动态监测HE4、Smad4、HGF预测卵巢癌外科术后早期复发的价值

左尔比亚·买买提 古再力努尔·艾白 阿斯木古丽·克力木

［KEY WORD］ HE4；Smad4；HGF；Ovarian cancer；Recurrence after surgery

卵巢癌年发病率居子宫颈癌和子宫体恶性肿瘤之后第3 位，死亡率位于女性生殖道恶性肿瘤之首，严重威胁女性生命安全［1］。外科手术是治疗卵巢癌重要手段，但受临床分期、手术方式等因素影响，术后仍存在复发风险，并成为影响患者预后的主要因素，因此早期预测患者复发概率具有积极意义［2］。人附睾蛋白4（Human epididymis protein-4，HE4）在卵巢癌中表达升高，术后大幅降低提示手术治疗有效，但对外科术后复发的预测尚不明确［3］。Smad4 是转化生长因子β 信号传导的中心介质，在肝癌中水平高于健康体检者，且肝癌死亡者Smad4 高于生存者，是预后的相关影响因素［4］。体外实验［5］表明，肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor，HGF）可促进卵巢癌细胞的增殖，但是否有助于卵巢癌外科术后复发的预测仍有待探讨。基于此本研究探讨动态监测HE4、Smad4、HGF 预测卵巢癌外科术后早期复发的价值，为临床预测复发、早期干预等提供参考，报告如下。

1 对象和方法

1.1 研究对象

经本院伦理委员会批准，选取2017年5月至2020年6月本院收治的72 例行外科手术治疗卵巢癌患者，根据术后6 个月是否复发分为复发组（n=15）、未复发组（n=57）。纳入标准：①术后病理学结果证实为卵巢癌［6］；②行外科手术治疗者，术后无肿瘤残留；③年龄≥18 岁。排除标准：①有外科手术禁忌症者；②肝肾心功能严重不全者；③妊娠期患者；④伴有血液系统疾病者；⑤失访患者。本研究入组者充分知晓本研究，自愿签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 资料收集

收集患者年龄、体质量指数、国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology And Obstetrics，FIGO）2014年修订分期系统［6］、组织学类型、分化程度、腹水、手术方式、术后化疗资料。

1.2.2 检测方法

于术前、术后2、4 周分别采集外周静脉血5 mL，采用美国贝克曼库尔特公司新型化学发光仪DXI800 和化学发光法检测血清HE4 水平，试剂盒购于北京同生时代生物技术有限公司；采用美国伯乐公司生产的680 型酶标仪和酶联免疫吸附法检测血清Smad4、HGF 水平（波长450 nm），Smad4 试剂盒购于上海江莱生物科技有限公司，HGF 试剂盒购于上海臻科生物科技有限公司，实验操作：分别设标准孔、空白孔、待测样品孔，加入100 μL 待测样品、标准品、标准品&样品稀释液，覆膜，37℃孵育1.5 h，弃去孔内液体，每孔中加入100 μL 生物素化抗体工作液，37℃温育60 min，弃去液体，洗板3 次，每孔加100 μL 酶结合物工作液，重复温育、洗板，加90 μL 显色剂（TMB）、终止液，即刻用酶标仪测量各孔的光密度（OD 值，450 nm），所有操作均按照试剂盒说明书操作。

1.3 统计学方法

数据采用SPSS 22.0 处理，计量资料以（）表示，行独立样本t检验；计数资料用n（%）表示，行χ2检验；采用多因素Logistic 回归方程分析复发的相关影响因素，采用受试者工作特征曲线（ROC）及ROC 下面积（AUC）分析各指标预测复发的价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较

两组年龄、体质量指数、组织学类型、分化程度、术后化疗资料分布情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；复发组FIGO 2014年修订分期系统、腹水、手术方式与未复发组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组基线资料对比［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of relative baseline data between 2 groups［（±s），n（%）］

表1 两组基线资料对比［（±s），n（%）］Table 1 Comparison of relative baseline data between 2 groups［（±s），n（%）］

