中药育发洗剂对C57BL/6小鼠毛发生长影响的实验研究

王爱娟 胡慧 冯放 罗莎 曲保全 吴瑞英 杨顶权

[摘要]目的：研究中藥育发洗剂对C57BL/6小鼠毛发、毛囊生长周期的影响。方法：40只C57BL/6小鼠以脱毛膏脱毛2cm×4cm面积大小造模，造模成功后次日分5组（n=8）：模型组、生理盐水组、空白洗剂组、米诺地尔组、中药育发洗剂组，每日涂抹给药1次，持续18d。每日同一光源下拍照1次，观察目标区小鼠皮肤颜色变化、毛发生长情况;每日固定时间毛发镜检测4次，记录毛发镜下皮肤颜色变化直至小鼠毛发长度影响检测效果;第18天取小鼠背部毛发测量毛长，取背部组织HE染色观察毛囊数量、毛囊形态、皮肤真皮层厚度。结果：中药育发洗剂组可减少小鼠皮肤由粉色到黑色的变化时间，差异有统计学意义（P<0.05）。第18天毛发长度，中药育发洗剂组与米诺地尔组相当（P>0.05），且较其他各组长，差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组、生理盐水组、空白洗剂组相比较，中药育发洗剂组皮肤真皮层厚度明显增加，毛囊数目增多，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：中药育发洗剂可加快小鼠毛发生长、促进小鼠毛囊生长期转化进程，且其疗效与米诺地尔相当。

[关键词]中医药;洗剂;米诺地尔;C57BL/6小鼠;毛发;毛囊;脱发

[中图分类号]R285.5    [文献标志码]A    [文章编号]1008-6455（2021）07-0089-05

Effects of Traditional Chinese Medicine Yufa Lotion on Hair Growth of C57BL/6 Mice

WANG Ai-juan1，HU Hui2，FENG Fang1，LUO Sha1，QU Bao-quan1，WU Rui-ying1，YANG Ding-quan3

（1.Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China;2.Department of Acupuncture， Dongfang Hospital Affiliated to Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100078，China;3.Department of Dermatology and Venereology， China-Japan Friendship Hospital，Beijing 100029，China）

Abstract： Objective  To observe the effect of traditional Chinese medicine Yufa lotion on hair growth of C57BL/6 mice. Methods  40 C57BL/6 mice were depilated with an area of 2cm×4cm to induce the mouse hair follicles to enter the growth phase from the resting phase. The next day was divided into 5 groups （n=8）： the model group， the normal saline group， the blank lotion group， the minoxidil group， and the traditional Chinese medicine Yufa lotion group. They were applied once a day for 18 days. Taked pictures each day to observe the skin color changes and hair growth of the mice. On the 18th day， the back hair of the mice was taken to measure the hair length， and the back tissue was taken for HE staining to observe the number of hair follicles， the shape of hair follicles， and the thickness of the skin dermis. Results  The traditional Chinese medicine Yufa lotion group can shorten the change time of mouse skin from pink to black， and the differences were statistically significant （P<0.05）. After compared the hair length on the 18th day， the traditional Chinese medicine Yufa lotion group and the minoxidil group was equivalent （P>0.05）. And longer than the other groups （P<0.05）. Compared with the model group， the normal saline group， and the blank lotion group， the thickness of the skin dermis and the number of hair follicles in the traditional Chinese medicine Yufa lotion group were significantly increased （P<0.05）. Conclusion  Traditional Chinese medicine Yufa lotion can promote mouse hair follicles to enter the growth phase earlier， and its curative effect is equivalent to minoxidil.

Key words： traditional Chinese medicine; lotion; minoxidil; C57BL/6 mice; hair; hair follicle; alopecia

中药育发洗剂是以中日友好医院科内经验组方为核心药物制作的外用洗剂，具有活血化瘀、除湿杀虫、生发乌发之效，用于各种脱发性疾病的局部治疗，其药物组成为丹参、苦参、川芎、白鲜皮、补骨脂、制首乌、薄荷、甘草。目前脱发性疾病的外用治疗药物只有米诺地尔被广泛使用[1]，但是单一的局部用药远不能满足临床需求，寻求更加积极的外用药以扩充临床治疗手段是非常具有现实意义的。中药育发洗剂经前期临床验证治疗脱发性疾病安全有效，本研究主要从小鼠皮肤颜色变化、毛发生长速度、毛囊形态、真皮层厚度以及毛囊数量几个方面观察中药育发洗剂对毛发生长的作用从而为临床治疗提供一些思路。

