尿液DACH2、OPN、MUC7对膀胱尿路上皮癌的诊断价值

陈开训 孙鹏摇 侯昌霞

膀胱尿路上皮癌属于泌尿系统常见恶性病变，经流行病学调查［1］，全球每年约有40 万新发膀胱癌，且随着人口老龄化加剧和环境污染日益严重，膀胱癌患病率逐年上升，由于该病死亡率较高，故需尽早诊疗［2］。目前膀胱癌主要诊断手段为膀胱镜活检和尿脱落细胞检查，其中膀胱镜活检虽具有较高准确率，但属于有创操作，容易引起出血、尿路感染等并发症，故不可首推；尿脱落细胞检查虽是无创操作，但诊断敏感性低，缺乏统一标准，容易受其他病变影响，因此也不可作为首推。而当下合理选择灵敏性高、操作简便的筛查方式是临床研究重点。通过调查以往研究，学者发现［3］膀胱癌组织高表达蛋白质在膀胱癌中具有一定表达性，其中尿液Dachshund 同源基因2（DACH2）、骨桥蛋白（Osteopontin；OPN）、粘蛋白7（Mucoprotein；MUC7）与膀胱尿路上皮癌的恶性生物学行为呈正相关，但相关研究报道较少。而本文旨在探索尿液OPN、DACH2、MUC7 在膀胱尿路上皮癌发生、发展中表达情况。报道如下。

1 资料和方法

1.1 资料

分析本院的96 例膀胱尿路上皮癌患者基本资料，符合《赫尔辛基宣言》的伦理审查，并将其作为观察组。男性58 例，女性38 例，年龄平均（54.46±10.12）岁；病程平均（12.35±3.21）个月；病理分级［4］：低级别癌55 例，高级别癌41 例。再选取同期48 例健康体检者为对照组，男性28 例，女性20例，年龄平均（54.32±10.22）岁，两组性别、年龄比较无统计差异（P＞0.05）。此次试验在2018年8月至2021年3月期间开展。纳入标准：①观察组经病理学检查，确诊为膀胱尿路上皮癌［4］，且存在尿痛、尿急、尿频等膀胱刺激症状，临床资料齐全；②回顾性分析临床资料齐全的健康体检者。两组排除标准：①合并肝肾功能异常、血液疾病、免疫系统疾病者；②合并感染、其他肿瘤者；③临床资料不齐或因中途转院导致病案缺失者。

病理分级标准［4］：高级别癌：乳头结构纤细、分枝、融合，细胞层次厚度不一，排列紊乱，常缺乏黏附性，细胞核增大，大小不一，形态多样化，可见多个突出的核仁，病理性核分裂象。低级别癌：乳头纤细、融合，细胞层次有极向，轻度细胞拥挤和极向消失，细胞核大小不一，形态呈卵圆形、圆形，大小轻度不一，核仁通常不明显，偶见有丝分裂象。

1.2 方法

OPN、MUC7 检测方式：抽取受检者10 mL 晨起首次洁净尿，离心处理，离心15 min，1 000 r/min，r=75 mm，取上清检测，使用美国THERMO 公司提供Flash3001 型号全自动多功能酶标仪检测OPN、MUC7，予以酶联免疫法。

DACH2 检测方式：留取1mL 清洁中段尿，按照1∶100 比例加入牛血清白蛋白溶液60 g/L，15 min 内对上清进行分离，放于冰箱（-20℃）保存。首先选取0.1 mL 尿样分别加入0.1 mL 标记抗原和0.1 mL 抗体，混匀，温育3 h（37℃），形成结合复合物，加入0.5 mL 分离剂15 min 后，离心20 min，丢弃未结合物质，加入化学发光底物，使用西安仪器厂提供XH-6010 γ 射线计数仪检测DACH2。

1.3 统计学处理

采用SPSS 22.0 统计学软件处理，符合正态分布的计量资料用（）表示，行t检验，计数资料用n（%）表示，行χ2检验；病理分级与OPN、MUC7、DACH2相关性采用Spearman 模型分析；预测价值用ROC 曲线分析，当P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组实验室指标比较