资料年龄(岁)体质量指数（kg/m2）FIGO 2014年修订分期系统ⅠⅡⅢ组织学类型浆液性非浆液性分化程度低分化中分化高分化腹水无有手术方式全面分期手术肿瘤细胞减灭术术后化疗否是复发组（n=15）50.64±7.93 23.25±1.48 1（6.67）7（46.67）7（46.67）8（53.33）7（46.67）4（26.67）5（33.33）6（40.00）10（66.67）5（33.33）9（60.00）6（40.00）1（6.67）14（93.33）未复发组（n=57）47.96±9.18 23.40±1.53 34（59.65）22（38.60）1（1.75）24（42.11）33（57.89）10（17.54）19（33.33）28（49.12）52（91.23）5（8.77）50（87.72）7（12.28）8（14.04）49（85.96）t/χ2值1.033 0.340 4.189 0.606 0.726 4.112 4.436 0.108 P 值0.305 0.735＜0.001 0.436 0.468 0.043 0.035 0.742

2.2 两组HE4、Smad4、HGF 动态变化

复发组术后2 周HE4、Smad4、HGF 低于术前，术后4 周HE4、Smad4、HGF 高于术后2 周，差异有统计学意义（P＜0.05）；未复发组术后2 周HE4、Smad4、HGF低于术前，术后4 周HE4、Smad4、HGF 低于术后2 周，差异有统计学意义（P＜0.05）；复发组术后2、4 周HE4、Smad4、HGF 高于未复发组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组HE4、Smad4、HGF 比较（±s）Table 2 Comparison of HE4，Smad4 and HGF between 2 groups（±s）

表2 两组HE4、Smad4、HGF 比较（±s）Table 2 Comparison of HE4，Smad4 and HGF between 2 groups（±s）

注：与本组术前比较，aP＜0.05；与本组术后2 周比较，bP＜0.05。

指标HE4（pmmol/L）Smad4（ng/mL）HGF（ng/mL）组别复发组未复发组t 值P 值复发组未复发组t 值P 值复发组未复发组t 值P 值n 15 57 15 57 15 57术前248.69±50.92 240.57±56.93 0.502 0.618 11.24±3.59 11.08±3.74 0.149 0.882 1.60±0.35 1.54±0.44 0.488 0.627术后2 周221.52±33.17a 199.78±36.25a 2.101 0.039 10.09±2.26a 8.87±2.05a 2.008 0.049 1.40±0.29a 1.06±0.32a 3.729＜0.001术后4 周238.02±31.37b 162.22±30.19ab 8.584＜0.001 11.26±2.43b 6.03±1.22ab 11.703＜0.001 1.63±0.44b 0.87±0.28ab 8.223＜0.001

2.3 复发的多因素Logistic 回归方程分析

以是否复发为因变量，否赋值0，是赋值1，纳入两组比较差异有统计学意义指标作为自变量，其中HE4、Smad4、HGF≤两组均值赋值1，＞两组均值赋值2，术后2 周两组HE4、Smad4、HGF 均值依次为204.31 pmmol/L、9.12 ng/mL、1.13 ng/mL，术后4 周两组HE4、Smad4、HGF 均值依次为178.01 pmmol/L、7.12 ng/mL、1.03 ng/mL，应用多因素Logistic 回归方程分析，结果显示，将FIGO 2014年修订分期系统、腹水、手术方式控制后，术后2 周、术后4 周HE4、Smad4、HGF仍与复发相关（P＜0.05）。见表3。

表3 复发的多因素Logistic 回归方程分析Table 3 Multivariate logistic regression equation analysis of recurrence

2.4 HE4、Smad4、HGF 预测复发的价值

以术后2 周、术后4 周复发组各指标为阳性样本，以对应时间点未复发组各指标为阴性样本，绘制各指标预测复发的ROC，结果显示：术后2 周单一指标中，Smad4 预测复发的AUC 最大，各指标联合的AUC 大于任一单一指标（P＜0.05）；术后4 周单一指标中，HE4 预测复发的AUC 最大，各指标联合的AUC 大于任一单一指标（P＜0.05）。见表4、图1。