1  材料和方法

1.1 实验动物：40只雌性C57BL/6小鼠，体质量（20±2）g，6～8周龄，购于北京维通利华实验动物技术有限公司[编号：SCXK（京）2012-0001]。饲养于中日友好医院临床研究所动物饲养室（SPF级），温度（22±1）℃，湿度（50土5）%，每日通风1～2次，每次持续1h左右，小鼠有足够的活动空间、正常饮水及进食，适应性饲养1周后实验。

1.2 药品及试剂：中药育发洗剂，200克/瓶，洗剂药物组成：丹参3份、苦參3份、川芎2份、白鲜皮2份、补骨脂2份、制首乌2份、薄荷1份、甘草1份。药物加工委托中日友好医院制剂中心，剂型委托北京丽倍生科技有限责任公司制作;空白洗剂，200克/瓶，无中药成分，与中药育发洗剂同批次同生产方制作;米诺地尔酊5%（90ml：4.5g），浙江万晟药业有限公司（生产批号：国药准字H20010714）;组织固定液，湖北泰康医疗设备有限公司（生产批号：20150039）;Veet脱毛膏，100克/瓶，利洁时（法国）有限公司（生产批号：2013-12-04 173）。

1.3 主要仪器：正置荧光显微镜（广东艾斯拓鼎，型号：ASTD）;电子数显游标卡尺（桂林广陆，型号：211-102F）;皮肤毛发观察仪（南京倍宁，型号：BN-PFMF-8001）。

1.4 实验方法

1.4.1 分组：将小鼠随机分为5组，每组8只。分别为①模型组;②生理盐水组（阴性对照组）;③空白洗剂组（剂型对照组）;④中药育发洗剂组（实验组）;⑤米诺地尔组（阳性对照组）。

1.4.2 动物模型的建立及干预方案：以平行脊椎为长轴方向，将小鼠背部毛发先剪短，再涂抹脱毛剂，然后擦掉脱毛剂以及脱落的毛发制作2cm×4cm的脱毛区进行造模，造模成功的小鼠皮肤颜色粉红，表面光滑，无破溃、黑色素沉着等现象。造模次日进行干预，模型组不予处理，其他各组局部皮肤直接用棉签涂抹给药，涂擦5min后生理盐水清洗干净。药物用量遵循实验动物与人体间的等效剂量换算标准，约0.4毫升/只，每日定时给药1次，连续给药18d。

1.5 指标检测

1.5.1 观察结果：每日观察并记录小鼠皮肤颜色变化，并于同一光源下进行拍照，记录各组小鼠背部观察区皮肤状况，包括皮肤基本生理特征以及颜色变化;每日固定时间毛发镜检测4次，记录毛发镜下皮肤颜色变化直至小鼠毛发长度影响检测效果;第18天随机取10处新生毛发，使用百分电子数显游标卡尺进行测量并记录。

1.5.2 HE染色：在涂药第18天，取小鼠观察区皮肤约2cm×2cm面积大小，进行常规组织脱水、石蜡包埋、切片、HE染色（苏木精-伊红染色），通过电子显微镜与NIS-Elements BR软件联用，在显微镜下观察小鼠真皮层厚度、毛囊个数以及形态学变化。观察毛囊横断面和纵切面，制片时取同一水平面的皮肤横断面统计毛囊总数，每张切片取3个视野。

1.6 统计学分析：采用SPSS 25.0软件进行统计分析。计量资料以均值±标准差（x?±s）表示，采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1 五组小鼠皮肤颜色变化：给药后经照片与毛发镜双重检测，各组小鼠皮肤颜色均由粉色转为灰色再到黑色，除模型组外其余各组皮肤颜色变化均有不同程度的加快。经比较各组皮肤颜色由粉色到黑色的时间，中药育发洗剂与米诺地尔变色时间相当（P>0.05），这两组较其他三组变色时间短，差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.2 五组小鼠第18天毛发长度：第18天各组随机收集观察区10处毛发，除模型组外其余4组毛发长度均显著增长（P<0.05）;中药育发洗剂与米诺地尔这两组明显长于其他三组，差异具有统计学意义（P<0.05）。

