衢枳壳与其他三大主产区枳壳对功能性消化不良大鼠理气作用的比较研究

马永力，陈红梅，方新华，王鑫昱，葛卫红

(1浙江中医药大学附属杭州市中医院,杭州市中医院·浙江 杭州 310053；2杭州市丁桥医院·浙江 杭州 310053；3浙江中医药大学·浙江 杭州 310053)

衢枳壳自2016年8月被2015版《浙江省炮制规范》收录以后，在浙江省范围内，衢枳壳逐渐替代其他产区的枳壳在临床上被大量使用。目前枳壳主流商品种类主要有川枳壳、江枳壳、湘枳壳和浙产衢枳壳四大类[1]，不同产地枳壳价格差异较大，其中衢枳壳最便宜。虽然衢枳壳各项检测项目均符合2015版《中国药典》的标准，但是衢枳壳能否在不降低甚至提高枳壳质量及临床疗效的前提下作为价廉质优的品种大量使用，还需要比较衢枳壳与其他主流产区枳壳的主要药理作用。本研究基于枳壳理气消胀功效，以大鼠的体质量、24 h代谢值、小肠推荐率、胃残留率及血浆和组织GAS、MTL、SS含量为指标，比较衢枳壳与其他三大主产区枳壳的理气作用。

1 实验材料

1.1 实验动物 取健康SPF级雄性SD大鼠56只，体质量(250±20)g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，动物生产许可证号：SCXK(沪)2018-0006。于浙江中医药大学动物实验研究中心饲养。饲养许可证号SYXK(浙)2018-0012。

1.2 药物 分别从浙江常山、浙江龙游、浙江衢州市柯城、湖南益阳、江西新干、江西樟树、重庆江津购得18个批次枳壳药材，经浙江中医药大学中药饮片厂钱敏主管中药师鉴定为芸香科植物常山胡柚Citruschangshan-huyouY.B.Chang、酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种的干燥幼果，选取含量符合《中国药典》2020年版规定的各主产区枳壳0.3 kg，打成粗粉，加入1 000 mL去离子水，浸泡1 h，加热回流2次，两次过滤后合并滤液，减压浓缩至300 mL，最后得到1 g/mL的枳壳提取液，放置在冰箱保存备用。多潘立酮片：西安扬森制药有限公司，批号：JKJI1697，碾碎并制备成1 g/L的混悬液。

1.3 试剂与仪器 大鼠GAS、MTL、SS酶联免疫吸附试剂盒(批号：Ml203981、Ml003079、Ml003102)：苏州卡尔文生物科技有限公司。 C16000全自动生化检测仪：雅培公司；DM3000正置荧光显微镜：Leica；AVANTI J-26 XP离心机：美国Bechmen公司。

2 实验方法

2.1 动物分组、模型制备及给药处理 56只SD大鼠代谢笼法记录每组大鼠24 h饮食量和饮水量，然后根据饮食量与体质量随机分为7组，正常对照组、模型对照组、阳性对照组、衢枳壳组、江枳壳组、川枳壳组、湘枳壳组，每组8只。正常对照组正常喂养14 d，余下6组按“不规则喂养法配合夹尾刺激法”[2]造模14 d：将大鼠正常喂水，单日喂食，双日禁食[3]；每日早晨9:00称量大鼠的体质量并做记录，并用长海绵钳夹大鼠尾巴末端1/3处，以令其尖叫挣扎但不破皮为度，使它发怒并和其他大鼠厮打(若有抓伤，予碘伏消毒伤口，以防感染)，每次刺激30 min，每日9:00与15:00各刺激1次，连续刺激14 d[3]。成模标准造模大鼠24 h饮食量、饮水量、尿量显著低于正常组。造模结束后，各组大鼠均正常喂养。正常对照组及模型组大鼠给予生理盐水10 mL/kg灌胃，阳性组给予多潘立酮3 mg/kg灌胃，衢枳壳组、江枳壳组、川枳壳组、湘枳壳组均以4 g/kg剂量灌胃；每日灌胃1次，连续14 d。

2.2 观察指标及检测方法

2.2.1 一般状态 每日观察各组大鼠体质量、毛发状态、动作敏捷程度、精神状态、粪便形态等情况。

2.2.2 代谢指标 给药结束时测定各组大鼠24 h进食量、24 h饮水量和24 h排尿量，并记录结果。

2.2.3 小肠推进率、胃排空率测定 末次给药后禁食、不禁水12 h，以1.1 g/mL的面糊给大鼠灌胃(10 mL/kg)，灌胃面糊 30 min后，麻醉大鼠，结扎胃贲门和幽门，取胃窦和小肠，计算胃排空率及小肠推进率。

2.2.4 大鼠血浆GAS、MTL、SS含量测定 末次给药后禁食、不禁水12 h，麻醉大鼠，大鼠腹主动脉取血，3 500 r/min离心15 min，分离血浆，置于-80 ℃冰箱备用。ELISA检测血浆GAS、MTL、SS含量。

