宫颈癌患者HMGA1、HMGB1表达水平与高危型HPV感染的关系及临床意义

陈慧 陈光辉 王万党 邓宇涛

宫颈癌是常见的女性生殖系统恶性肿瘤，流行病学调查表明其发病率和死亡率均位居女性恶性肿瘤第四位，严重危害我国女性生命健康［1］。宫颈癌早期无特征性临床表现，易被患者忽视导致病情进展，晚期宫颈癌患者治疗效果不佳，常导致患者预后不良的发生［2］。人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）根据其致癌能力分为高危型、潜在高危性和低危型三种，高危型HPV 感染的临床表现包括尖锐湿疣、宫颈鳞状上皮内病变等，是导致宫颈癌发生的重要因素［3］。高迁移率族蛋白（High mobility group protein，HMG）是一种晚期炎症介质，在脓毒症、感染性休克和病毒感染中表达水平升高［4］。高迁移率族蛋 白A1（High mobility group protein A1，HMGA1）和高迁移率族蛋白B1（High mobility group protein B1，HMGB1）不仅能够通过参与细胞内DNA 的复制转录过程调控细胞自噬水平，促进肿瘤免疫逃逸的发生，还能够促进肿瘤微血管生成，促进肿瘤生长转移［5-6］。本研究通过检测宫颈癌组织中HMGA1、HMGB1 水平探究其与高危型HPV 感染的关系，旨在为宫颈癌的筛查提供新的指标。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年8月至2020年8月南方医科大学附属小榄医院收治的200 例宫颈癌患者作为研究组，另选取同期在本院体检的女性健康就诊者50 名作为对照组。研究组患者根据HPV 感染情况分为高危组和非高危组，其中感染HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV61 等高危型HPV 者为高危组，其余患者为非高危组。

纳入标准：①所有宫颈癌患者诊断依据《2021 NCCN 子宫颈癌临床实践指南（第1 版）》［7］，且经阴道镜活检确诊为宫颈癌；②所有患者均为初诊，未接受过相关治疗；③患者不合并重要脏器功能损伤、自身免疫性疾病及精神神经疾病；④患者临床资料完整；⑤患者及家属均签署对研究知情同意书，研究经本院医学伦理委员会研究批准。排除标准：①合并其他感染性疾病者；②合并心、肝、肾等重要脏器损伤的患者；③合并其他恶性肿瘤的患者；④孕妇及哺乳期妇女。两组患者年龄、BMI 指数等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂

HE 免疫组化试剂盒购自北京中杉金桥生物公司，HPV 鉴定试剂盒购自潮州凯普生物化学有限公司，HMGA1、HMGB1 一抗均购自美国Abcam 公司，含辣根过氧化物酶的山羊抗兔二抗购自北京中杉金桥生物公司，酶联免疫吸附法试剂盒购自美国Thermo Fisher 公司。

1.2.2 实验方法

收集患者子宫颈组织标本石蜡包埋后切片烘烤，使用二甲苯脱蜡，再使用梯度乙醇洗脱二甲苯，滴加0.3%H2O2 室温孵育阻断过氧化物酶活性，采用HE 免疫组织化学法试剂盒染 色，DAB显色于镜下观察，控制染色时间。使用梯度乙醇脱水后中性树胶封片进行观察，按阳性细胞占比计分，＜5%记0 分、5%～25%记1 分、26%～50%记2分、51%～75%记3 分、＞75%记4 分。按着色程度计分，无染色记0 分、浅黄色记1 分、棕黄色记2分、深棕色记3 分。以二者得分相乘为最终结果，＞6 分为高表达，≤6 分为低表达［8］。

采用宫颈刷收集研究组患者阴道分泌物，采用PCR+膜杂交法检测患者高危型HPV 感染情况，高危型HPV 包括HPV-16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 等［9］。患者入组后收集患者血清3 mL，采用酶联免疫吸附法检测血清中HMGA1、HMGB1 水平。

1.3 统计分析

使用SPSS 22.0 软件进行分析；符合正态分布的计量资料采用（）表示，采用t检验进行组间比较；计数资料以n（%）表示，采用χ2检验进行组间比较；采用受试者工作特征曲线（ROC）对诊断效能进行评价；等级资料采用秩转换的非参数检验（Kruskal-Wallis 法）；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组织中HMGA1、HMGB1 表达情况

研究组宫颈组织中HMGA1、HMGB1 高表达者高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 组织中HMGA1、HMGB1 表达情况［n（%）］Table 1 Expression of HMGA1 and HMGB1 in the tissues［n（%）］