表4 ROC 分析结果Table 4 ROC curve results

图1 各指标预测复发的ROCFigure 1 The ROC of each index for predicting recurrence

3 讨论

卵巢癌外科术后复发的有效预测是临床医师关注的重点和研究的热点。HE4 是一种肿瘤标志物，卵巢癌患者HE4 阳性率高于良性肿瘤者，且晚期患者HE4 高于早期患者［7］。本研究显示，与未复发患者相比，复发患者术后2 周、术后4 周HE4 较高，是复发的相关影响因素，可预测复发。HE4 高表达与卵巢癌分期、分级有关，有转移患者HE4 高于无转移者，在手术治疗成功患者中，HE4 水平普遍下降显著，因此可用于卵巢癌随访的复发监测，其作用机制主要通过调节肿瘤细胞黏附、迁移、增殖、肿瘤生长，参与卵巢癌的发生与进展［8］。尽管HE4 在卵巢癌中研究较为成熟，敏感度较高，但单纯依赖HE4 存在特异性低的不足，因此需联合其他指标综合评估。

Smad4 是转化生长因子β/Smad4 轴的关键物质，可通过调控上皮间质转化途径影响肿瘤的发生与进展［9］。目前关于Smad4 在癌症领域中扮演的角色尚存在较大争议。本研究结果提示Smad4 水平较高患者，术后复发风险较高。王晓庚等［10］研究显示，口腔癌病情进展患者Smad4 阳性率高于缓解患者，是口腔癌转移或复发的独立危险因素，本研究观点与之相似，佐证了Smad4 在癌症复发中作用及预测复发的潜质。但Ogawa R 等［11］报道，Smad4 降低对大肠癌具有促进作用，即Smad4 在大肠癌中起抑癌作用，造成结果差异的原因可能是研究方向不同，其研究的是Smad4 在大肠癌发病中作用，而本研究探讨的是Smad4 与卵巢癌术后复发关系，卵巢癌外科术后复发患者Smad4 水平升高可能是机体的一种应激性或适应性改变，以抑制卵巢癌的复发。另外有资料［12］显示，在Smad4 阳性的癌细胞中，转化生长因子β 通过减少Smad4 的核易位促进增殖，而在Smad4 阴性的癌细胞中，转化生长因子β 通过调节丝裂原活化蛋白激酶途径激活来抑制Smad4 阴性细胞的增殖并促进其迁移，可见Smad4 在癌症进展中机制较为复杂，是否还通过其他途径影响卵巢癌外科术后的复发仍有待后续的深入研究。

HGF 是一种多功能物质，可调节血管内皮细胞、上皮细胞等生长、运动［13］。万波等［14］报道，肝细胞癌术后患者血清HGF 较术前降低，术后血清HGF 持续高水平患者，复发风险升高，预后较差。但现阶段HGF 对卵巢癌术后复发预测的报道较少，本研究结果发现HGF 是复发的相关影响因素，可作为预测术后早期复发的生物标志物。HGF 能通过自分泌或旁分泌机制，作用于上皮间质转化过程，并能促进细胞分裂、血管生成，从而促进肿瘤细胞侵袭和转移［15］。可见临床上应重视手术前后HGF 的监测，若患者HGF 无明显降低，或降低后再次升高，应警惕复发的可能，及时给予干预，以改善患者预后。另本研究结果提示检测术后4 周HE4、Smad4、HGF水平预测价值较术后2 周高，且条件允许时，建议联合检测HE4、Smad4、HGF，以进一步提高预测复发的可靠性，从而为临床提供更准确的参考信息。

综上，卵巢癌外科术后早期复发患者HE4、Smad4、HGF 水平较未复发患者升高，联合监测三者水平可预测患者复发的风险，为临床干预提供重要参考信息。