PPAR-γ、MMP-3及Bcl6水平变化与RA病情活动性和病理评分的相关性

庄建阳 刘雪梅 代思明 王艳丽 李恒

类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一种致使周围关节受累的多系统性炎症性疾病［1］。RA 病情持续时间长，易反复发作，严重影响患者的相关活动功能［2］。近年来随着人口老龄化，RA 发病率呈不断上升趋势发展。临床实践显示RA 早期及时规范的治疗后预后较好，但该疾病早期病情隐匿，诊断较困难。故寻求能为RA 诊断、病情监测提供可靠依据的分子标记物成为国内外学者关注的焦点［3］。过氧化物酶体增殖活化受 体-γ（peroxisome proliferator-activated receptors，PPAR-γ）是一类配体依赖序列特异的核转录因子，在炎症反应中的作用引起了人们的关注［4］。研究发现，PPAR-γ 在自身免疫反应及炎症过程中发挥重要作用［5］。基质金属蛋白酶3（Matrix metalloprotein-3，MMP-3）是滑膜分泌的细胞因子，Han 等学者［6］报道，MMP-3 对金属蛋白酶和其它蛋白水解酶的合成起着重要调节作用。Tsai 等［7］研究发现，转录抑制因子B 细胞淋巴瘤因子6（B cell lymphoma，Bcl6）与免疫系统的炎症反应相关。本研究就PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 在类风湿性关节炎中的表达及其与病情活动性及滑膜炎病理评分的相关性进行分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年8月至2020年8月本院收治的102 例RA 患者作为研究组。纳入标准：①符合类风湿性关节炎的相关诊断标准［7］，并结合实验室检查以及影像学检查明确诊断。②临床资料完整，均自愿参加本次研究，并签署相关协议书。排除标准：①存在其他系统疾病或恶性肿瘤等疾病患者；②伴随严重心、肝、肾功能不全患者；③合并有免疫系统的其他疾病患者；④存在精神疾病无法配合本研究或依从性差者。根据《RA 患者的病情评分（Disease activity score 28，DAS28）》进行活动度划分［8］：2.6＜DAS28≤3.2 为低活动度组：29 例；3.2＜DAS28≤5.1 为中活动度组：45 例；DAS28＞5.1为高活动度组：28 例。

选取同期进行健康体检的102 例健康志愿者作为对照组。两组性别、年龄、体质指数等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。本研究经医院医学伦理委员会批准通过。

表1 两组一般资料比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general data between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 两组一般资料比较［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of general data between 2 groups［n（%），（±s）］

组别研究组对照组χ2/t 值P 值n 102 102性别（n）男29（28.43）31（30.39）0.094 0.759女73（71.57）71（69.61）年龄（岁）48.42±11.32 46.03±13.17 1.390 0.166体质指数（kg/㎡）23.53±3.14 24.26±2.33 1.886 0.061

1.2 检测方法

取所有受试者清晨空腹静脉全血5 mL，采用未加抗凝剂的标准采样管进行采集，离心（3 000 r/min，10 min）取血清后分别存放在聚丙烯EP 管中，在-80℃冰柜中待检。采用荧光定量PCR 检测PPAR-γ的表达；采用双抗体夹心法检测MMP-3 的表达。通过细针滑膜活检术获取滑膜组织，采用免疫组织化学染色检测Bcl6 的表达，检测严格按照使用说明书进行。Bcl6 阳性判定标准［9］：由2 名以上病理学专家复核判断，取两者平均分为最后得分用，Bcl6 呈细胞核着色，根据阳性细胞百分比、染色强度判定。0 分无阳性细胞，1 分阳性细胞5%～10%，2 分10%～50%，3 分＞50%。染色强度判定：0 分无色，1 分淡黄色，棕黄色2 分，棕褐色3 分。总积分：上述2 项评分的乘积。阳性：总积分≥3 分。

1.3 观察指标

①比较两组不同人群的PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表达水平；②比较不同病情活动程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表达水平；③分析PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 与RA 患者病情活动程度及滑膜炎病理评分的相关性。滑膜炎病理Krenn’s 评分［10］，即为滑膜衬里层增生评分、衬里下层炎症程度评分以及血管生成情况评分累计总和，0 分表示无滑膜炎症；1 分表示轻度滑膜炎症、炎性细胞轻度浸润；2 分表示中度滑膜炎症、炎性细胞中度浸润；3分表示重度滑膜炎症、炎性细胞重度浸润。由2 位风湿科医生进行双人双盲评分，取两者平均分为最后得分。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计量资料采用（）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用F检验；计数资料采用n（%）表示，采用χ2检验；采用Spearman分析PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 与RA 患者病情活动程度及滑膜炎病理评分的相关性，以P＜0.05 为差异具统计学意义。

2 结果

2.1 2 组PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表达水平比较

研究组PPAR-γ、MMP-3 水平及Bcl6 阳性表达率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2、图1。

表2 2 组PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表达水平比较［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 expression levels of the 2 groups［n（%），（±s）］

