替比夫定在小鼠自身免疫性肝炎中对血清IL-17的影响

张笛，李贞茂

（四川省医学科学院/四川省人民医院 消化内科，四川 成都 610072）

0 引言

IL-17是辅助性T淋巴细胞17（Th17）分泌的一种重要的促炎因子。IL-17可诱导多种趋化因子积极参与机体的免疫调节和炎症反应。IL-17可促进Th17活化，通过激活肝脏内细胞产生炎性介质，分泌多种促炎因子影响肝脏的炎症[1]。IL-17在自身免疫性肝炎（AIH）中表达明显升高，在AIH发病过程中，IL-17可能介导了肝脏炎症及纤维化[2]。替比夫定（Telbivudi-ne，LdT）是目前很多乙肝患者使用的抗病毒的药物，它单独使用及联合阿德福韦酯的治疗对乙肝抗病毒有较好作用[3]，特别是它的免疫调节作用如对IL-17的调节作用得到一些研究证实[4-5]。本次研究把重点放在了替比夫定对小鼠自身免疫性肝炎中血清IL-17水平的影响，希望为自身免疫性肝炎患者如果合并慢性乙型活动性肝炎的选药提供更好地选择依据。

1 资料与方法

1.1 资料及动物造模。购买6～8周C57BL/6雄性小鼠（体重在20 g左右）20只，取10只小鼠的肝脏经过超声破碎超速离心后，取其上清液含肝抗原S-100。0.5 mL新鲜S-100肝抗原与等体积的弗氏完全佐剂（CFA）充分乳化后，分别在第1 d和第7 d经腹腔注射入10只小鼠体内造模，继续饲养小鼠到21 d。

1.2 方法。造模结束后，在治疗给药前，从小鼠眼底静脉丛取血，测IL-17的值（ELISA法）和肝功（ALT、AST、ALP、GGT）。后使用灌胃给药，每天一次，剂量通过小鼠与人体表面积折算的等效剂量比值表进行计算后给予替比夫定（素比伏，诺华公司）86.5 mg/kg，每日一次，持续30天后再次从小鼠眼底静脉丛取血测IL-17的值（ELISA法）和肝功（ALT、AST、ALP、GGT）。

1.3 检测方法。血清IL-17使用ELISA方法进行检测（美国R&D公司试剂）；使用雅培 C-16000 全自动生化分析仪检测肝功能等生化指标（北京中生北控生物科技股份公司）。

1.4 统计学分析。应用SPSS 19.0统计学软件进行统计分析，组间率的比较采用χ2检验，计量资料以（）表示，采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 给予替比夫定治疗前，10只小鼠IL-17、ALT（丙氨酸氨基转移酶）、AST（天冬氨酸氨基转移酶）均较正常值明显升高，ALP（碱性磷酸酶）、GGT（谷氨酰转肽酶）较正常值轻微升高。

2.2 IL-17等在替比夫定治疗前后情况比较。从表1可以看出，IL-17、ALT治疗前后差异有统计学意义（P＜0.05），AST、GGT和ALP治疗前后差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 IL-17等在替比夫定治疗前后情况比较（）

表1 IL-17等在替比夫定治疗前后情况比较（）

项目 组别 n 治疗前后值 F P IL17 治疗前 10 819.20±12.639（pg/mL） 2.165 0.001治疗后 10 501.70±23.571（pg/mL）ALT 治疗前 10 266.00±26.774（U/L） 2.092 0.001治疗后 10 110.30±14.376（U/L）AST 治疗前 10 176.00±15.470（U/L） 3.340 0.093治疗后 10 167.20±8.618（U/L）GGT 治疗前 10 76.40±7.120（U/L） 2.179 0.086治疗后 10 61.50±4.080（U/L）ALP 治疗前 10 128.50±10.550（U/L） 0.313 0.203治疗后 10 107.00±12.367（U/L）

3 讨论

自身免疫性肝炎（AIH）是一种与免疫相关的慢性炎症性肝脏疾病，AIH主要表现为肝功能异常、转氨酶升高（主要表现为ALT、AST明显升高，GGT、ALP轻度升高或正常）、自身抗体阳性及高免疫球蛋白血症（以IgG升高为主）等的自身免疫性疾病。目前AIH的发病机制至今尚未阐明，目前认为针对宿主肝抗原的免疫反应是AIH肝脏损伤的主要机制[6]，研究已表明，T淋巴细胞在AIH免疫调解机制中发挥重要作用[7]。IL-17是Th17细胞分泌并参与生物功能的主要细胞因子，Th17细胞作为一种新型的辅助T细胞亚型正是主要通过分泌IL-17和IL-22等细胞因子，从而参与机体的免疫作用，在介导自身免疫性疾病、炎症反应等过程中发挥重要作用[8]。目前研究表明发现IL-17广泛表达于AIH、PBC以及重叠综合征患者肝组织中炎细胞浸润明显的汇管区，主要在单核细胞和淋巴细胞的胞浆中有IL-17的大量表达。造模小鼠IL-17及肝脏功能出现异常，在造模后第7 d开始增加，并在第21 d达到高峰。有研究表明IL-17可以促进组织局部中性粒细胞的浸润，在自身免疫性肝炎中IL-17可以促进中性粒细胞局部的趋化，IL-17可以促进自身免疫性肝炎肝脏局部炎症的进展，控制IL-17可以改善AIH患者的肝脏炎症[9]。

替比夫定（LdT）是胸腺嘧啶脱氧核苷类抗病毒药物，目前很多研究表明，其具有抑制病毒之外的免疫调节作用，LdT对免疫主体包括适应性免疫（CD4+/CD8+T cells，Th1/Th2，Treg，Th17，IL-21等）和固有免疫（NK，NKT和巨噬细胞等）等均有调节作用，对IL-17有明显的调节作用。

本次研究最开始的想法是，既然LdT对IL-17有调节作用，IL-17 在AIH免疫调解机制中起着重要作用，那对于AIH患者如果合并慢性乙型病毒性活动性肝炎时，在抗病毒药物选择中使用LdT可能同时更有利于两种慢性肝脏疾病的恢复。从本次研究中发现，LdT的免疫调节作用对AIH小鼠的血清IL-17及部分肝脏功能改善有明显的作用，因而从一方面表明AIH患者如果合并慢性乙型病毒性活动性肝炎时，在抗病毒药物选择中使用LdT可能更加合适。

本次研究的小鼠例数较少，且在造模过程中，一直无法很好完成同时合并AIH和慢性乙型病毒性活动性肝炎的小鼠模型。如果AIH和慢性乙型病毒性活动性肝炎同时合并的情况下，肝脏损害情况更加复杂，LdT是否同样能明显改善肝脏情况，特别是运用到患者身上的情况需进一步观察研究，与其他抗病毒药物的比较仍需进一步研究。