饲料蛋白水平对鲈鲤幼鱼生长性能及部分血液指标的影响

龙治海，李 华，段元亮，张 露，涂全宇，刘光迅

(四川省农业科学院水产研究所，成都 郫都 611731)

鲈鲤[PercoyprisPingi(Tchang)]俗称花鱼，隶属于鲤科(Cyprinidae)，鲃亚科(Barbinae)，鲈鲤属(Percoyprischu)。主要分布于长江上游岷江、青衣江、金沙江以及乌江、赤水河等流域[1-2]。其肌肉富含必需氨基酸和鲜味氨基酸，营养价值高于多数经济鱼类，是一种优质食用珍贵鱼类。由于过度捕捞，鲈鲤自然资源受到严重破坏，目前已列为四川省、重庆市的重点保护濒危鱼类之一。

饲料蛋白水平是决定鱼类生长和饲料成本的关键因素。饲料蛋白水平过低会限制鱼类生长,轻则生长缓慢，重则可能出现生长停滞、体重下降、抗病力减弱，无法保证养殖鱼类在一定的时间内达到上市规格, 降低水产养殖的经济效益。但过高并不能进一步提高鱼类的生长性能,反而会增加鱼体的氮代谢负荷，部分蛋白质可能会作为能源被消耗掉，作为能源消耗的蛋白质会导致水体中氨氮排放量增多而污染水质，而目前蛋白质原料价格居高不下，这就大大提高了饲料的成本。有关鱼类蛋白质需求相关研究资料显示，鱼用配合饲料的蛋白水平一般在25%～55%[3]，如罗非鱼幼鱼为28%～32%，岩原鲤幼鱼为38%～40%，鲤鱼幼鱼为43%～47%，草鱼泥鳅幼鱼为45.5%[4-7]。

目前，市场对鲈鲤需求居高不下，鲈鲤人工养殖逐步兴起，但尚未见鲈鲤营养需要的有关研究报道，仍缺乏鲈鲤养殖专用人工配合饲料。本试验以鲈鲤为研究对象，饲喂不同蛋白水平饲料，研究其对鲈鲤生长性能和血液指标的影响，以期为鲈鲤营养学研究积累基础资料，为开发鲈鲤人工配合饲料提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验饲料与试验设计

试验饲料以白鱼粉和豆粕为主要蛋白源, 鱼油和大豆油为主要脂肪源设5组不同蛋白水平的等脂等能实验饲料，以酪蛋白和明胶(4∶1)为蛋白质源配制蛋白质水平分别为17.9%、37．41%、40．10%、44．34%、49.20%的5种纯化试验饲料，原料由四川省农科院水产研究所提供。饲料蛋白质水平检测单位为国家粮食局成都粮油食品饲料质量监督检验测试中心。试验饲料组成及营养水平如表1。

1.2 试验鱼种及饲养管理

生长试验在四川省雅安市汉源湖养殖场进行。试验用鲈鲤幼鱼购自四川省雅安市芦山县某养殖场，选择600尾体质健康、平均体重(15.2±1.1)g的鲈鲤幼鱼，分为5组，每组3个重复，每个重复40尾，分别饲喂蛋白质水平为17.9%(Ⅰ组)、37．41%(Ⅱ组)、40．10%(Ⅲ组)、44．34%(Ⅳ组)、49.20%(Ⅴ组)的试验饲料，试验开始前将暂养鱼集中禁食24h。试验鱼采用网箱养殖，试验期间每天9:00和18:00分两时段投喂饲料,根据鱼的进食和生长情况，0～20d每天投食量为总体重的2%～5%；20～40d为4%～7%；40～60d为6%～9%；60～80d为6%～9%，采用循环投喂模式，每次投喂量以试验鱼30min内能吃完为宜。实验结束后,称一定量的饲料放入无鱼的实验缸中,10min后回收于70℃烘干后称重,计算饲料的溶失率以校正实际摄食量。实验期间水温变动范围是25～28℃,pH值为8.2～9.0,氨氮≤0.5mg/L,余氯≤0.05mg/L,光照周期为12L∶12D。试验期为80d。

表1 试验饲料组成及营养水平

1.3 指标测定

1.3.1 生长性能指标测定 在试验第1d、第20d、40d、60d和80d分别从各组中随机抽取6尾进行称重，用于计算以下相关指标测定。

特定生长率(SGR，%)=(lnWtd-lnW0)/t×100；

增重率(WGR，%)=(Wt-W0)/W0×100；

存活率(SR，%)=Nt/N0×100；

饲料系数(FCR，%)=Id/WWG×100；

蛋白质利用率(PER，%)=WWG/Ip×100；

W0为初始体重，Wtd为第t天的体重,t为饲养天数(d),Nt为第t天后各组鱼总数(尾),N0为初始各组鱼总数(尾)，WWG为湿重增加(wet weight gain)，Id和Ip分别为饲料和蛋白的摄入量(以干重计)。

1.3.2 鲈鲤血液生化指标的测定 试验期(80d)结束后，从各处理组中取6尾鱼(每个重复随机取2尾)，采用尾部静脉血管取血法取血。将所得样品分为2份，一份所得血样不加任何抗凝剂，在室温下倾斜30°让其自然凝固，再用高速冷冻离心机在4℃、4000r/min条件下离心10min，最后分离上清液(血清)装入洁净试管中，测定超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和血清总蛋白Pr含量，上述指标测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所,测定步骤严格按照试剂盒说明书进行。另一分血样添加抗凝剂EDTA，抗凝血样用CA620-VET1型全自动血细胞分析仪(MEDONIC，瑞典)进行红细胞数(RBC)、白细胞数(WBC)、血红蛋白数(HGB)测定。