表2 2 组PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表达水平比较［n（%），（±s）］Table 2 Comparison of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 expression levels of the 2 groups［n（%），（±s）］

组别研究组对照组t/χ2值P 值n 102 102 PPAR-γ（pg/mL）38.52±21.43 10.01±3.04 13.303＜0.001 MMP-3（pg/mL）72.54±21.42 30.26±8.72 18.464＜0.001 Bcl6阳性85（83.33）0（0.00）145.714＜0.001阴性17（16.67）102（100.00）

图1 Bcl6 免疫组化染色（SP，×400）Figure 1 BCL6 immunohistochemical staining（SP，×400）

2.2 不同病情活动程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3及Bcl6 表达水平比较

PPAR-γ、MMP-3 水平及Bcl6 阳性表达：重活动度组＞中活动度组＞低活动度组，各组间比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 不同病情活动程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6表达水平比较［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of expression levels of PPAR - γ，MMP-3 and Bcl6 in RA patients with different disease activity［n（%），（±s）］

表3 不同病情活动程度RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6表达水平比较［n（%），（±s）］Table 3 Comparison of expression levels of PPAR - γ，MMP-3 and Bcl6 in RA patients with different disease activity［n（%），（±s）］

注：a 与低活动度组相比，P＜0.05；b 与中活动度组相比，P＜0.05。

组别低活动度组中活动度组重活动度组F 值P 值n 29 45 28 PPAR-γ（pg/mL）18.39±11.60 32.15±17.62a 41.34±24.55ab 11.25＜0.001 MMP-3（pg/mL）51.63±16.75 67.49±18.39a 83.58±25.27ab 18.01＜0.001 Bcl6 阳性19（65.52）39（86.67）27（96.43）10.445 0.005

2.3 PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 与RA 患者病情活动程度及滑膜炎病理评分的相关性

Spearman 相关分析显示，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 与RA 患者病情活动程度及滑膜炎病理评分呈正相关（P＜0.05）。见表4。

表4 PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 与RA 患者病情活动程度及滑膜炎病理评分的相关性Table 4 Correlation of PPAR-γ，MMP-3 and Bcl6 with disease activity and synovitis pathological score in RA patients

3 讨论

RA 是一类在多种因素作用下发生的自身免疫性疾病，具有较高的致残率。我国是RA 的高发地区，目前大约有400～500 万人患有该疾病，发病率约占0.32%～0.36%［11］。RA 早期易出现关节功能受限、疼痛、肿胀症状，晚期则表现为关节畸形、关节僵硬及关节不同程度的畸形，严重者甚至会出现骨骼肌萎缩和骨头损伤，且病程时间长，若病情控制不佳则可能危及全身脏器系统［12］。现阶段，临床常采用血清学分子指标、临床症状、关节功能以及影像学资料等评估RA 病情活动度，其中血清学指标以简单快捷、准确性高等优势成为指导临床诊治的重要手段。

PPARs 是一类配体依赖的转录调节因子，具有N 端区、居中高度保守的DNA 结合区和C 端的激素结合区［13］。PPARs 配体通常为脂溶性分子，当其与各自的配体结合后可引起机体的变化，促进或抑制靶基因的表达［14］。PPAR-γ 作为PPARs主要的亚型之一，与多种炎性细胞的活性和表达关系密切。PPAR-γ 在原位支气管气道上皮细胞中有表达，可抑制此类细胞的活性，并激活内源性PPAR-γ，拮抗炎性反应。Zhu 等［15］认为PPAR-γ 具有改变巨噬细胞的转运、增加巨噬细胞吞噬功能等作用，可促进实用性免疫反应的发生。Ahn 等［16］研究显示，MMP-3 是一种锌离子依赖酶，负责细胞外基质成分降解为其主要功能，作用于多种基质蛋白底物，MMP-3 过高的表达会导致软骨框架结构崩解，从而破坏患者关节功能。Lei 等［17］研究表明，RA 患者关节液中MMP-3 含量显著升高，检测MMP-3 可为评估RA 病情严重程度提供参考。Yang 等［18］研究发现，BCl6基因位于3q27 染色体，是一种具有锌指结构的转录抑制因子，是B 细胞生发中心的起源。本研究结果与相关研究结果相符［19］。提示RA患者存在PPAR-γ、MMP-3 过表达及Bcl6 阳性表达的情况。BCl6 是生发中心的抗原和调控因子，参与细胞增殖、分化、凋亡、DNA 损伤修复以及炎症过程等。PPAR-γ、MMP-3 表达异常会促进新生血管的生成、免疫逃逸等一些列病理过程，发挥促炎作用。本研究显示，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 的变化与患者病情活动程度及滑膜炎病理评分呈正相关关系，PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 表达水平的上升提示患者病情处于活动、滑膜炎症加重状态，表明PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6三者在评估RA 发生、发展中具有良好的辅助作用。

综上所述，RA 患者PPAR-γ、MMP-3 及Bcl6 水平较健康者显著升高，且与患者病情活动性及滑膜炎病理评分具有一定的相关性，可作为临床诊断RA 和评估病情的辅助检查。