.4.2 对照品溶液的配制 精密称取105 ℃干燥至恒重的葡聚糖对照品100 mg，置1 L量瓶中，用适量水溶解后，稀释至刻度，摇匀，即得。

1.4.3 标准曲线的绘制 精密量取0.1 mg/mL葡聚糖标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于10 mL具塞试管中，并用蒸馏水补充至1.0 mL，将试管放入冷水浴中，分别加入蒽酮试剂4.0 mL（称取50 mg蒽酮，用100 mL浓硫酸溶解），摇匀。置沸水浴中加热15 min，冷却至室温。以空白作对照，在620 nm波长处测定吸收度。以吸收度为横坐标、浓度为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归得：y=5.178 6x+0.012 2，R2=0.997 4。图1结果表明，蒽酮-硫酸法测定枸杞多糖具有良好的线性关系。

1.4.4 回收率试验 取同一批枸杞子，分别在“醇沉后定容前”加入相当于样品含量50%、100%、150%的葡聚糖对照品各3份，按照“1.4.3”项测定，计算回收率，测定结果分别为92.5%、106.8%、102.9%、112.9%、97.4%、107.3%、102.5%、104.3%、114.2%，平均值为104.5%，RSD为6.6%（n=9），表明方法准确性良好。

1.4.5 重复性试验 取同一批枸杞子样品，按“1.4.1”项方法平行制备并测定6份平行样中的粗多糖含量，结果显示，多糖含量平均值为2.66%，RSD=2.8%，表明方法准确性良好。

1.4.6 精密度试验 （1）人员精密度：由2名操作员连续2 d独立对同一批枸杞子样品，按“2.1”项下方法分别平行制备2份样品，进行多糖含量测定，结果显示，不同人员测定结果的RSD=7.0%。（2）日间精密度：由同一名操作员每天测定1次，连续3 d对同一批枸杞子样品，按“1.4.1”项下方法进行多糖含量测定，结果显示，不同时间测定结果的RSD=3.2%。

1.4.7 不同方法比较 采用2015年版《中华人民共和国药典》规定的方法和本研究方法，选取3个批次样本，每批次制备2个平行样，分别对枸杞子中的多糖进行含量测定，以比较两个方法测定结果的差异。由附表可看出，本研究测得的枸杞子中的多糖含量要稍高于用2015年版《中华人民共和国药典》测得的结果，但结合2015年版《中华人民共和国药典》關于枸杞子中的多糖的含量要求和文献报道的枸杞子中的多糖含量水平来看，本研究中两个方法测得的结果都能较客观地反映枸杞子中多糖的含量水平，即方法相对准确、可靠。

1.4.8 樣品含量测定 取不同产地各批次的枸杞子样品，精密称定，按上述“1.4.1” 项下制备方法，制备样品溶液，精密吸取样品试液1 mL，按“1.4.3”项下方法进行测定，计算不同产地枸杞子中多糖的含量。

2 结果与分析

由图2知，宁夏中宁产地不同区域的枸杞子中多糖含量差异较为明显，其中中宁县周塔乡产的枸杞子中多糖含量最高，约为4.4%，其次是鸣沙镇和长山头乡，白马乡和余丁乡产的多糖含量相对较低，约为2.5%。宁夏中宁枸杞中多糖含量整体水平为3.0%。青海产地不同区域枸杞子中多糖含量差异相对较小，均接近于青海产地整体含量水平，约为3.3%（图3）。新疆产地（精河县托里镇）不同批次的枸杞子中多糖含量也有明显差异，含量波动范围为2.44%～3.85%，整体含量水平为3.15%（图4）。造成这一现象的原因可能是枸杞不同采摘年份，其多糖含量也有差异。我们分析发现，多糖含量较低的批次主要集中在2019年份采摘的，而2018年份采摘的批次多糖含量整体相对较高。就3个产地整体而言，青海产地的枸杞子多糖含量最高，新疆的次之，宁夏的最低，这一结论与崔治家等[10]的研究结果一致，但与姚霞等[11]的研究结果相悖，不一致的原因可能是在研究样本数量选取上，本研究与其差异比较大而得出不同的结论。

