B77 同源体6 在乳腺癌中的表达及对患者免疫治疗疗效和预后的评估价值

2021-08-19卜亚军马思芬罗桃艳

癌症进展 2021年11期

卜亚军，马思芬，罗桃艳

开远市人民医院肿瘤血液科，云南开远 661600

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，发病率呈逐年上升的趋势，且有年轻化的倾向。目前，临床主要采用手术、放疗、化疗、内分泌药物治疗、靶向药物等治疗乳腺癌，随着诊疗技术的提高，程序性死亡受体1（programmed cell death 1，PDCD1，也称PD-1）/程序性死亡受体配体1（programmed cell death 1 ligand 1，PDCD1LG1，也称PD-L1）等免疫药物开始逐渐应用于乳腺癌免疫治疗并可明显改善患者的生活质量，延长生存期，但其相关作用机制、远期疗效及对患者免疫功能的影响尚有待进一步明确。

肿瘤免疫逃逸是引起肿瘤细胞侵袭、转移的重要机制之一，其中T 淋巴细胞介导的免疫应答是重要环节，T淋巴细胞活化不仅需要抗原肽复合物提供刺激信号，还需要协同刺激分子提供辅助信号。B7是重要的协同刺激分子家族成员，可结合抗原提呈细胞配体和T 细胞受体，诱导T 细胞活化。B7同源体6（B7 homolog 6，B7-H6）是重要的B7 家族成员，相关研究提示，B7-H6 在卵巢癌患者中异常高表达，但目前关于B7-H6 在乳腺癌中的研究不多，因此，本研究探讨B7-H6 在乳腺癌患者免疫治疗及预后评估中的意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年10 月至2019 年10 月开远市人民医院收治的三阴性乳腺癌患者。纳入标准：①均经病理学检查确诊为乳腺癌，均为女性；②雌激素受体（estrogen receptor，ER）、孕激素受体（progesterone receptor，PR）、人表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）均表达阴性；③均为复发或转移乳腺癌；④具有可测量的病灶；⑤临床、随访资料完整。排除标准：①距上次治疗时间﹤3 个月；②合并其他系统恶性肿瘤。依据纳入和排除标准，本研究共纳入84 例三阴性乳腺癌患者，年龄41～72 岁，平均年龄（57.87±10.41）岁；美国癌症联合委员会（American Joint Committee on Cancer，AJCC）分期：Ⅲ期（TNM、TNM、TNM，TNM）60 例，Ⅳ期（TNM）24 例。同期选取50 例乳腺良性病变患者作为对照组，年龄38～70 岁，平均（56.68±9.54）岁；病理类型：乳腺脂肪瘤19 例，乳腺结节21 例，乳腺纤维瘤10 例。取84 例三阴性乳腺癌患者的乳腺癌组织和50 例乳腺良性病变患者的正常乳腺组织。

1.2 疗效评价标准

PD-1 免疫治疗3 个月后，参照实体瘤疗效评价标准1.1 版（response evaluation criteria in solid tumor 1.1，RECΙST1.1）评价80 例乳腺癌患者的临床疗效：完全缓解（complete response，CR），肿瘤病灶完全消失，且至少维持4 周；部分缓解（partial response，PR），肿瘤病灶最大径之和减少≥30%，且至少维持4 周；疾病稳定（stable disease，SD），肿瘤病灶最大径之和减少﹤30%或增加﹤20%，且至少维持4 周；疾病进展（progressive disease，PD），肿瘤病灶最大径之和增加≥20%或出现新病灶。

1.3 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-polymerase chain reac--tion，qRT-PCR）检测B77-H6 mRNA的相对表达量

取乳腺癌组织和正常乳腺组织石蜡包埋，4 μm 厚度连续切片，置于洁净离心管内，提取DNA，采用紫外分光光度仪测定样本浓度和纯度，进行质控。采用基因检测试剂盒加样上机进行PCR反应，待PCR完成后，按照试剂盒结果判读标准记录结果。PCR 反应过程：95 ℃变性5 min，1 个循环；95 ℃变性25 s，64 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，15个循环；93 ℃变性25 s，60 ℃退火35 s，72 ℃延伸20 s，31 个循环。

1.4 随访方法

采用来院进行影像学评估的方式进行随访，每3 个月1 次，随访截止时间为2021 年1 月，记录无进展生存期（progression-free survival，PFS）。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 B77-H6 相对表达量的比较

