风热感冒颗粒气相色谱特征图谱研究

曾 桢，李婷婷，王 欣，孔卫东，刘 莉

（四川省成都市食品药品检验研究院，四川 成都 610045）

风热感冒颗粒由经典名方银翘散加减药味而来，有疏风清热、利咽解毒功效，临床多用于治疗风热感冒，症见发热、出汗、鼻塞、头痛、咽痛、咳嗽、多痰等[1]。对风热感冒颗粒的质量研究多集中在板蓝根、牛蒡子等成分的高效液相色谱（HPLC）方面[2－7]，而处方中的臣药薄荷、荆芥穗均以挥发油入药，对其研究鲜有报道。为更好地控制其质量，保证疗效，本研究中参考文献[8－10]，采用气相色谱法，对市售26批风热感冒颗粒的挥发性成分进行分析，建立了气相色谱特征图谱，为其质量的均一性研究提供依据。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

7890B型气相色谱仪，含自动进样器、火焰离子化检测器（美国安捷伦科技有限公司）；XPE26型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；AE－240型电子天平（德国Sartorius公司）；SK250H型超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；Milli－Advantage A10型超纯水装置（美国Millipore公司）。

1.2 试药

26批市售风热感冒颗粒[批号分别为2002201，1903209，2003210，1903202，1903207，A 20190630，A20190629，A20190563，B20200501，190604，190616，190524，190503，190602，20190703（A），20191003，20180118，20190703（B），20200309，ZJA1901，ZAA1911，ZAA2009（A），ZEA1901，ZAA2009（B），ZAA1912，ZEA2009]；β－蒎烯对照品（批号为111827－201202，供含量测定用），柠檬烯对照品（批号为100470－201302，含 量 为96.0%），薄 荷 酮 对 照 品（批 号 为111705－201105，含量为99.8%），薄荷脑对照品（批号为10725－201707，含量为99.8%），胡薄荷酮对照品（批号为111706－201907，含量为99.8%），板蓝根对照药材（批号为121177－201608），薄荷对照药材（批号为120916－201812），荆芥穗对照药材（批号为121424－201505），连翘对照药材（批号为120908－201817），桑叶对照药材（批号为121123－201806），均购自中国食品药品检定研究院；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：DB－WAX毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.50μm），程序升温，初始温度为50℃，以5℃/min的速率升至140℃，保持4 min，以20℃/min的速率升至200℃，保持1min，再以50℃/min的速率升至235℃，保持3 min；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为230℃，进样口温度为230℃，进样量为1μL，分流进样的分流比为1∶1；载气流速为2 mL/min。

2.2 溶液制备

混合对照品溶液：分别称取β－蒎烯、柠檬烯、薄荷酮、薄 荷 脑、胡 薄 荷 酮 对 照 品25.925 3，28.152 7，24.725 0，27.125 3，25.352 1 mg，精密称定，置250 mL容量瓶中，加石油醚（60～90℃）溶解并定容，制成质量 浓 度 分 别 为0.103 7，0.112 6，0.098 9，0.108 5，0.101 4 mg/mL的混合对照品溶液。

供试品溶液：取样品50 g，置蒸馏管中，加入20%氢氧化钠溶液50 mL，水蒸气蒸馏，收集馏出液约250 mL，置250 mL容量瓶[预先装入石油醚（60～90℃）5 mL]中，振摇提取，摇匀后静置，取上层石油醚溶液，作为供试品溶液。按风热感冒处方和工艺制备样品Ⅱ，并按供试品溶液制备方法制得供试品溶液Ⅱ。

对照药材溶液：取板蓝根、薄荷、荆芥穗、连翘、桑叶对照药材各5 g，加水100 mL，煎煮2 h，滤过，得滤液约50 mL，置蒸馏管中，加氢氧化钠10 g，水蒸气蒸馏，收集馏出液约250 mL，置250 mL容量瓶[预先装入石油醚（60～90℃）5 mL]中，振摇提取，摇匀后静置，取上层石油醚溶液，即得。

2.3 方法学考察

精密度试验：精密吸取2.2项下供试品溶液1μL，按2.1项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果各色谱峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%（n=6），表明方法精密度良好。