2.2 HPV 感染患者组织中HMGA1、HMGB1 表达水平

200 例宫颈癌患者中检测出174 例患者合并HPV 感染，其中119 例患者合并高危HPV 感染，55 例患者合并非高危HPV 感染。结果表明高危组患者组织中HMGA1、HMGB1 高表达患者均高于低表达患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 HPV 感染患者组织中HMGA1、HMGB1 表达水平［n（%）］Table 2 The expression levels of HMGA1 and HMGB1 in the tissues of patients with HPV infection［n（%）］

2.3 HPV感染患者血清中HMGA1、HMGB1表达水平

高危组患者血清中HMGA1、HMGB1 高表达患者均明显多于低表达患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 HPV 感染患者血清中HMGA1、HMGB1 表达水平［n（%）］Table 3 The expression of HMGA1 and HMGB1 in serum of patients with HPV infection［n（%）］

2.4 血清HMGA1、HMGB1 蛋白对宫颈癌合并高危型HPV 感染的诊断价值

血清HMGA1、HMGB1 二者联合诊断AUC为0.956（95%CI：0.878～0.999），诊断效能明显高于单项（P＜0.05）。见表4、图1。

表4 血清HMGA1、HMGB1 蛋白对宫颈癌合并高危型HPV 感染的诊断价值Table 4 The diagnostic value of HMGA1 and HMGB1 proteins in the diagnosis of cervical cancer with high-risk HPV infection

图1 ROC 分析Figure 1 ROC curve

2.5 组织中HMGA1、HMGB1 水平与宫颈癌患者临床资料的关系

宫颈癌患者组织中HMGA1、HMGB1 水平与患者年龄、产次和肿瘤病理类型无关（P＞0.05），而与患者肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及肿瘤FIGO 分期相关（P＜0.05）。见表5。

表5 组织中HMGA1、HMGB1 水平与宫颈癌患者临床临床资料的关系Table 5 The relationship between the levels of HMGA1 and HMGB1 in tissues and the clinical data of patients

3 讨论

人类是HPV 的唯一自然宿主，而宫颈部上皮移行区是HPV 的易感部位，持续的HPV 感染，尤其是高危型HPV 感染是宫颈癌发生的根本原因［10］，目前宫颈癌组织细胞中的HPV 检出率达96%以上［11］。近年来研究表明宫颈癌病变并非仅仅由病毒感染导致，而是多因素共同发挥作用的结果［12］。目前宫颈癌的治疗主要以手术治疗以及放化疗为主，随着医学技术的发展靶向药物及生物免疫制剂已逐步运用于晚期宫颈癌的治疗，但治疗效果个体差异较大，导致晚期宫颈癌患者生存率仍较低。

本研究结果发现宫颈癌患者组织中HMGA1、HMGB1 水平明显高于正常人，HMGA1、HMGB1水平与宫颈癌患者临床病理特征如患者肿瘤分化程度、有无淋巴结转移及肿瘤FIGO 分期相关，HMGA1、HMGB1 表达升高通常与宫颈病变成正相关，且易合并淋巴结转移的发生。国内学者洪宇［13］的研究发现宫颈癌患者血清中的miR-130a、HMGA1 及SCC-Ag 表达水平较高，且表达量与宫颈癌的临床病理类型、FIGO 分期有关；学者付方方［14］认为过表达HMGA1 可以加快细胞周期过程中G1 期向S 期转化，促进该过程中关键蛋白的表达，增强宫颈癌细胞的增殖和克隆形成能力，从而促进宫颈癌细胞肿瘤的生长；学者Cheng H 等［15］研究发现组织中hepsin 和HMGB1 的表达水平越高，宫颈癌的侵袭程度越高，患者预后效果越差。上述研究表明HMGA1、HMGB1 具有促进宫颈癌细胞生长作用。

本研究还发现HMGA1、HMGB1 与HPV 感染也有一定的相关性，研究发现HMGA1 表达水平与宫颈癌病变程度呈正相关，而高危型HPV 如HPV E6/E7 均能够促进HMGA1 的表达，对RNA 片段中的HPV E6/E7 进行敲除可发现HMGA1 表达明显下调［16］。在口腔癌中患者组织中能检测到高危型HPV E6 的过表达，已被证实其通过过表达HMGB1 增加口腔癌细胞的侵袭性［17］，而在喉癌患者中也发现相同的作用。上述研究提示高危型HPV 感染能够促进HMGA1、HMGB1 的表达，以促进肿瘤的发生发展。

综上所述，HMGA1、HMGB1 在宫颈癌患者，尤其是合并高危HPV 感染的宫颈癌患者组织中表达明显增高，且与患者临床病理资料相关，还可作为宫颈癌合并高危HPV 感染的早期诊断指标发挥作用。本研究的不足之处在于研究对象数量较少，且并未对HMGA1、HMGB1 在宫颈癌合并高危型HPV 感染中的作用和机制做出阐述，需要在后续研究中加以补足。