血清微小RNA-21表达水平与肾癌患者术后复发率的关联性

王梓轩，宋东奎

(郑州大学第一附属医院 泌尿外科，河南 郑州 450052)

肾癌源于肾小管上皮细胞，约占全身恶性肿瘤的3%，占肾原发性恶性肿瘤的85%～90%，病死率高达40%[1]。目前治疗肾癌的主要方式为肿瘤切除术，可延长患者生存期，但复发率仍较高。肾癌患者术后复发与是否发生转移具有一定的联系，故需从分子水平了解肾癌，寻找有效的分子标志物，为评估或判断复发提供帮助[2]。微小核糖核酸(microRNA，miR)属于内源化保守非编码的单链小分子RNA，与肿瘤分期、转移以及预后等密切相关[3]。本研究探讨血清miR-21表达水平与肾癌术后复发的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2016年1月至2017年12月郑州大学第一附属医院收治的108例肾癌患者作为观察组，均接受肿瘤切除术治疗。另选同期100例健康体检者作为对照组。对照组：男46例，女54例；年龄35～70岁，平均(52.54±8.71)岁。观察组：男52例，女56例；年龄34～72岁，平均(53.03±9.46)岁；临床分期为Ⅰ期36例，Ⅱ期34例，Ⅲ期38例；肿瘤直径≤4 cm 50例，>4 cm 58例；血清miR-21表达水平为高表达52例，低表达56例。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。研究对象均签署知情同意书。本研究经医院医学伦理委员会审核通过。

1.2 纳入标准和排除标准(1)纳入标准：观察组患者经手术活检、病理检查等确诊为肾癌，符合手术指征且同意手术治疗。(2)排除标准：①合并全身感染性病变；②曾经接受过免疫治疗以及放化疗；③合并其他部位的恶性肿瘤。

1.3 miR-21检测方法采集受检者空腹肘静脉血4 mL，以3 000 r·min-1离心15 min，室温下放置约30 min，取上清液。采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)法检测血清miR-21的表达水平。使用由上海雨婷生物科技公司提供的RNA提取试剂盒提取总RNA，逆转为cRNA，再进行基因扩增，以GAPDH作为内参基因，利用Primer 5软件对内参基因以及目的基因的引物进行设计和合成。miR-21的上游引物为5’-TTTGGCTCTGACCATTCTGT-3’，下游引物为5’-GTCCTCACCTGAGGGACCC C-3’，40个循环，曲线溶解，将每个孔设置为3个复孔，选用Threshhold设置下Ct平均值，采用2-△△Ct法计算miR-21表达水平。

1.4 观察指标(1)比较对照组和观察组血清miR-21表达水平。(2)随访2 a，比较miR-21不同表达水平的肾癌术后复发率。根据血清miR-21的表达水平将患者分为高表达组和低表达组。复发标准为治疗后患者病情加重。(3)分析血清miR-21表达水平与术后复发率的关联性。

2 结果

2.1 血清miR-21表达水平观察组血清miR-21相对表达水平(8.43±3.39)较对照组(1.61±0.67)高(t=19.761，P<0.001)。

2.2 术后复发率随访2 a，因搬家、转院治疗等原因失访6例。患者血清miR-21低表达者52例，复发率为11.54%(6/52)；血清miR-21高表达者50例，复发率为52.00%(26/50)。高表达组术后复发率高于低表达组(χ2=19.383，P<0.001)。

2.3 患者血清miR-21表达水平与术后复发率的关系血清miR-21表达水平与术后复发率呈正相关(r=0.578，P=0.002)。

2.4 肾癌患者术后复发的影响因素不同性别、年龄、肿瘤直径的肾癌患者术后复发率比较，差异无统计学意义(P>0.05)；TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移以及血清miR-21高表达水平的肾癌患者的术后复发率较高(P<0.05)。见表1。

表1 肾癌患者术后复发的单因素分析[n(%)]

2.5 肾癌患者术后复发的多因素分析以术后复发率作为因变量(术后复发=1，无术后复发=0)，对单因素分析中有意义的自变量进行分析，并给予赋值，即TNM分期(Ⅰ期=1，Ⅱ期=2，Ⅲ期=3)、有淋巴结转移(有=1，无=0)以及血清miR-21表达水平(高表达=1，低表达=0)，TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移以及血清miR-21高表达水平均为肾癌患者术后复发的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 肾癌患者术后复发的多因素分析

3 讨论

肾癌属于泌尿系统常见肿瘤，早期无特异临床症状，缺少早期的诊断方式，且其进展的风险较高[4]。目前治疗肾癌的方式为手术治疗，但术后远期生存预后较差，术后复发率为20%～40%。因此，需寻找有效评估预后的血清生物标志物。

本研究前期依据生物信息学和相关研究进展进行大量筛选工作，发现在甲状腺癌、宫颈癌、大肠癌、胆管癌等多种肿瘤中miR-21的表达水平是上调最为频繁的miR之一。本研究结果显示，观察组血清miR-21表达水平高于对照组。随访2 a发现，血清miR-21高表达者术后复发率高于低表达者，说明miR-21高表达的肾癌患者术后复发率较高。此外，Pearson相关分析发现血清miR-21表达水平与术后复发率呈正相关，说明血清miR-21的表达水平越高，术后复发率越高，可为临床评估预后提供参考依据。miR属于众多小RNA中一员，其产生是一个较为复杂的过程，目前并未完全明确。随着研究逐渐深入，发现其参与和调节细胞周期的各个环节，在细胞的增殖、分化和凋亡等相关生物学过程中具有重要作用[5]。miR-21在翻译的过程中对p27产生抑制效果，而p27主要作用为控制细胞分裂G1期和S期之间的转化，从而促使细胞周期停滞在静止期，miR-21高表达可抑制p27的作用，继而促进细胞快速增殖[6]。在肿瘤形成期间，血管内皮生长因子发挥重要作用，可为肿瘤提供丰富血供，而miR-21可间接调控肾癌患者的VEGF基因表达，促进病情发展[7]。此外，miR-21还能对肿瘤细胞的变形和浸润能力产生影响，利于肿瘤细胞对基膜组织的突破，进而导致泌尿系统移行上皮细胞的破坏和损伤，从而促进肿瘤细胞的浸润[8]。为更好地预防肾癌患者术后复发率的升高，本研究进行危险因素分析，其结果显示，TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移以及血清miR-21高表达水平的肾癌患者的术后复发率较高，多因素logistic回归分析显示，TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移以及血清miR-21高表达水平均为肾癌患者术后复发的独立危险因素，说明肾癌患者伴有TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移以及血清miR-21高表达水平中任意一项，术后复发风险均可升高。因此，临床需针对性给予干预措施以降低术后复发风险。

综上所述，肾癌患者的血清miR-21表达水平较高，且其表达水平与术后复发率呈正相关，可为预后评估提供可靠的参考依据，并针对伴有TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移以及血清miR-21高表达水平的肾癌患者给予积极干预措施，以改善预后。