3 结论

目前植物多糖的测定方法有多种，包括苯酚-硫酸法[12]、蒽酮-硫酸法[13-14]、3，5-二硝基水杨酸（简称DNS）法[15]、HPLC[16-17]等精密仪器测定法。其中，蒽酮-硫酸法因具有操作简单、灵敏，易掌握，安全性好，无需使用高级仪器等优点，而被广泛用于多糖含量的测定。本研究采用蒽酮-硫酸法，以葡聚糖为对照品，建立了枸杞子的多糖含量测定方法，结果显示，该方法的线性关系、精密度、重复性和回收率均较好，测定的枸杞多糖含量结果与其他研究者测定结果水平接近，表明该方法可用于枸杞子中多糖含量的质量控制。

通过对宁夏、新疆、青海等3个地区所产86批次枸杞子的多糖含量进行测定分析，结果显示其多糖含量分布范围为1.71%～4.56%，除1批不符合2015版 《中华人民共和国药典》的规定外，其余均符合规定。整体上看，不同产地枸杞子中的多糖含量有一定的差异，其中以青海产区为最高，平均值为3.3%，新疆和宁夏产的枸杞子中的多糖含量相对低一些，平均值约为3%。这一现象说明，地理位置、环境气候等因素对枸杞子中的多糖含量的影响较大[10]，可进一步研究海拔、温度、光照、降雨量等因素对枸杞子中的多糖含量的影响。

参考文献

[1]徐常青，刘赛，徐荣，等.我国枸杞主产区生产现状调研及建议[J].中国中药杂志，2014，39（11）：1979-1984.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：249.

[3]Su C X，Duan X G，Liang L J，et al.Lycium barbarum polysaccharides as an adjuvant for recombinant vaccine through enhancement of humoral immunity by activating Tfh cells[J].Veterinary Immunology and Immunopathology，2014，158（1-2）：98-104.

[4]Zhao R，Jin R，Chen Y，et al.Hypoglycemic and hypolipidemic effects of Lycium barbarum polysaccharide in diabetic rats[J].Chinese Herbal Medicines，2015，7（4）：310-315.

[5]Li X M，Li X L，Zhou A G.Evaluation of antioxidant activity of the polysaccharides extracted from Lycium barbarum fruits in vitro[J].European Polymer Journal，2007（43）：488-497.

[6]Luo Q，Li Z N，Yan J，et al.Lycium barbarum polysaccharides induce apoptosis in human prostate cancer cells and inhibits prostate cancer growth in a xenograft mouse model of human prostate cancer[J].Journal of Medicinal Food，2009，12（4）：695-703.

[7]Gong H，Shen P，Jin L，et al.Therapeutic effects of Lycium barbarum polysaccharide（LBP）on irradiation or chemotherapy-induced myelosuppressive mice[J].Cancer Biother Radiopharm，2005（20）：155-162.

[8]Chiang Y Y，Chao J C J.Olive oil combined with Lycium barbarum polysaccharides attenuates liver apoptosis and inflammation induced by carbon tetrachloride in rats[J].Journal of Functional Foods，2018（48）：329-336.

[9]郭晓雷，朱思潮.硫酸蒽酮法与硫酸苯酚法测定灵芝多糖含量比较[J].中国中医药学刊，2010，28（9）：2000-2002.

[10]崔治家，刘峰林，张启立，等.不同产地枸杞子中枸杞多糖含量的比较分析[J].华 西 药 学 杂 志，2020，35（1）：59-61.

[11]姚霞，许利嘉，肖伟，等.不同枸杞子中枸杞多糖的含量分析[J].医药导报，2011，30（4）：426-428.

[12]王强，陈缓清，张志华，等.枸杞子多糖的含量测定[J].中草药，1991（2）：67.

[13]魏苑，张盛贵.蒽酮-硫酸法测定枸杞多糖含量的研究[J].食品工业科技，2011，32（3）：399-401.

[14]易剑平，毕雅静，宋秀荣，等.葱酮-硫酸法测定枸杞多糖质量分数的研究[J].北京工业大学学报，2005，31（6）：641-646.

[15]夏春森，韦史利，钟艳红，等.3，5-二硝基水杨酸比色法测定黄芪多糖的含量[J].中国民族民间医药，2009，29（8）：13-14.

[16]Yang Q，Wang S W，Xie YH，et al.HPLC analysis of Ganoderma lucidum polysaccharides and its effect on antioxidant enzymes activity and Bax，Bcl-2 expression[J].International Journal of Biological Macromolecules，2010，46（2）：167-172.

[17]Wang C C，Chang S C，Chen B H.Chromatographic determination of polysaccharides in Lycium barbarum Linnaeus[J].Food Chemistry，2009，116（2）：595-603.