甜瓜蒂药材质量标准提升研究

冯淑萍

（山西省运城市食品药品检验所，山西 运城 044000）

甜瓜蒂为葫芦科植物甜瓜Cucumis melo L. 的干燥果柄，有涌吐痰食、除湿退黄功效。甜瓜蒂别名苦丁香、甜瓜把、瓜丁、瓜蒂，始载于《神农本草经》并被列为上品。其主要含有葫芦素系化合物，包括葫芦素B，D，E，异葫芦素B 等，还含有皂苷、甾醇、氨基酸等。葫芦素是一类高度氧化的四环三萜类化合物，具有抗癌、抗炎、保肝、提高机体免疫力等药理作用。葫芦素系化合物中，葫芦素B 含量超过80%，是抗肝炎、肝癌的有效单体。有研究表明，葫芦素B 对体外肿瘤有显著抑制作用，可促进肿瘤细胞发生氧化应激损伤，可抗小鼠肝纤维化，可抑制食管癌细胞增殖、迁移、克隆，促进细胞凋亡[1－6]。甜瓜蒂现收载于1987 年版《山西省中药材标准》，但仅有来源、性状、性味、功能主治、用法用量、注意、贮藏项。现拟修订甜瓜蒂药材的地方质量标准，增加显微鉴别，薄层色谱鉴别，水分、灰分、杂质及含量测定项。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters e2695 型高效液相色谱仪，含紫外－可见光检测器(美国Waters 公司）；Agilent Cary 3500 型紫外－可见分光光度计(美国Agilent 公司)；ME55 型、ME155DU 型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度为十万分之一）；KQ－250E 型超声仪(昆山市超声仪器公司)。

1.2 试药

葫芦素B 对照品（成都曼思特生物科技有限公司，批 号 为MUST－11081601，规 格 为20 mg，含 量 为99.2%）；甜瓜蒂对照药材（中国食品药品检定研究院，批号为1178－200001）；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯，水为超纯水。

甜瓜蒂药材样本来源：2 组采自运城夏县尉郭乡白张村，批号分别为20180512，20180517，均为白皮瓜；2 组采自运城稷山县太阳乡白池村，批号分别为20180615，20180619，均为白皮瓜；2 组采自运城新绛县龙兴镇桥东村，批号分别为20180713，20180719，均为花纹瓜；2 组采自运城闻喜县裴社乡大泽村，批号分别为20180723（花纹瓜），20180729（白皮瓜）；2 组购自忻州，批号分别为XZ－2019－1，XZ－2019－2，均为花纹瓜。10 组药材样本(编号1 ～10 号)基源鉴定结果均符合规定。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

样本横切面显微结果：木栓层为数列细胞，断续可见；表皮细胞扁长方形，外被角质层；皮层内有1 圈由数列厚壁细胞组成的环，细胞呈多角形，直径32 ～45 μm，壁木化，腔大；维管束双韧型，纤维束排列成环；木质部导管较大，明显；髓大，由薄壁细胞组成，常呈空洞状。10 批样品显微特征基本相同，重复性较好。详见图1。

图1 药材样品横切面显微特征图Fig.1 Microscopic characteristics of the cross－section of Pedicellus melo

2.2 薄层色谱鉴别

取药材样品适量，研为粉末，取约1 g，加入乙醇10 mL，超声（功率300 W，频率40 kHz）处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL 使溶解，即得供试品溶液。取甜瓜蒂对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。取葫芦素B 对照品，加乙醇制成每1 mL 含3 mg 的对照品溶液。照薄层色谱法[2020 年版《中国药典（四部）》通则0502]试验，吸取上述3 种溶液各3 ～5 μL，分别点于同一硅胶G 板上，以二氯甲烷－乙酸乙酯（2 ∶1，V／ V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液（取磷钼酸5 g，加无水乙醇使溶解成100 mL，即得），105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点。详见图2。

