甘加藏羊肝脏细胞组织形态结构观察

王雪艳，漫贵贵，朱倩锋，赵文强，柴君臣，姚锋锋，何玉琴，赵 禹

（甘肃农业大学 生命科学技术学院，甘肃 兰州 730070）

藏羊，又称藏系绵羊，属我国三大原始绵羊品种之一[1]。主要生活在青藏高原地区，甘肃和青海是其主要栖息地[2]。藏羊种类繁多，依据生态环境、生产特性和经济效益，可将其分为高原型、山谷型和欧拉型3大类。在甘肃，藏羊的主体为高原型，占比达90%以上，主要分布在高寒牧区[3]。甘加藏羊是藏羊的一个优良地方品种，也是中国国家地理标志产品，因其主产区位于甘肃省甘南州夏河县甘加镇而命名。由于甘加藏羊主要分布在高寒牧区，采样较困难，所以目前关于甘加藏羊的研究资料非常有限，而对其各器官组织结构的研究尚未见报道。因此，本文拟通过石蜡切片技术对甘加藏羊肝脏组织的形态结构进行研究。

肝脏是动物体内新陈代谢的重要器官，它含有多种与生物转化作用相关的酶类，有利于动物体内外的某些代谢产物、毒物和药物等非营养性物质从肾脏和胆道排出，在体内起着去除毒素、储存糖原、分泌胆汁、合成蛋白质等作用。了解甘加藏羊肝脏细胞组织的结构，有助于对反刍动物肝脏生理功能进行研究，对进一步提高甘加藏羊的养殖水平具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试验动物

2020年5月在甘肃省甘南州夏河县甘加镇屠宰场（平均海拔4 100 m）通过齿龄鉴别法随机选择年龄在2～3岁、营养良好的未孕雌性成年甘加藏羊4只，剖杀试验羊，取其肝脏用于试验材料。

1.2 主要仪器设备

光学显微镜、组织包埋机、电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9140型）、精密轮转半自动螺旋切片机、摊片机、烤片机、图像分析软件等。

1.3 主要试剂

苏木精染液、伊红染液（上海鼎国生物技术有限公司）；盐酸酒精[4]（湖南艾佳生物科技股份有限公司）；酒精、二甲苯、中性树胶（均购自北京索莱宝科技有限公司）。

1.4 肝脏形态学测量

剖杀试验羊取出肝脏后，大体解剖观察肝脏外部形态特点并对肝脏进行测量。

1.5 肝脏组织石蜡切片制备及观察

将选取的甘加藏羊肝脏进行解剖，每只羊选肝实质各切取两块约1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm的组织块，并编号进行标记，然后将所有组织块迅速投入4%多聚甲醛溶液中固定。取固定好的组织数块，使用常规梯度酒精脱水后用双刃刀片切成厚1 cm、宽0.3～0.5 cm的薄片，8片左右，用纱布包裹薄片，并放入有纱布封口的烧杯中进行洗涤。经脱水透明、组织浸蜡、包埋等步骤制作组织蜡块，待蜡块凝固，修正蜡块，切片（注意刀的倾角不宜过大，也不宜过小，一般使切片刀的刀口与石蜡的平面保持在10～15°为宜[5]），贴片以及烤片。将切片脱蜡染色，脱水透明，最后封片，在光学显微镜下观察。

1.6 数据分析

用平均值±标准差来表示肝脏的形态学测量结果，用SPSS22.0软件进行数据统计分析，P＜0.05和P＜0.01分别表示统计学差异显著和极显著，用one-way ANOVA或Student’s t-test比较组间均值的差异。

2 结果与分析

2.1 肝脏形态学测量结果

甘加藏羊肝脏外观呈红褐色，质软而脆。肝脏形态呈不规则楔形，右侧钝厚而左侧偏窄，上面突起浑圆，与膈肌接触，下面较扁平，与胃、十二指肠、胆囊和结肠相邻。肝脏有一定的活动度，可随体位的改变和呼吸而上下移动。按解剖学结构主要分四叶，分别是左叶、右叶、尾叶和方叶（见图1）。