观察组OPN、MUC7、DACH2 高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组实验室指标对比（±s）Table 1 Comparison of 2 groups of laboratory indicators（±s）

表1 两组实验室指标对比（±s）Table 1 Comparison of 2 groups of laboratory indicators（±s）

组别观察组对照组t 值P 值n 96 48 OPN（ng/mL）70.46±4.15 34.15±3.62 51.577＜0.001 MUC7（ng/mL）15.16±3.68 10.22±1.19 9.053＜0.001 DACH2（ng/mL）7.46±1.16 2.13±0.25 31.419＜0.001

2.2 ROC 曲线分析

经ROC 曲线分析，OPN、MUC7、DACH2 早期预测膀胱尿路上皮癌的AUC 分别为0.931、0.911、0.911，将OPN、MUC7、DACH2 纳入Logistic 回归分析，根据回归结果中的回归系数值拟合三项联合诊断的数值计算公式：三项联合=OPN +（-1.026）/（-0.134）*MUC7+（-0.103）/（-0.134）*DACH2，经SPSS22.0 统计得出联合数据；进一步分析显示，三项联合早期预测膀胱尿路上皮癌的AUC 为0.985。见表2。

表2 分析三项指标预测膀胱尿路上皮癌的AUC 值Table 2 Analysis of three indicators to predict the AUC value of bladder urothelial carcinoma

依据AUC 及标准误，采用Z检验AUC 差异。如三项联合与OPN 的AUC 比较：Z=（0.985-0.931）/（0.007*0.007+0.032*0.032）^（0.5）=1.648，P值=［1-NORMSDIST（1.016）］*2=0.098；三项联合与MUC7的AUC 比 较：Z=2.850，P=0.004；三 项 联 合 与DACH2 的AUC 比较：Z=2.850，P=0.004。见图1。

图1 ROC 曲线Figure 1 ROC curve

表4 分析三项指标预测严重程度的AUC 值Table 4 Analysis of the AUC value of the three indicators to predict the severity

2.3 不同病理分级的实验室指标比较

高级别癌患者OPN、MUC7、DACH2 高于低级别癌者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 观察组不同病理分级的OPN、MUC7、DACH2 指标比较（±s）Table 3 Comparison of OPN，MUC7 and DACH2 indexes of different pathological grades in observation group（±s）

表3 观察组不同病理分级的OPN、MUC7、DACH2 指标比较（±s）Table 3 Comparison of OPN，MUC7 and DACH2 indexes of different pathological grades in observation group（±s）

组别高级别癌低级别癌t 值P 值n 41 55--OPN（ng/mL）75.65±3.26 64.13±3.18 17.370＜0.001 MUC7（ng/mL）16.98±2.87 13.63±1.22 7.776＜0.001 DACH2（ng/mL）8.95±1.11 6.65±1.13 9.939＜0.001

2.4 分析相关性

经Spearman 法分析，病理分级与OPN、MUC7、DACH2 呈正相关性（r=0.853；P＜0.001）、（r=0.652；P＜0.001）、（r=0.714；P＜0.001）。

2.5 ROC 曲线分析

经ROC 曲线分析，OPN、MUC7、DACH2 早期预测膀胱尿路上皮癌病理分级严重程度的AUC分别为0.933、0.88、0.917，将OPN、MUC7、DACH2纳入Logistic 回归分析，根据回归结果中的回归系数值拟合三项联合诊断的数值计算公式：三项 联 合=OPN +（- 0.471）/2.287*MUC7 + 0.081/2.287*DACH2，经SPSS22.0 统计得出联合数据；进一步分析显示，三项联合早期预测疾病严重程度的AUC 为0.980。见表4。

依据AUC 及标准误，采用Z检验AUC 差异。如三项联合与OPN 的AUC 比较：Z=（0.980-0.933）/（0.0018*0.0018+0.036*0.036）^（0.5）=1.304，P值=［1-NORMSDIST（1.016）］*2=0.192；三项联合与MUC7 的AUC 比较：Z=2.379，P=0.016；三项联合与DACH2的AUC比较：Z=2.096，P=0.036。见图2。

