高效液相色谱法测定甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐原药含量

杨锦蓉，齐建敏，张丽荣，任丽颖，贾成国

(河北威远生物化工有限公司，石家庄 050011)

甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐为我公司近两年来的创制产品，它是以阿维菌素B2a为原料合成得到的阿维菌素类似物。通过室内生测与田间药效试验发现其对小菜蛾、叶螨(红蜘蛛)、黏虫、水稻二化螟等害虫具有非常好的防治效果，且其活性显著高于阿维菌素B2a，具有较大的农药开发价值[1-4]。

随着甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐在农业生产中应用越来越多，对其进行检测以测定该农药原药含量和控制其产品质量显得尤为必要。然而，目前有关甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐的检测方法未见报道，只能查到其有关类似物甲氨基阿维菌素苯甲酸盐检测方法[5-8]。基于此，本文开展了采用高效液相色谱法测定甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐原药有效成分含量的研究，以期为该农药产品生产与应用的质量控制和分析方法提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260 型高效液相色谱仪配自动进样器、DAD检测器和色谱工作站(美国安捷伦公司)；BSA124S-CW电子天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司]；KQ-250B超声波仪(昆山市超声仪器有限公司)；甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐标准品[质量分数≥98.0%，国家农药质量监督检验中心(沈阳)]，甲醇(色谱纯，西陇科学股份有限公司)，乙腈(色谱纯，西陇科学股份有限公司)，氨水(分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司)，纯净水(杭州娃哈哈公司)。

1.2 溶液制备

标样溶液的制备：称取甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐标样约0.05 g (精确至0.000 2 g)于100 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解，冷却至室温后用甲醇稀释至刻度，摇匀备用。

试样溶液的制备：称取甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐样品0.05 g (精确至0.000 2 g)于100 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解，冷却至室温后用甲醇稀释至刻度、摇匀，0.45 µm滤膜过滤后进行分析测定。

1.3 色谱测定条件

DAD检测器；C18色谱柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液=43+43+14(体积比)；流速为1.0 mL/min；检测波长为245 nm；柱温为30 ℃；进样量为5 µL。在该色谱条件下，甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐的保留时间为11.2 min。

1.4 测定

在上述色谱操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直到相邻2针甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐标样的峰面积相对变化小于1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.5 结果的计算

样品中甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐的质量分数含量x(%)按下式计算：

式中：A1为标样溶液中甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐峰面积的平均值；A2为试样溶液中甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐峰面积的平均值；m1为标样的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标样中甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐质量分数，%。

2 结果与分析

2.1 流动相的选择

选用不同比例的甲醇+0.33%氨水溶液、乙腈+0.33%氨水溶液、甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液为流动相，对甲氨基阿维菌素B2a进行液相色谱测定。当用甲醇+0.33%氨水溶液时，主峰峰型较差；选用乙腈+0.33%氨水溶液(75+25，体积比)时，原药中有一杂质峰与主峰无法完全分离，使得测定结果误差较大；选用甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液时，通过调节3者的比例，发现当甲醇+乙腈+0.33%氨水溶液(体积比为43∶43∶14)时，杂质能与主峰基本分离，峰形较好且出峰时间11.2 min。

2.2 波长的选择

取质量浓度为0.5 mg/mL的甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐标准样品，在190～400 nm的波长范围内扫描(图1)，发现在244 nm附近处有最大吸收，故确定244 nm为检测波长。

图1 甲氨基阿维菌素B2a光谱图

2.3 专属性试验

分别取甲醇作为空白溶液及甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐原药样品溶液在上述液相色谱条件下进行测定，得到的图谱如图2、3所示，且原药主峰峰纯度为99.992%，证明杂质峰不干扰有效成分含量的测定，本方法专属性好。

图2 空白样品谱图

图3 甲氨基阿维菌素B2a原药样品谱图

2.4 线性关系

准确配制甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐不同质量浓度的标准溶液(0.11、0.23、0.45、0.68、0.9、1.1 mg/mL)按上述色谱条件进行测定。以样品浓度为横坐标，以相应的峰面积为纵坐标作图(图4)。由图4可见，在质量浓度为0.048 2～1.446 4 mg/mL时，甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐的质量浓度与峰面积之间表现出良好的线性关系，其线性回归方程为y=8 400.852 34x-173.019 25，相关系数r为0.999 5(n=6)。

图4 方法的线性关系图

2.5 方法的精密度

分别称取同一个样品约0.05 g (精确至0.000 2 g)于5个100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度、摇匀，进行液相色谱测定，结果见表1。可见，样品中甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐的质量分数含量为90.34%，RSD为0.19%。

表1 方法精密度测定结果

2.6 方法的准确度

在已知样品中，加入不同体积的标样溶液，使达到正常测定浓度的80%、100%、120%，按照含量测定，计算加标回收率，结果见表2。可见，甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐的回收率为99.0%～99.6%，平均回收率为99.3%。

表2 方法的准确度测定结果

3 结 论

本文建立了一种高效液相色谱法测定甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐原药含量的分析方法。该方法具有专属性好、精密度和准确度高等特点，符合产品定量测定要求，适合于甲氨基阿维菌素B2a苯甲酸盐原药的含量检测。