百药煎质量标准研究

华丽萍

（常州市武进中医医院，江苏 常州 213161）

0 引言

百药煎又名制百药煎、百草煎，为漆树科植物盐肤木Rhus chinensis Mill.、青麸杨Rhus potanin Ⅱ Maxim.或红麸杨Rhus pun-jabensis Stew.var.sinica (Diels) Rehd.et Wils.叶上的虫瘿,即五倍子，同茶叶、酒糟或酒曲等经发酵制成的块状物[1]，主要成分为五倍子中可水解鞣质水解后产生的没食子酸[2-3]，具有清热化痰，生津止渴等功效，临床上可用于肺热咳嗽，风火牙痛，口舌糜烂，久痢脱肛等症的治疗[4]。目前百药煎在《浙江省炮制规范（2015 年版）》《四川省炮制规范（2015年版）》等地方标准中有收载，但是各版本质量标准检查方法或检查项均或多或少存在不合理之处，本研究通过对多批次百药煎的性状、鉴别、检查（水分、总灰分、黄曲霉毒素）、没食子酸含量测定、微生物限度等进行研究，从而建立一种科学、合理的评价百药煎质量的标准及方法。

1 材料

1.1 仪器

Agilent1100 高效液相色谱仪（VWD 检测器，美国安捷伦科技有限公司）；1/10 万电子分析天平（BP-211D 型，德国Sartorius）；Agilent 1260 液相色谱仪（FLD 检测器，美国安捷伦科技有限公司），METTLER XS-205 电子天平；医用超声波清洗仪（KQ-1000E 型，昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

百药煎（编号S1-18），经南京中医药大学附属医院刘辉主任鉴定为五倍子经发酵而制成的干燥曲块，详见表1。

表1 百药煎样品信息

没食子酸对照品（购自中国食品药品检定研究院，批号：110831-200803）；黄曲霉毒素混合对照品（购自中国食品药品检定研究院，批号：610001-201703）；聚酰胺-6-薄膜（购自国药集团化学试剂有限公司，批号：20160906），五倍子对照药材（购自上海源叶生物科技有限公司，批号：Z20A9B68266）。

乙腈、甲醇为色谱醇，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 性状

所收集的18 批样品中S11、S17 为灰白色块状物。气微，味酸、涩、微甘；S6、S14、S16 为棕褐色块状物。气微，味酸、涩、微甘；其他批均为黑褐色块状物。气微，味酸、涩、微甘。规定本品性状为：灰白色至黑褐色块状物，气微，味酸、涩、微甘。

2.2 鉴别

取本品粉末0.2g，加甲醇10mL，超声处理15min（功率280W，频率53kHz），滤过，滤液作为供试品溶液。另取五倍子对照药材0.5g，加甲醇10mL，超声15min，滤过，滤液作为对照药材溶液。再取没食子酸对照品，加甲醇制成每1mL 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015 版四部附录0502）试验，吸取供试品1μL、对照药材溶液，对照品溶液各3μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以75%乙醇-冰醋酸（50:1）为展开剂，展开，取出晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液显色，日光下检视。

2.3 检查

2.3.1 水分

取供试品适量，照2015 版《中国药典》四部通则0832 水分测定法（第二法）测定，结果见表2。

表2 18 批百药煎水分、总灰分、黄曲霉毒素、没食子酸含量测定结果

18 批样品中最高水分9.37%，最低水分6.67%，平均水分为8.01%，以平均值的120%设限，规定本品的水分应不得过10.0%。

2.3.2 总灰分

取供试品适量，照2015 版《中国药典》四部通则2302 灰分测定法（第一法，总灰分测定法）测定，结果见表2。

18 批样品中最高总灰分3.12%，最低总灰分1.51%，平均总灰分为2.50%，以平均值的120%设限，规定本品的总灰分应不得过3.0%。

2.3.3 黄曲霉毒素

照黄曲霉毒素测定法（《中国药典》2015 年版四部通则2351 第一法）测定。

结果所测的18 批样品均未检出黄曲霉毒素，但由于本品为发酵类中药饮片，且所检测的样本量有限，因此仍将黄曲霉毒素检查列入百药煎质量标准。

2.4 含量测定

百药煎主要成分为五倍子可水解鞣质水解后产生的没食子酸，没食子酸具有确切的抗炎、抑菌作用[5-7]，与百药煎功效一致，因此通过测定没食子酸的含量，可以有效的控制其质量。