1.4 数据统计与分析

试验数据采用平均值±标准误表示，采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05为差异显著。

2 结果

2.1 饲料蛋白水平对鲈鲤幼鱼生长性能的影响

饲料蛋白水平对鲈鲤幼鱼生长性能的影响见表2。表2显示：经过80d饲养后，Ⅲ组增重率(WGR)最大达164.9%，显著高于其余各组(P<0.05)，Ⅱ组和Ⅳ组明显高于Ⅴ组(P<0.05)，Ⅴ组明显高于I组(P<0.05)，I组最小，为106.2%，总的趋势有随着蛋白质水平增加先上升后下降的趋势；对比各组蛋白质利用率(PER)发现，各组PER表现出和WGR一样特点，Ⅲ组最高，I组最小，Ⅲ组>Ⅱ和Ⅳ组>Ⅴ组>I组，差异显著(P<0.05)；而日粮系数(FCR)，Ⅲ组<Ⅳ组<Ⅱ组<Ⅴ组

2.2 饲料蛋白质水平对鲈鲤部分血液指标的影响

饲料蛋白质水平对鲈鲤幼鱼血液指标影响见表3。表3显示：经过80d饲养过后，血液WBC、HGB、RBC均以Ⅲ组最高，显著高于其余各组(P< 0.05)；而以Ⅰ组最低，显著低于其余各组(P< 0.05)；3个指标变化均有随着蛋白质水平增加先上升后下降趋势；RBC数变化为，Ⅲ组>Ⅱ和Ⅳ组>Ⅴ组>I组；WBC数变化为Ⅲ组>Ⅳ组>Ⅱ和Ⅴ组>I组；HGB含量变化为，Ⅲ组>Ⅳ和Ⅴ组>Ⅱ组>I组。对比各组血清中酶活性可以发现，SOD、CAT、GSH-P x、AKP、ACP的活力表现出大致相同的变化趋势，即随饲料蛋白水平的提高先上升后下降，5种酶均以Ⅲ组的酶活力最高，显著高于其余各组(P< 0.05)，而MDA含量则表现出先下降后上升的相反趋势，Ⅲ组MDA含量最低，Ⅰ组>Ⅱ组和Ⅴ组>Ⅳ和Ⅲ组。

表2 不同蛋白质水平饲料对鲈鲤生长性能的影响

表3 不同蛋白质水平饲料对鲈鲤部分血液指标的影响

3 讨论

饲料中适宜的蛋白质水平可以促进鱼类生长和提高饲料利用率。相关研究表明，饲料中适宜的蛋白质水平能够促进生长和饲料利用，缺乏和过量均不利于生长。这是因为，饲料中蛋白质供给不足时，饲料蛋白质中用以满足机体组织基础代谢的比例增大，而用于生长的比例相对减少，鱼体增重较慢，甚至会导致体重负增长[7]。而饲料中蛋白质过量时，过多的氨基酸则会加重肝功能负担，加大机体的氮代谢负荷，机体摄取多于的氨基酸用于产热和其它功能，而不是蛋白质沉积，造成了大量氨基酸的浪费，增加饲料成本，且不利于鱼类增重增产。本试验设计的5个饲料蛋白质水平中，40．10%组鲈鲤幼鱼的生长性能指标(WGR、PER、FCR)均达到最佳。已有鱼类的蛋白质需求研究结果，罗非鱼幼鱼为28%～32%，黄颡鱼幼鱼(10g)约为44%～45%[8]，美洲鳗鲡幼鱼(8g)为47%[9], 长吻鱼种(12g)为46.9%～49.5%[10], 乌鳢幼鱼(0.5g)为55%[11]，岩原鲤幼鱼为40%，鲤鱼幼鱼为43%～47%，草鱼幼鱼41%～43%，青鱼幼鱼41%，黄颡鱼幼鱼为44%～45%，泥鳅幼鱼为45.5%[4-7]，各鱼类对蛋白质需求大小有所差异，这可能与鱼类品种、规格、养殖环境(水温、pH、溶氧)、饲料营养来源和投喂水平等有关。本试验表明鲈鲤幼鱼对蛋白质需求量与岩原鲤幼鱼接近，可能因为两种鱼类物种亲缘性较近，生活环境类似。

体内清除自由基的酶系统主要由SOD、GSH-Px和CAT3种酶组成，这几种酶可以单独作用，也可以起到协同增效的作用，对抗机体有氧代谢产生的活性氧引起的氧化应激(oxygenstress)。MDA是脂质过氧化物水解产物，其含量反映机体中过氧化自由基的存在及其反应程度。AKP主要存在于骨，肝脏和肠道等许多组织中，当骨细胞代谢活跃时可见血清碱性磷酸酶活性升高，故AKP传统的被用作骨更新指标[13]。ACP被认为是高等动物体内巨噬细胞溶酶体的标志酶[14-15]，在鱼类等低等脊椎动物中也起着防御和消化的双重功能，ACP广泛分布于动物组织溶酶体中，机体ACP活性可以作为体液免疫指标来间接反映机体免疫系统中吞噬细胞清除异物的能力。对比各种血液生化指标，可以看出蛋白质水平为40.10%时，鲈鲤幼鱼血液RBC、WBC和HGB为5组中最高，反映此组鱼苗处于较好的营养水平和健康状况；SOD、CAT、GSH-Px、AKP、ACP、等酶活力也是最高，同时反映此组鲈鲤幼鱼具有较好的抗氧化能力和较强的非特异性免疫功能。通过本试验结果和上述分析，饲料蛋白质水平为40.10%，可明显改善鲈鲤鱼苗生长性能和非特异性免疫功能。