图2 ROC 曲线Figure 2 ROC curve

3 讨论

膀胱癌发病率位居全世界第四位，是泌尿系统常见恶性肿瘤，膀胱尿路上皮癌占据膀胱癌发病率的90%，具有预后差、病情进展快、恶性程度高特点，存在多种变异性，死亡率较高，故需尽早开展诊疗［5］。近年来，肿瘤标记物逐渐步入临床，虽具有性价比高、操作简便等优势，但诊断结果容易受到多种因素影响，且敏感性未达到预期效果，故需另选择简便、可靠的检测方式，以便为疾病判定早日提供依据［6］。

MUC 是一类高分子量糖蛋白，由泌尿生殖道、呼吸道、消化道等腺上皮合成的蛋白，具有多种生物学功能，可在不同基因和蛋白表型中发挥作用。MUC7 是粘蛋白家族中一员，在人染色体中位于4q132q21，分子量370000，编码基因表达核心由357个氨基酸组成，常存在于结膜和唾液腺中［7］。在本次结果中，观察组MUC7 高于对照组，说明MUC7在膀胱癌患者中具有较高表达性。推测原因是，粘蛋白可改变细胞间相互黏附特性，发挥润滑作用，有助于癌细胞浸润生长，虽然适量的粘蛋白在膀胱组织中，能够发挥一种物理性保护屏障，减少酶、毒素、微生物对黏膜损害，抑制结晶微粒和细菌黏附，保护膀胱上皮细胞，但当上皮组织发生癌变时，MUC7 含量可明显上升，形成一种空间，阻碍封闭细胞表面抗原，一旦癌细胞进入淋巴系统和血液，容易存活，并形成转移灶［8］。而本次高级别癌患者MUC7 高于低级别，从而论证此项说法，MUC7 表达过量可能与肿瘤病变分级、浸润有关，在膀胱尿路上皮癌患者疾病发生、发展中具有一定影响性。

OPN 最早是在1979年发现的转化相关蛋白，由恶性上皮细胞分泌，属于多功能磷酸化糖蛋白［9］。苗德芳［10］学者在文中提到OPN 在直肠腺癌发生、发展、预后中均具有一定影响性。本次结果提示OPN对膀胱癌诊断具有潜在价值。而异常表达可能与促进细胞因子黏附、癌细胞趋化性转移、肿瘤血管生成有关［11］。同时高级别癌患者OPN 高于低级别癌患者，说明OPN 含量变化可受到病理分级影响。推测原因是，OPN 能够通过激活EGER，使得下游信号通路改变，活化丝裂原活化蛋白激酶、磷脂酰肌醇3 激酶，促进肿瘤血管生成，加速癌细胞增殖［12］。因此有学者认为［13］，可通过研究OPN 导致肿瘤发生发展机制，为治疗肿瘤提供新的靶点。

DACH基因主要是编码与生殖盘发育相关蛋白，DACH2 在苗勒管内有表达［14］。本次结果说明DACH2 在膀胱尿路上皮癌患者中存在不同表达含量，且DACH2 表达含量与病理分级有关，随着病理分级越严重，DACH2 含量升高越明显。推测原因是DACH2 能够借助患者自身的内源性Smad4 和Ncor 相互作用，导致下游信号靶分子表达下调，抑制TGF-β 信号通路传递，促使癌变细胞增殖、分裂［15］。经Spearman 法分析，病理分级与OPN、MUC7、DACH2 呈正相关性，说明上述指标均参与了膀胱尿路上皮癌患者整个致病过程。

综上所述，OPN、MUC7、DACH2 参与了膀胱尿路上皮癌患者发生、发展全过程，作为新型预测指标具有良好应用前景，目前已逐渐被更多学者重视，但本研究尚未探讨指标之间相互影响、作用性，故关于OPN、MUC7、DACH2 指标之间相关性还有待深入研究。