2.4.1 对照品贮备液的制备

取没食子酸对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1mL 含178.04μg 的对照品贮备液，备用。

2.4.2 供试品溶液的制备

取百药煎粉末（过四号筛，170103）约0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理20min（功率280W，频率53kHz），放冷，再称定重量，以提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1～50mL 量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4.3 色谱条件与系统适用性实验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1%磷酸（15:85）为流动相；柱温为30℃，检测波长273nm，理论塔板数按没食子酸峰计算应不低于3000。

2.4.4 线性关系考察

精密吸取“2.4.1”项下的对照品储备液适量，加50%甲醇分别稀释1、2、5、10、25、50 倍，制成质量浓度为4.45μg/mL、8.90μg/mL、17.80μg/mL、35.61μg/mL、89.02μg/mL、178.04μg/mL的对照品溶液，精密吸取各对照品溶液10μL，依法进样，记录峰面积。以进样浓度为横坐标（X，μg/mL），峰面积为纵坐标（Y），进行回归，没食子酸的线性回归方程为Y=31.367，X=10.019，R2=1，表明没食子酸在此浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.5 精密度试验

精密吸取没食子酸对照品溶液（35.61μg/mL）10μL 注入液相色谱仪，重复进样6 次，没食子酸峰面积的RSD 为0.32%。表明仪器的精密度良好。

2.4.6 稳定性试验

取供试品溶液及对照品溶液10μL，于0、2、4、8、12、24h 时分别进样，每次进样量10μL，测定，计算。对照品溶液中没食子酸24h 内峰面积的RSD 为0.60%、样品溶液中没食子酸24h 内峰面积的RSD 为1.29%，表明溶液稳定性良好。

2.4.7 重复性试验

取百药煎粉末（过四号筛，170103）约0.1g，共6 份，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下方法进样，测定，计算。结果，没食子酸平均含量为45.12%，RSD 为0.58%。结果表明重复性良好。

2.4.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的百药煎粉末（过四号筛，170103）约50mg，共6 份，精密加入相应量对照品，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下方法进样，测定，计算，结果见表3。

表3 加样回收率试验结果

试验结果表明，该方法准确性良好。

2.4.9 含量测定

取百药煎样品，按“2.4.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.4.3”项下方法进样，测定，计算，没食子酸含量（按干燥品计算）测定结果见表2。

测定的18 批百药煎中没食子酸含量为12.01%～52.83%，平均含量为39.89%，取平均值的80%设限，规定百药煎中没食子酸含量应不低于30.0%。

2.5 微生物限度

照微生物限度检查法（《中国药典》2015 版四部附录1106）检查，不得检出沙门菌（10g），耐胆盐革兰阴性菌应小于104cfu（1g）。

18 批百药煎样品中未检出沙门菌，耐胆盐革兰阴性菌检查符合规定。

3 讨论

性状研究过程中发现，采用米酒曲发酵后所得百药煎饮片颜色较白酒曲浅，同种酒曲发酵后切片干燥者较粉碎后压片的饮片颜色深，而饮片颜色与其他指标之间无相关性，因此将本品性状描述为：灰白色至黑褐色块状物。由于所检查的各批次百药煎样品总灰分均小于5.0%且本品非根类药材及制品，因此不进行酸不溶性灰分检查[8-9]。研究发现《四川省中药饮片炮制规范》及部分文献研究中百药煎没食子酸含量测定方法参考药典的水解法进行测定，即加4mol/L 的盐酸水浴3.5h 后测定[10-13]。而采用水解法测定则极不科学，该法不能区分其是否经历了发酵过程。在没食子酸含量测定方法研究过程中我们对样品处理方法进行了详细研究，主要对提取溶剂、溶剂体积、提取次数、提取时间等进行考察后最终确定了百药煎含量测定供试品处理方法[14-15]。

本标准研究过程收集了不同厂家、不同批号共计18 批百药煎样品，此外我们还制备了6 批以进行验证，结果表明制订的标准合理、可行，专属性强，可为百药煎质量标准的制订提供依据。