图1 甘加藏羊肝脏形态

肝脏四叶之间界限明显，大小不等。右叶（长12.3 cm、宽13.6 cm）整体比左叶（长10.7 cm、宽11.3 cm）大，对每个小叶进行测量，结果见表1。

表1 甘加藏羊肝脏形态测量结果

2.2 肝脏组织形态观察

甘加藏羊肝脏组织结构由肝小叶和门管区构成（见图2A）。肝小叶包含肝细胞索（肝板）、中央静脉、胆小管和肝窦，是肝脏的基本结构和功能单位（见图2B）。肝小叶数目较多、体积偏小、呈不规则的多边形，小叶间结缔组织不发达，分界不明显。其中肝板是由肝细胞呈行排列成的不规则的、相互连接的板状结构。肝细胞界限清晰，呈多边形，规则地排列成肝细胞索，细胞核较大且核仁明显。肝血窦位于肝板之间，大小不等，细胞核扁平，凸向窦腔。此外，在肝血窦之间还散在枯否氏细胞（见图2C），其胞体较大，形状不规则，胞核大而圆。小叶中心为中央静脉，其管壁不明显，只由一层内皮细胞和少量的结缔组织构成。

门管区（见图2D）由小叶间动脉、小叶间静脉和小叶间胆管3种伴行的管道形成的结缔组织构成。小叶间动脉管腔较小，管壁较厚。小叶间静脉管腔相对较大，管壁较薄。小叶间胆管的管腔狭小，呈圆形，由于细胞核大且着色深，故呈蓝色外观。

图2 甘加藏羊肝脏组织形态结构

3 讨论

肝脏存在于所有脊椎动物中，通常是动物体内最大的腺体，其功能很多，如参与多种营养物质的代谢和储存、分泌胆汁、解毒、造血和调节激素等[6]，同时也是动物检疫中常见的病变组织器官。肝脏的形式在不同物种中有较大差异，在很大程度上取决于周围器官的形状和排列。在大多数物种中，肝脏可分为左叶和右叶。

甘加藏羊肝脏组织比较发达，其表面覆盖浆膜，延伸入肝实质的结缔组织将肝脏分为若干个肝小叶。肝小叶结构中的肝板、肝窦和胆小管以中央静脉为中心呈辐射分布[7]。中央静脉位于肝小叶中央，管壁为单层扁平上皮，因与周围的肝血窦相通而管壁不完整；肝板由肝细胞单层排列构成，肝细胞呈多边形，核大而圆，位于细胞中央，有的可见双核；肝血窦窦壁紧贴肝细胞索，由内皮细胞构成，细胞核扁圆形，染色深[8]。门管区的小叶间静脉属于门静脉分支，管腔较大而不规则，内皮外有散在平滑肌纤维分布；小叶间动脉属肝动脉分支，内皮外可见环形平滑肌层；小叶间胆管属肝管分支，管壁为单层立方上皮，细胞排列整齐，细胞质染色浅，细胞核呈圆形。甘加藏羊肝小叶结缔组织不发达，肝小叶区分不明显，而门管区较明显。不同家畜的肝小叶间结缔组织发达程度因种类不同而存在差异，猪、猫和骆驼的小叶间结缔组织特别发达，肝小叶轮廓清晰，而其他动物小叶间结缔组织不发达，肝小叶分界不明显[9]。

前人对动物肝脏的研究共揭示了3种肝细胞排列方式，即肝细胞呈团块状聚集排列、单层或两层肝细胞呈索状结构排列。一般来说，肝细胞索的细胞组成和排列方式的差异与动物种类有一定联系，如哺乳动物的肝细胞索往往是由单层细胞排列构成，而鸟类的肝细胞索则由两层细胞排列构成。本研究中的甘加藏羊肝细胞符合上述动物肝细胞的排列规律，为单排索状结构。肝脏血窦内血液的充盈程度会使肝细胞索产生一定形变。有研究表明，哺乳动物和鸟类的肝细胞索结构差异可能和肝脏功能密切相关[10]。哺乳动物在消化期可通过神经和体液等途径刺激胆汁的分泌，从而实现对多种营养物质的消化和吸收，该过程中大量消化液的分泌需要肝脏提供足够的血液供给，血窦内的血液不断充盈，挤压肝细胞使其更加趋向于单层排列。而鸟类对食物的消化主要依赖于嗉囊中的分泌液，对肝脏中的消化液依赖程度低，因此肝脏对血液的需求相对哺乳动物较低，从而具有两层细胞构成的肝细胞索[10]，这体现出组织器官结构与其发挥的生理功能密切相关。

本试验以甘加藏羊为研究对象，对其肝脏细胞组织结构与特征进行了观察和研究，揭示了甘加型藏羊在高寒牧区生长环境下肝脏的组织结构特点，为将来肝脏中环境适应性相关功能基因筛选以及优良地方品种选育提供了组织学理论依据。