2.2.5 胃窦组织病理观察 取各组大鼠胃窦组织置入4%多聚甲醛溶液中，样本经石蜡包埋后，切成4μm的切片，做常规HE染色，光镜下观察各组大鼠胃窦组织病理变化情况。

3 结果

3.1 各组大鼠一般状态变化 与正常组相比，模型组大鼠体质量极显著降低(P<0.01)；与模型组相比，衢枳壳组、江枳壳组、川枳壳组、湘枳壳组与多潘立酮组大鼠体质量均显著增加，其中湘枳壳组大鼠体质量增加极显著(P<0.01)，多潘立酮组、衢枳壳组、江枳壳组、川枳壳组增加显著(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠体质量比较

在造模期间，模型组大鼠毛发光亮平滑，动作敏捷，精神状态良好，粪便状态为正常的颗粒状。与正常组大鼠相比，造模组大鼠的毛发油腻糟乱，精神较为萎靡，易怒，排便减少且粪便质地软，形状不规则。与模型组大鼠相比，各给药组大鼠均有改善；其中阳性药组效果优于衢枳壳组，衢枳壳组效果略优于其他3组。

3.2 各组大鼠代谢指标变化情况 见表2。

表2 各组大鼠饮水量、摄食量、尿量的比较

3.3 各组大鼠小肠推进率、胃排空率测定结果 见表3。

表3 各组大鼠小肠推进率、胃排空率测定结果比较

3.4 各组大鼠血浆GAS、MTL、SS 含量ELISA检测结果 见表4。

表4 各组大鼠血浆GAS、MTL、SS含量比较

3.5 各组大鼠胃窦组织病理观察 HE染色结果可见，各组大鼠胃窦无明显病理变化，未发现器质性损伤。染色后胃黏膜呈粉红色， 胃黏膜无腺体萎

缩，仅模型组有少量淋巴细胞浸润。胃肌层无明显病理变化。

4 讨论

功能性消化不良(FD)是常见的消化系统功能性疾病,其临床表现为持续或反复发作的上腹胀、上腹痛、早饱、嗳气等。古代文献及现代药理研究均证实枳壳对FD有显著的治疗作用。枳壳对胃肠平滑肌呈双向调节作用，既能够兴奋胃肠，增强肠胃蠕动，又能够降低胃肠平滑肌张力，具有解痉作用[4]。许多权威专家认为FD的基本病机为气机升降失常，临床上应将调畅气机作为治疗FD的基本治则，实际临床应用中枳壳成为治疗FD的主要药物[5-7]。官扬、祝婧等[8-11]实验亦证明枳壳对FD、脾虚型胃肠动力障碍、功能性便秘模型大鼠均有显著改善作用。

FD动物模型要有相应的“证”，且没有器质性损伤，故FD动物实验造模方法众多。典型的造模方法有苦寒法、饮食不节和劳倦过度法、偏食法、饮食失节法、利血平法、耗气破气法、耗气破气加饮食失节法、模拟情志因素法等[12]。多因素复合制作的动物模型,以疾病模型为基础，相对可靠、客观，又额外施加中医病因干预因素，使造模成功的几率大大提升，同时模拟人体发病病因复杂的特点,更加符合中医病因病机理论[13]。在中医学中，FD多为脾虚肝郁证型，改变大鼠正常饮食节律，导致其脾胃虚弱，脾气不运，又因用夹尾法刺激致其肝郁气滞，进而克制脾土，故出现饮食不佳，大便稀溏，气味臭秽刺鼻，性情暴躁，易被激惹等症状，表示造模成功[14]。由于 FD 的发生不仅是饮食不当这一单因素引起，还与患者的情志，精神状态等多因素有关，故“不规则喂养法配合夹尾刺激法”联合建立 FD 大鼠模型较单一因素更符合临床[14]。

本研究显示，与正常组比较，模型组大鼠的体质量、24 h饮水量与摄食量、胃排空率及小肠推进率、血浆GAS、MTL含量明显降低，SS含量明显升高。与模型组比较，经4组枳壳干预后，各给组大鼠的体质量、24 h饮水量与摄食量、胃排空率及小肠推进率、血浆GAS、MTL含量明显提升，血浆SS含量明显降低。衢枳壳组大鼠的胃排空率、小肠推进率及一般情况优于江枳壳组、川枳壳组与湘枳壳组大鼠；江枳壳组、川枳壳组与湘枳壳组各指标比较没有显著性差异。

综上所述，四大产区枳壳对FD模型大鼠均有理气作用，其中衢枳壳对FD大鼠的理气作用优于江枳壳、川枳壳与湘枳壳；江枳壳、川枳壳与湘枳壳理气作用没有显著性差异。衢枳壳作为浙江产道地药材，不仅价格便宜，而且具有良好的理气作用，可以作为作为价廉质优的枳壳品种大力推广使用。