妇可靖胶囊治疗慢性盆腔炎大鼠疗效及其作用机制研究*

崔蕾 郭延丽 卫培峰 朱丽红*

(1.咸阳市中心医院，陕西 咸阳 712000;2.陕西中医药大学，陕西 咸阳 712046; 3.陕西中医药大学第二附属医院，陕西 咸阳 712000)

盆腔炎性疾病指女性上生殖道及其周围组织的发生感染类的疾病，若盆腔炎性疾病没有得到及时正确的治疗，则会发展成为慢性盆腔炎，现代医学称为盆腔炎性疾病后遗症[1]。慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease， CPID)[2]是在女性内生殖器及其周围结缔组织中发生的一种慢性感染性疾病，例如，子宫内膜炎、输卵管炎、卵巢炎等，盆腔炎是中医中常见且困难的妇科类别，其特点是病程长，复发率高且难以根治。在古书医籍中，未曾出现过“盆腔炎”“慢性盆腔炎”或“盆腔炎性疾病后遗症”等词，但根据其临床表现，可将这类疾病归属于“带下病”“癥瘕”“腹痛”“月经失调”“不孕”“热入血室”等范畴[3]。目前，西医主要使用抗生素来治疗CPID，激素和理疗也有一定的作用，但无法达到根治的目的，因而大多数患者体内仍会残留少量致病菌，若是使用大量的抗生素，人体会产生耐药性，并伴随着多种不良反应[4]。近年来，中医药显示出高治愈率，低毒和副作用等优点，并引起了越来越多的关注[5]。中华中医药学会组编《中成药临床应用指南 感染性疾病分册》[6]中将慢性盆腔炎性疾病分为湿热瘀阻、气滞血瘀、气虚血瘀、寒湿瘀阻4个证型。FKJC由北败酱、延胡索、香附、红花和其他中药组成，可利湿清热、散结行气、补气血，临床医师常用来治疗CPID且效果明显[7]，但其治疗机理尚不清楚。在该试验中，建立了CPID大鼠模型，观察大鼠子宫组织形态，大鼠血清相关炎性介质及子宫组织中相关基因表达的变化，探讨FKJC对CPID患者的疗效及作用机理，从现代医学的角度进行阐述。

1 材料与方法

1.1试验药物 FKJC，甘肃省西峰制药有限责任公司；KFKC，陕西康惠制药有限公司。FKJC辅以蒸馏水配制成低、中、高，分别为0.27 g/kg，0.54 g/kg，1.08 g/kg的混悬液；KFKC配置成0.65 g/kg的混悬液。

1.2试验动物 雌性SD大鼠65只(河北医科大学实验动物中心，许可证号：SYXK(冀)2018-0048)。

1.3试剂 南京宁康化工有限公司生产的批号为20180708的苯酚；南京建成生物工程研究所生产的ELASA 试剂盒；大鼠肿瘤坏死因子α；上海哈灵生物试剂检测中心生产的戊巴比妥钠；白介素-1β；采血器；将苯酚液化取5 mL加入西黄芪胶1 g和甘油4 mL，最后用蒸馏水定容到20 mL即可得到25 %苯酚胶浆；成纤维细胞生长因子2、胰岛素样生长因子1；购买美国Abcam公司生产的一抗、二抗。

1.4仪器 绍兴精博检测仪器有限公司生产型号为4XC的显微镜；无锡明垚化工设备有限公司生产的石蜡切片机；韩国 BIONEER 公司生产的PCR仪；北京澎昆博远公司生产的凝胶成像系统；日本SANYO 公司生产的超低温冰箱；深圳亚王万相科技有限公司生产的电泳仪及电泳槽；高速冷冻离心机(GL10MA)。

1.5方法

1.5.1造模 购买65只SD雌性大鼠，喂养1周，随后，任取55只大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠40 mg/kg，将其周围毛发剔除，碘伏处理，从下腹正中间，切口直径0.8 cm～1cm，使子宫暴露，注射器吸取提前制备好的25%苯酚胶浆0.08 mL，将针头慢慢的插入子宫分叉处，逐层缝合，用碘伏消毒防止感染。随后将剩余的10只大鼠用相同的方式进行麻醉，打开腹腔，再使用标准注射器将等量的生理盐水注入子宫[8]。造模完成14 d后，随机选择其中的五只大鼠，检验是否造模成功。

1.5.2分组 随机分为6组，空白对照组即假手术组，模型组， KFKC组，FKJC高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组10只。

1.5.3给药方法 分组之后，分别对阳性药KFKC组(0.65 g/kg)、FKJC高(1.08 g/kg)、中(0.54 g/kg)、低(0.27 g/kg)剂量组，灌胃治疗，按10 mL/kg给药剂量给予假手术组和模型组等量的生理盐水作对照，1次/天，持续28d。

1.5.4测定血清中1L-1β和TNF-α的含量 最后一次给药后，禁食12h天后处理，每千克加入 40毫克的戊巴比妥钠麻醉，收集腹主动脉的血液，静置半小时，以3000 r/min离心十分钟，取上清液，按酶联免疫吸附试验试剂盒说明书分别对血清1L-1β和TNF-α的含量进行检测。

1.5.5观察大鼠子宫组织 腹主动脉收集血液之后，取出卵巢，观察子宫形态。记录其是否正常，将子宫分为两部分处理，一部分用石蜡包埋切片法，具体步骤参照吕耀中作者的文献中所采用的方法。对大鼠CPID模型病理评分标准参照黄露学者文献中的标准[10]。