图2 甜瓜蒂薄层色谱图Fig.2 TLC chromatograms of Pedicellus melo

2.3 水分、灰分、杂质检查

水分：测定结果见表1。结合2020 年版《中国药典（四部）》通则0212 果实类药材的水分规定，将水分限度定为不得过12.0%，纳入标准。

表1 药材样品水分及灰分测定结果（%）Tab.1 Determination result of moisture and ash in the sample（%）

灰分：测定结果见表1。据此将甜瓜蒂药材总灰分的限度定为不得过4.0%，纳入标准。

杂质：按2020 年版《中国药典（四部）》通则2301“杂质检查法”检查，结果10 批药材样品所含杂质极少，故不列入标准。

2.4 含量测定

2.4.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Waters Xbridge C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流动相：甲醇－水（60 ∶40，V／ V）；流速：1.0 mL／min；检测波长：228 nm；进样量：10 μL。在此色谱条件下，指标成分葫芦素B 与其他峰能达到基线分离。详见图3。

图3 甜瓜蒂高效液相色谱图Fig.3 HPLC chromatograms of Pedicellus melo

2.4.2 溶液制备

对照品溶液：取葫芦素B 对照品适量，精密称定，加55%乙醇制成每1 mL 含80 μg 的溶液，即得。

供试品溶液：取药材样品粉末约1 g（过3 号筛），精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入55%乙醇50 mL，称定质量，超声处理45 min，放冷，再称定质量，用55%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[7－13]。

2.4.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取2.4.2 项下对照品溶液（80.24 μg／mL），逐步稀释为系列对照品溶液，按2.4.1项下色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标（Y）、进样量（X，μg）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y ＝19.972 X－3.231 7，r ＝0.999 8（n ＝7）。结果表明，葫芦素B 进样量在0.081 2 ～1.611 3 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，按2.4.1 项下色谱条件连续进样6 次，测定峰面积。结果的RSD 为0.72%（n ＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：称取同一批药材样品（批号为20180512）5 份，精密称定，按2.4.2 项下方法制备供试品溶液，按2.4.1 项下色谱条件进样，测定峰面积，并计算含量。结果葫芦素B 的平均含量为0.574%，RSD ＝1.61%（n ＝5），表明方法重复性较好。

稳定性试验：取样品（批号为20180512），依法制备供试品溶液，室温下按2.4.1 项下色谱条件，分别于0，2，4，8，12，24 h 时进样测定峰面积。结果的RSD为0.94%（n ＝6），表明供试品溶液室温下24 h 内稳定性良好。

加样回收试验：取已知含量的药材样品粉末（批号为20180615），平行6 份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入葫芦素B 对照品适量，依法制备供试品溶液，按2.4.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果（n ＝6）Tab.2 Results of the recovery test（n ＝6）

2.4.4 样品含量测定及限度制订

取10 批药材样品适量，依法制备供试品溶液，再按2.4.1 色谱条件测定药材样品中葫芦素B 含量，平行测定2 次，取平均值，结果见表3。据此拟订最低药材样品含量为0.22%，根据药材样品最低值下浮10%，暂定本品含葫芦素B 不得少于0.20%。

表3 10 批药材样品含量测定结果（%，n ＝2）Tab.3 Content determination of cucurbitacin B in 10 batches of samples（%，n ＝2）

3 讨论

预试验中分别选用不同的薄层色谱展开剂，包括三氯甲烷－乙醇（5 ∶1，V／ V），石油醚－乙酸乙酯（5 ∶1，V／ V），二氯甲烷－甲醇（1 ∶1，V／ V），二氯甲烷－甲醇（3 ∶1，V／ V），二氯甲烷－甲醇（7 ∶1，V／ V），二氯甲烷－乙酸乙酯（2 ∶1，V／ V），结果表明，以最后一种为展开剂时，展开所得的薄层色谱图斑点较多、谱图清晰，且分离度较好，因此选用该展开剂进行试验。

所测10 批药材样品在性状、显微鉴别、薄层色谱、水分、灰分、杂质方面检测结果差异不大，但含量测定结果显示，不同来源的药材样品中葫芦素B 含量差异较大，可能与各地土壤、气候、采收时间有关。