稳定性试验：精密吸取2.2项下供试品溶液（批号2002201）1μL，分别于室温下放置0，4，8，12，24 h时进样测定，记录峰面积。结果各色谱峰相对保留时间、相对保留峰面积的RSD均小于3.0%（n=5），表明供试品溶液在室温下24 h内稳定。

重复性试验：取样品（批号2002201）6份，依法制备供试品溶液，再按2.1项下色谱条件进样测定。结果各色谱峰相对保留时间和相对保留峰面积的RSD均不超过3.0%（n=6），表明方法重复性良好。

2.4 特征图谱的建立

共有峰及参照峰选择：取2.2项下混合对照品溶液、供试品溶液Ⅱ、对照药材溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图（见图1）。选取含量较高的7号峰（薄荷脑）为S峰（参照峰）。测定26批次样品的特征图谱，比较其色谱图，确定8个共有特征峰，分别归属到5味药材。结果见表1。

表1 风热感冒颗粒特征图谱共有峰归属表Tab.1 Common peak assignment of characteristic chromatograms of Fengre Ganmao Granules

图1 气相色谱图1.β－pinene 2.borneol 5.benzyl benzoate 7.alantolactone 8.isoalantolactoneA.Mixed reference solution B.Test solutionⅡ C－G.Reference medicinal materials solution（the order of C－G was Radix Isatidis，Mentha haplocalyx，Schizonepeta tenuifolia，Folium Mori and Forsythia Suspensa）Fig.1 GC chromatograms

特征图谱分析：26批次样品的特征图谱区别较大，主要为16批次缺失β－蒎烯峰、11批次缺失柠檬烯峰，7批次缺失薄荷酮峰、13批次缺失峰6。仅8批次的特征图谱峰完整（见表2）。β－蒎烯和柠檬烯分属连翘和桑叶，处方工艺中提取工艺为煎煮，两类成分的缺失提示企业提取罐煎煮参数的差异，会造成该类抗菌成分的缺失。薄荷酮和峰6分属薄荷，处方工艺中提取方式为提取挥发油，此类成分的缺失，结合HPLC法含量测定结果，提示企业投料的薄荷药材质量欠佳或投料不足。以上结果可推测，市售风热感冒颗粒质量参差不齐，亟须提高其质量标准，加大其质量品质监控。

表2 26批风热感冒颗粒特征图谱共有峰的相对保留时间Tab.2 Relative retention time for the common peaks of characteristic chromatograms of 26 batches of Fengre Ganmao Granules

3 讨论

3.1 色谱柱选择

预试验中考察了DB－WAX（聚乙二醇）毛细管柱（30 m×0.53 mm，1.0μm），DB－WAX（聚乙二醇）毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.50μm），HP－5毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），以及不同柱温及程序变温条件对结果的影响。结果DB－WAX（聚乙二醇）毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.50μm）在正式研究中规定的条件下，分离度好，保留时间适中，峰形较好，故被选用。

3.2 提取溶剂选择

文献[11－13]中挥发油提取多采用乙酸乙酯作为吸收液，但预试验发现，乙酸乙酯有一定水溶性，会造成样品中的部分挥发性成分因溶剂混溶而消失。而以石油醚（60～90℃）作为吸收液时，待测成分色谱峰峰面积较大，且特征信息较全面、干扰较少。故以石油醚（60～90℃）为吸收液。

3.3 提取方法选择

预试验中比较了BUCHIDistillation Unit K－350水蒸气蒸馏法及药典附录挥发油测定法，结果水蒸气蒸馏法提取杂质少，峰形佳，干扰小，故被选用。

3.4 馏出液体积确定

依法制备供试品溶液，收集150，250，500 mL馏出液并进行比较，结果峰面积差异不大，为保证测定成分馏出完全，故确定馏出液体积为250 mL。

3.5 方法评价

中药的特征图谱能较全面地反映制剂中所含化学成分的种类和数量，能有效地体现中药成分的整体性和综合作用[14－16]。本研究中建立了风热感冒颗粒的气相色谱特征图谱，标定了8个共有峰，并指认出5个特征峰。该方法操作简便、快速，准确性和专属性均良好，可较全面地反映风热感冒颗粒中所含的化学成分，可为其质量的均一性提供依据。