乳腺癌组织中

mRNA 相对表达量为（5.41±1.24），明显高于正常乳腺组织的（1.35±0.38），差异有统计学意义（

=28.691，

=0.000）。依据RECΙST1.1，84 例三阴性乳腺癌患者中CR+PR共8 例，SD+PD 共76 例，CR+PR 患者

mRNA的相对表达量为（5.01±0.62），明显低于SD+PD 患者的（5.52±0.50），差异有统计学意义（

=2.683，

=0.009）。

2.2 B7-H6 mRNA 相对表达量对三阴性乳腺癌患者近期疗效的预测价值

mRNA 相对表达量预测三阴性乳腺癌患者近期疗效的AUC 为0.844（95%CΙ：0.782～0.901，

﹤0.05），最佳截断值为5.30 时，灵敏度和特异度分别为86.00%和87.00%。（图1）

图1 B7-H66 mRNA相对表达量预测三阴性乳腺癌患者近期疗效的ROC曲线

2.3 不同临床特征三阴性乳腺癌患者乳腺癌组织中B7-H6 mRNA 相对表达量的比较

不同年龄、肿瘤直径、分化程度、病理类型、Ki-67表达情况、

P53

突变情况及手术情况三阴性乳癌腺癌患者乳腺癌组织中

mRNA 相对表达量比较，差异均无统计学意义（

﹥0.05）。AJCC 分期为Ⅳ期的三阴性乳癌腺癌患者乳腺癌组织中

mRNA 的相对表达量明显高于AJCC 分期为Ⅲ期的患者，差异有统计学意义（

﹤0.01）。（表1）

表1 不同临床特征三阴性乳腺癌患者乳腺癌组织中B7-H6 mRNA 相对表达量的比较（n=84）

2.4 不同B7-H6 mRNA 相对表达量三阴性乳腺癌患者预后情况的比较

以

mRNA 相对表达量5.30 为临界值，将84 例三阴性乳腺癌患者分为高表达组（

=51，

mRNA 相对表达量≥5.30）和低表达组（

=33，

mRNA 相对表达量﹤5.30），高表达组患者的中位PFS 为11 个月（95%CΙ：10.19～11.81），明显短于低表达组患者的18 个月（95%CΙ：14.54～21.46），差异有统计学意义（

=6.887，

=0.009）。（图2）

图2 B7-H6 mRNA高表达组（n=51）和低表达组（n=33）三阴性乳腺癌患者的PFS曲线

3 讨论

相关数据显示，三阴性乳腺癌约占所有乳腺癌类型的15%，与其他类型的乳腺癌相比极具侵袭性，三阴性乳腺癌对常见的内分泌疗法或HER2 靶向疗法均不敏感。研究显示，三阴性乳腺癌患者肿瘤突变负荷大、PD-L1 阳性比例高、肿瘤浸润性淋巴细胞比例高，因此，免疫治疗可能对其有效，但远期预后评估还有待进一步明确。

B7-H6 是自然杀伤（natural killer，NK）细胞和T 淋巴细胞活化的重要配体，能够通过分泌细胞因子产生抗肿瘤免疫作用。研究发现，B7-H6 在白血病、淋巴瘤、黑色素瘤及其他原发肿瘤细胞中均高表达，而在正常细胞中几乎不表达。本研究通过实时荧光qRT-PCR 法检测三阴性乳腺癌组织及正常乳腺组织中

mRNA 的相对表达量，并分析其对PD-1 免疫治疗的预测价值及对患者预后的影响，旨在为临床乳腺癌的免疫治疗提供参考。本研究结果显示，乳腺癌组织中

mRNA的相对表达量明显高于正常乳腺组织。NK 细胞可广泛参与炎性反应与适应性免疫应答反应，通过释放趋化因子和细胞因子在抗肿瘤、抗病毒感染及干细胞移植等方面发挥重要作用，是固有免疫系统的重要组成部分，而NK 细胞的活化受其细胞表面抑制信号及活化信号的共同调控。相关研究提示，B7-H6 在细胞从良性逐渐向恶性转化时表达上调，与NKp30 受体结合并激活NK 细胞，进而介导机体固有免疫反应机制。B7-H6 表达与乳腺癌临床病理研究结果显示，国际妇产科联盟（Ιnternational Federation of Gynecology and Obstetrics，FΙGO）分期为Ⅳ期的乳腺癌患者乳腺癌组织中

mRNA 的相对表达量明显高于Ⅲ期患者。上述结果表明，随着乳腺癌的进展，B7-H6 的表达逐渐升高。B7-H6/NKp30 途径主要通过促进其分泌ΙL-2 和ΙFN-γ等细胞因子分泌和诱导NK 细胞活化，进而提升NK 细胞杀伤能力，发挥抗肿瘤免疫作用。国外研究发现，整合素金属蛋白酶10（a disintegrin and metalloprotease 10，ADAM10）可以抑制NK 细胞通过NKp30 受体途径识别肿瘤细胞，介导肿瘤细胞外B7-H6分子的脱落，因此，通过抑制ADAM10活性，可上调肿瘤细胞B7-H6的表达，进而提高NKp30介导的NK细胞活化能力，这也为B7-H6 的机制研究提供了基础。因此，B7-H6/NKp30 途径具有抑制肿瘤细胞逃避免疫监视的作用，这也可能是B7-H6 介导乳腺癌进展的重要基础。B7-H6 主要表达于肿瘤细胞表面，免疫组化法可在胃癌及非小细胞肺癌等肿瘤组织中检测到B7-H6 蛋白的表达，但关于其表达情况与治疗预后的研究还不够深入。本研究以

mRNA 相对表达量5.30 最佳截断值，将84 例三阴性乳腺癌患者分为高表达组和低表达组，结果显示，高表达组患者的中位PFS为11个月，明显短于低表达组患者的18 个月。表明通过分析三阴乳腺癌患者B7-H6的表达情况，可有效评估对免疫治疗疗效及患者的预后。B7-H6 不仅能够在NK 细胞的生物学功能及活化进程发挥重要作用，亦可通过基因修饰途径参与T 淋巴细胞介导的抗肿瘤免疫应答。相关动物实验发现，通过特异性地识别表达B7-H6 的肿瘤细胞而促进淋巴瘤小鼠模型

基因的表达，分泌γ干扰素（interferon-γ，ΙFN-γ）并杀伤肿瘤细胞，进而抑制小鼠肿瘤细胞的生长，进而为乳腺癌的免疫治疗提供新思路。

既往关于B7-H6 与乳腺癌的治疗研究较少，本研究针对性地对乳腺癌免疫治疗的靶向因子进行了相关机制分析，为临床乳腺癌的治疗提供参考，亦可为临床药物的进一步研究提供新的思路，具有一定的临床价值和创新性。

综上所述，B7-H6 在三阴乳腺癌中表达上调，AJCC 分期越高，B7-H6 表达越高，可有效预测免疫治疗疗效及患者的预后。