双环磺草酮水解产物的反相液相色谱分析方法

饶镭，罗娟，李保同

(江西农业大学 农学院，江西 南昌 330045)

双环磺草酮(BZB)属三酮类除草剂[1]，已于2018年在中国正式登记[2]，被广泛用于控制一年生杂草、莎草、禾本科杂草和阔叶杂草[3-8]，需在淹水的稻田中施用，并迅速水解形成具有除草活性的双环磺草酮水解产物(BH)[9]。BH具有较高的水解稳定性，且在水中的溶解度随pH的升高而增大[9-10]。目前有关BZB原药和制剂的分析方法已有研究报道[11-12]，而有关其水解产物的常量分析方法还未见报道。本文建立了一种测定BH中有效成分含量的分析方法，使用便捷，检测效果好，可用于BH的定量分析。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

BH标准品(≥98%)、BH原药(80.2%)均由江西农业大学理学院提供；甲醇、磷酸均为色谱纯；超纯水。

Agilent 1260高效液相色谱仪；InfinityLab Poroshell 120 EC-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，4 μm)；Eppendorf紫外分光光度计；ATX224万分之一天平；FST-JY超纯水机；KQ2200E超声波清洗器；0.22 μm 有机滤膜。

1.2 溶液配制

1.2.1 BH标准溶液的配制 用天平准确称取BH 0.050 0 g(精确至0.000 1 g)标准品，加入 50 mL 的容量瓶中，用甲醇溶解，超声水浴助溶，至BH完全溶解，在室温下冷却，用甲醇定容后摇匀，得到BH(1 000 mg/L)标准母液，冰箱冷藏备用。色谱测定前将BH母液稀释成50 mg/L的标准品溶液。

1.2.2 BH试样溶液的配制 准确称取BH 0.062 0 g(精确至0.000 1 g)原药样品，溶液配制方法同BH标准母液的配制。

1.3 液相检测条件

流动相使用体积比为55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)体系，流动速度0.83 mL/min，色谱柱温度为40 ℃，每针进样体积为10 μL，检测波长286 nm，BH标准品的相对保留时间为5.423 min。

1.4 色谱测定

用2.5 mL一次性注射器将BH标准品和试样溶液(均为50 mg/L)通过0.22 μm有机滤膜注入到进样瓶中，待G1311C四元泵的压力稳定和G1315D全波长紫外检测器的基线平稳后，在液相色谱检测条件下，对同一BH标准品溶液连续多次进样，至相邻两次进样BH峰面积的变化值在1.5%内时，采用外标定量法，根据BH标样→BH试样→BH标样→BH试样的进样顺序对BH进行分离检测，BH的色谱图见图1。

图1 BH色谱图Fig.1 BH chromatogram

使用HPLC对BH标准品和试样溶液进行多次检测，峰面积取平均值，试样溶液中BH的质量分数W2(%)按照如下公式计算：

式中A1和A2——分别为HPLC检测的BH标样和试样的均值峰面积；

M1和M2——分别为称量的BH标准品和原药的质量，g；

W1——BH标准品的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

将BH的标准母液使用甲醇稀释成1 mg/L标样溶液，在紫外分光光度计上进行全波长扫描，得到BH的吸收光谱图，见图2。

图2 BH紫外吸收谱图Fig.2 BH UV absorption spectrum

由图2可知，在286 nm处BH有最大吸收。在此波长下对BH进行色谱分析，发现标样和试样中的杂质不影响BH的测定。因此，选定286 nm作为检测BH的波长。

2.2 色谱条件的优化

首先，对乙腈-水和甲醇-水体系作为流动相进行测试，发现使用乙腈-水体系为BH的流动相时，存在溶剂效应，BH色谱峰前沿严重；采用甲醇-水体系作流动相时溶剂效应较小，但色谱峰的相对保留时间在2 min之内，峰形不匀称。因此，反复测试不同体积比的甲醇-甲酸水和甲醇-磷酸水作为流动相以及调节流速对保留时间和色谱峰峰形的影响，发现当流动相使用体积比为55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)体系、流动的速度为0.83 mL/min，色谱柱的检出温度为40 ℃时，BH的保留时间适中，峰形对称，杂质干扰较小。因此，确定此条件作为BH检测的色谱条件。

2.3 线性相关性和检出限的测定

BH标准溶液用甲醇进行逐步稀释，配制成0.01～50 mg/L的系列标准溶液，定量分析采用1.3节中的色谱条件，用Excel 2013对所测得数据进行线性拟合，结果见图3。得到BH的线性回归方程为y=23.423x+0.785 9，R2=1，说明BH在质量范围浓度在0.01～50 mg/L内的线性相关性良好。

图3 BH标准曲线Fig.3 BH standard curve

根据液相检测器产生的响应信号是噪声值的3倍 值(即S/N=3)来估算BH的最小检出限(LOQ)，得到BH的LOQ为4 μg/L。

2.4 方法精密度的测定

BH原药样品称量5份，配制BH的试样溶液，并将BH的质量浓度稀释至线性范围内，定量分析按照1.3节中的色谱条件进行，结果见表1。

表1 BH精密度测定结果Table 1 BH precision measurement results

由表1可知，计算后得到BH的平均质量分数为80.224%，标准偏差为0.139，变异系数为0.173%，小于CIPAC中规定的标准。

2.5 方法准确度的测定

方法准确度采用加标回收率进行评价，分别称取5份已知质量的BH原药样品于50 mL容量瓶中，每个容量瓶中分别添加一定质量的BH标准品，色谱纯甲醇溶解、定容，并将BH的质量浓度稀释至线性范围内，定量分析按照1.3节中的色谱条件进行，结果见表2。

表2 BH准确度测定结果Table 2 BH accuracy measurement results

由表2可知，BH的加标回收率为99.44%～101.20%。BH平均加标回收率值为100.35%。

3 结论

建立了一种利用高效液相色谱检测BH原药的定量分析方法。色谱柱温度为40 ℃，流动相使用体积比为55∶45的甲醇-磷酸水(0.2%)体系，流动的速度为0.83 mL/min，检测波长286 nm。在此色谱条件下，建立的BH分析方法具有使用便捷、保留时间适中、峰形对称，且方法的精密度及准确度高，可用于BH原药的质量检测。