UPLC-QTOF-MS法检测白酒中9种有机酸
2021-08-24吴文睿方颂平蒲顺昌刘开放董书甲刘飞翔
刘 露， 吴文睿， 方颂平， 蒲顺昌， 丁 斌，邢 爽， 刘开放， 董书甲， 董 琪， 刘飞翔
(1.亳州学院 生物与食品工程系，安徽 亳州 236800；2.养生型配制酒亳州市重点实验室，安徽 亳州 236800)
酒类产品按酿造工艺划分可分为发酵酒、蒸馏酒和配制酒。常见得酒类，有白酒，啤酒，黄酒和果酒等，由于所用原料及加工方法不同，各种酒中所含物质成分和种类也不尽相同，其中酒中的有机酸类物质具有重要的生物活性和功效，如抗氧化、降血糖及抗肿瘤等作用，关于酒中酸类物质功效及检测方法的研究报道有很多，其中检测方法主要有重量法、高效液相色谱法、分光光度法、毛细管电泳法、薄层色谱法和化学发光分析法等。分光光度法用于测定单一酚酸物质的量或浓度，主要估算混合物或提取物中总酚酸物质含量，不能对各种酚酸物质分别定量；薄层色谱法和柱层析法能对上述酸类物质进行分离，成本低廉，但分析时间长、只能半定量、重复性差。本研究建立了一种UPLC-QTOF-MS法检测白酒中9种酸类物质的方法，该方法前处理简单，流动相常见易得，可实现白酒中9种酸类物质14 min以内的快速分离。同时本方法的开发也可以为其他酒类中酸类物质的检测提供一定的理论参考。
1 材料方法
1.1 仪器与试剂
超高效液相色谱飞行时间质谱仪(美国Waters公司)；色谱柱：Waters T3柱(50 mm×3 mm×1.8 μm)；电子天平：0.1 mg(梅特勒公司)；旋转蒸发仪(步琦)；超纯水机(密理博)。
市售白酒；乙腈(CNW色谱纯)；酒石酸标准品(CNW，≥99.4%)；苹果酸标准品(CNW，≥99.9%);琥珀酸标准品(CNW，≥99.0%)；没食子酸标准品(ANPEL，≥99.0%)；绿原酸标准品(CNW，≥98.0%)；对香豆酸标准品(ANPEL，≥98.0%)；咖啡酸标准品(CNW，≥98%)；阿魏酸标准品(ANPEL，≥98.0%)；木犀草素标准品(ANPEL，≥98.0%)。
1.2 方法
1.2.1 样品前处理方法 样品经过旋转蒸发仪蒸发除醇后进样。
1.2.2 色谱条件 色谱柱：Waters T3(50 mm×3 mm×1.8 μm)；柱温：30 ℃，进样量2 μL；流动相：水-乙腈，流速0.3 mL/min，流动相梯度洗脱程序见表1。其中A为乙腈，B为超纯水。
表1 流动相梯度洗脱程序
1.2.3 质谱条件 本实验质谱条件采用电喷雾-负离子选择离子监控模式，其他质谱条件见表2。
表2 质谱条件
2 结果与分析
2.1 系统适应性试验
9种酸类物质的总离子流图见图1。按照保留时间顺序9个色谱峰分别为酒石酸、苹果酸、琥珀酸、没食子酸、绿原酸、对香豆酸、咖啡酸、阿魏酸和木犀草素。其中图2为9种酸类物质各自离子流图，其中a为酒石酸离子流图，其保留时间为0.48 min，b为苹果酸离子流图，其保留时间为0.63 min，c为琥珀酸离子流图，其保留时间为1.69 min，d为没食子酸离子流图，其保留时间为2.76 min，e为绿原酸离子流图，其保留时间为6.07 min，f为对香豆酸离子流图，其保留时间为7.96 min，g为咖啡酸离子流图，其保留时间为8.42 min，h为阿魏酸离子流图，其保留时间为8.66 min，i为木犀草素离子流图，其保留时间为10.19 min。由图可得，9种酚类系统适应性试验符合要求，保留时间附近无杂质干扰。
图1 9种酸类物质总离子流图
图2 9种酸类物质各自离子流图
2.2 标准曲线的建立
9种酸类物质的标准品的母液用超纯水稀释至浓度梯度分别为100、200、300、400、500 μg/L，此浓度梯度下的9种酸类物质的标准曲线见表3。
表3 9种酸类物质的线性回归方程及R2
2.3 分析方法的验证与样品检测
2.3.1 方法精密度测试
2.3.1.1 重复性实验 对同一白酒加标样品进行6次检测，9种酸类物质的含量结果见表4。
表4 样品重复性测试结果
表4可以看出，白酒样品中9种酸类物质的重复性试验分别在1.03%～3.58%之间,基本符合要求。
2.3.1.2 重现性试验 对6个相同加标量下的白酒加标样品进行检测，9种酸类物质的测定结果见表5。
表5 样品重现性测试结果
由表5可以看出，白酒样品中9种酸类物质的重现性试验分别在1.20～4.35%之间，基本符合要求。
2.3.2 方法加标回收率 加标回收率测试结果见表6。
表6可以看出，白酒样品中9种酸类物质的3个加标量下的加标回收率在88.99%～112.52%之间，符合分析方法要求。
表6 加标回收率实验结果
3 结论
本文采用电喷雾-负离子选择离子(SIR)监控模式，建立了一种UPLC-QTOF-MS法检测白酒中9种酸类物质的方法，该方法前处理简单，流动相为常见的乙腈和水，方法快速高效，可实现白酒中9种酸类物质14 min以内的快速分离检测，且样品检测方法精密度试验基本符合要求，本方法的建立也可为其他酒类中酸类物质的检测提供一定的理论依据。