2.3 五组小鼠真皮厚度、毛囊数量：HE染色后，于显微镜下观察毛囊纵切面及同一水平横断面。观察纵切面模型组毛囊稀疏，位于表皮和真皮交界处，黑色素稀疏;而中药育发洗剂组真皮变厚，毛囊根部向下长至真皮层深处。同一水平横断面比较各组毛囊数量，中药育发洗剂与米诺地尔两组明显增多，差异具有统计学意义（P<0.05）。

3  讨论

脱发为皮肤科常见病，其临床现状整体呈高发病率低有效率、治疗疗程长药物种类单一、投入远大于获益等特点。由于口服药品种的单一性和各种副作用的局限性[2-3]，目前脱发性疾病的研究热点趋向外治法。本研究所用中药育发洗剂药物组成为丹参、苦参、川芎、白鲜皮、补骨脂、制首乌、薄荷、甘草，全方共奏活血化瘀、除湿杀虫、生发乌发之效。现代药理学研究表明，丹参有明显降低血液粘稠度的作用，可加快局部代谢扩张微血管促进细胞氧和能力[4]，能有效为毛囊提供营养成分。丹参甲醇水提物丹参酮有类雌激素样作用可抗雄激素[5]，同时经研究发现丹参酮对免疫功能亦具有一定的调控作用[6]。苦参干燥根的乙醇水提物可通过诱导小鼠真皮乳头中的生长因子来促进毛囊向生长期转换，从而促进毛发生长，另外，苦参提取物还有抑制Ⅱ型5α-还原酶活性的作用[7]。川芎乙醇提取物具有调节血小板聚集速率的作用，如果用于局部治疗，可改善局部血液循环起到活血祛瘀促进毛发生长的作用[8]。有研究发现首乌水提物作用于小鼠，可以改变毛发生长过程中的成纤维生长因子、β-连环蛋白等相关因子含量来阻止毛囊进入休止期从而促进小鼠背部毛发生长[9]，补骨脂能增加血液中雌二醇以及卵泡生成素达到抗雄作用[10]。薄荷具有抗炎镇痛、抗真菌、抗病毒等作用[11]，且其有效成分薄荷醇和薄荷脑可通过改变皮肤角质层的结构来促进药物吸收，常常作为外用药物的渗透剂使用[12]。

此次试验选用的实验动物为C57BL/6小鼠，小鼠表皮颜色呈现“黑色皮肤”、“灰色皮肤”、“粉红色皮肤”可对应其毛囊的生长期、退行期、休止期，是观察毛发生长、毛囊生长周期的天然模型之一。一般生长期是小鼠毛囊活动旺盛时期，代谢活跃，露出表皮的毛干饱含黑色素，休止期则代谢停止直至毛发自然脱落，这与人类的毛发生长规律相一致[13]。在C57BL/6小鼠表皮细胞中，所有黑色素只储存于毛囊中，源自神经嵴的黑素干细胞在生长发育过成中经由真皮层转移到表皮层再随着退行期黑素细胞的凋亡而重新迁移到毛囊的次生区域[14]，这一系列反应可较直观的经由小鼠皮肤颜色变化进行观察。

本实验通过设立不同的组别观察对比中药育发洗剂对小鼠毛发生长的影响，以小鼠皮肤粉色转为黑色的时间、第18天毛发生长的长度、HE染色后真皮厚度以及毛囊个数为主要指标，比较分析后发现中药育发洗剂可以减少小鼠皮肤颜色变化的时间，能促进毛发生长速度（P<0.05），HE染色后实验各组的毛囊根部深入真皮层，而模型组的毛囊在真皮与表皮的交界处也与小鼠皮肤颜色变化、毛发长度表现一致，实验组与模型组差异明显（P<0.05），经小鼠拍摄照片、毛发镜检测与病理组织涂片相互验证，说明中药育发洗剂可以加快小鼠毛囊由休止期向生长期的转化进程，促进小鼠毛发生长，且其疗效与米诺地尔相当。

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[收稿日期]2020-09-24

本文引用格式：王愛娟，胡慧，冯放，等.中药育发洗剂对C57BL/6小鼠毛发生长影响的实验研究[J].中国美容医学，2021，30（7）：89-93.