测定子宫组织FGF-2和IGF-1蛋白表达水平 剩余部分子宫组织采用蛋白免疫印迹法(Western blot)法，检测FGF-2、IGF-1蛋白表达水平。具体步骤参照朱兰[14]文献中的方法。

1.5.6统计学方法 采用SPSS 25.0 软件对数据进行分析，数据用(XS)表示，p<0.05，表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1FKJC对CPID大鼠血清中1L-1β，TNF-α含量的影响 假手术组与模型组之间存在着显著性差异，表明建模成功。即模型组1L-1β及TNF-α的含量明显升高(p<0.05)，经给药治疗以后，各治疗组相比于模型组均下降(p<0.05)。FKJC各剂量组之间差异均有统计学意义(p<0.05)。见表1。

表 1 FKJC对CPID大鼠血清中TNF-α、IL-1水平的影响

2.2FKJC对CPID大鼠子宫组织病理学评分的影响 假手术组大鼠子宫正常。模型组的子宫组织出现了宫腔缩小，内分泌液增多，宫体水肿粗大，末端呈球状凸起，子宫内膜充血，骨盆黏连的症状，与模型组比较，FKJC高、中剂量组能改善CPID大鼠的子宫腔壁结构，减轻了内膜表面上皮细胞坏死、炎细胞浸润以及固有层充血的症状。表明用FKJC治疗后，子宫充血肿胀的现象明显减轻。见表2。

表 2 CPID大鼠子宫组织病理学评分

2.3FKJC对CPID大鼠子宫FGF-2、IGF-1蛋白表达的影响 模型组大鼠的子宫组织IGF-1、 FGF-2蛋白含量显著增加；与模型组相比，FKJC高、中剂量组FGF-2、IGF-1蛋白表达减少(P<0.05)，且这种变化趋势在妇可靖胶囊各剂量组表现出剂量依赖性，剂量越大，变化越明显。见表3。

表 3 CPID 大鼠子宫组织中FGF-2、IGF-1蛋白表达水平

3 讨论

慢性盆腔炎(CPID)[12]属于妇科常见病，发病率逐年增加。现代西方医学认为[13]，盆腔炎性疾病的病原体有外源性和内源性两种。内源性病原体：主要来源寄居于阴道内的菌群，包括需氧菌及厌氧菌。外源性病原体：中支原体、衣原体感染与输卵管积水相关性较大。西医常对症下药，主要根据药敏实验选用抗生素，杀死或抑制致病菌，此治疗措施仅对急性盆腔炎患者疗效显著，对CPID的疗效较差，安全性较低[14-15]。中医学采用整体观念，辨证论治，认为此病诱因多由湿热瘀结、气滞血瘀、寒湿血瘀、气虚血瘀、肾虚血瘀等引起。治疗也采用辨证论治，如清热利湿、化瘀止痛，疏肝行气、活血化瘀，温经通络、化瘀止痛或补肾活血、散结止痛等[16]。近年来，研究表明，中药可明显改善盆腔炎临床症状，且毒副作用较小，优于西药[17]。FKJC[7]是由北败酱草、延胡索、香附、红花、柴胡等制成的中成药，具有利湿清热、散结行气的作用。现代药理学研究表明活血化瘀药可以改善血液动力学、血液流变学、抗血栓、抗炎、镇痛[18]。清热药可以抗菌、抗炎，抗病原微生物等[19]。

研究表明[20]，CPID患者不只是感染炎症，还可能与细胞因子(TNF-α、1L-1β)的异常表达密切相关。TNF-α是由单核细胞和巨噬细胞分泌的一种单核因子，具有双向调节作用。当TNF-α大量释放时，加速了炎性细胞的聚集活化，使炎症加重，当TN-α释放量适中时，可以增强机体的免疫应答，从而抵抗病原体的入侵，阻止炎症的扩散。1L-1β是由胶质、内皮及神经元细胞合成分泌而来，可以诱导炎性介质产生，使白细胞与内皮细胞的黏附力增强[23]。FGF-2通过与特异性受体结合，对成纤维细胞和血管内皮细胞具有强烈的调节作用。FGF-2在病理状态下，过度表达，会刺激成纤维细胞和血管内皮细胞增殖活化失常，导致胶原蛋白产生速度大于消耗速度，ECM代谢失衡，沉积于细胞之间，组织发生增生纤维化改变[24]。IGF-1是一种在分子结构上与胰岛素类似的多肽类蛋白物质。它可以促进机体有丝分裂，参与机体的新陈代谢等多种代谢途径[25]。

本研究通过观察子宫形态，结合病理学评分，发现子宫肿胀、充血及黏连程度有显著改善。FKJC组大鼠治疗后，血清炎性因子1L-1β、TNF-α的含量显著降低；验证了FKJC对CPID产生积极的治疗效果。相关研究发现[22]，FGF-2和IGF-1可能参与宫腔黏连的形成，原因在于当宫腔黏连加重时，也会增加FGF-2和IGF-1在黏连组织中的表达，成纤维细胞的过度增殖和分化就是由于FGF-2过表达， IGF-1加速子宫内膜纤维化的形成[7]。

综上所述，FKJC可能通过降低炎症组织中FGF-2、IGF-1蛋白表达水平，从而减轻CPID的症状。这为后续FKJC治疗CPID的临床疗效及可能作用机制提供了理论支持。