蓝舌病病毒血清8型定性传入风险评估

罗倩敏，韩佃刚，董 俊，杨云庆，祝 贺，叶玲玲，张 冲，尹尚莲，李瑶瑶，何昌霖，董仙兰，艾 军

（昆明海关技术中心，云南昆明 650200）

蓝舌病（bluetongue，BT）是由蓝舌病病毒（bluetongue virus，BTV）引起的，以库蠓为主要传播媒介的烈性、非接触性反刍动物传染病。不同品种的反刍动物对BTV易感性有很大差异。反刍类动物感染BTV后的死亡率平均为35%，其中绵羊最易感，死亡率可高达80%[1]。牛一般为隐性感染，无明显症状，但由于长期的病毒血症，牛在BTV传播中发挥了重要作用。世界动物卫生组织（OIE）将BT列入须通报动物疫病名录[2]，我国将其列为一类动物疫病[3]。

在已报道的27种血清型中，除BTV-8外，其他血清型很少能引起养殖业的巨大经济损失。2006—2008年，欧洲16个国家暴发BTV-8感染疫情，对畜牧业产生了巨大经济影响，是迄今为止最严重的一次BT暴发，最终通过实施强制免疫才得以有效控制[4]。2015—2019年，BTV-8又出现在法国、瑞士、土耳其、德国、比利时，呈现向北、向东扩散趋势。此次流行中动物临床症状不明显，但毒株基因序列与2006—2008年北欧流行毒株同源性高达99.9%[5]。我国从1980年至今，已经分离到13种BTV血清型，包含BTV-1、2、3、4、5、7、9、12、14、15、16、21和24[6-7]，目前尚未有发现BTV-8血清型的报告。本研究采用定性评估方法分析BTV-8传入我国的潜在风险，以期为防范BTV-8传入提供参考。

1 病原学特征

BTV属于呼肠孤病毒科环状病毒属，基因组长约20 kb，由10个节段（Seg-1～10）的双链RNA构成，病毒粒子对称结构为二十面体，直径约80 nm。目前全球已报道的BTV血清型有27种，也有人认为有29种[8]，多出的两种为分离自中东的BTV-28以及分离自南非羊驼的BTV-29[9]。同时各血清型毒株之间无交叉保护作用，使得BT防控工作难度较大[10]。

BTV在干燥的已感染血清或全血中，以及已腐败或含抗凝剂的感染全血中可存活数十年之久；对0.1%去氧胆酸钠、氯仿和乙醚有一定的抵抗力，但在酸性条件下抵抗力较弱，当pH为3时可将其迅速灭活；对热敏感，60 ℃连续加热30 min以上可将其灭活，75～95 ℃能将其迅速灭活；70%酒精和3%福尔马林也可灭活BTV；长期放置于-20 ℃条件下，毒价下降较快[11]。

2 传播媒介

BTV主要通过库蠓传播。目前已经证明能够传播BTV的库蠓有50多种，但只有少数库蠓种被认为能够在野外作为有效载体，包括非洲、中东、东南亚大部分地区和南欧部分地区的C.imicola、北美的C.sonorensis和澳大利亚的C.brevitarsis[12]。

库蠓携带的病毒通过叮咬易感动物进入机体，在宿主的中肠细胞中复制增殖，然后再返回到库蠓体腔（血腔），并在唾液腺中复制后，再传播给新的宿主。病毒复制时间一般取决于环境温度，15 ℃需要数周，30 ℃只要几天即可[13]。当温度低于12 ℃时，病毒将停止复制，寄宿于宿主体内，当环境温度升高时再次复制[14]。在较高的温度下，库蠓消化血液所需时间也会减少，从而增加了吸血频率。因此，气温上升最直接的影响是缩短病毒生成时间，增加传播机会[15]。

资料[16]表明：我国有9种传播BTV的媒介库 蠓，包 括C.wadai、C.actoni、C.orientalis、C.brevitarsis、C.insignis、C.imicola、C.homotomus、C.schulitzei、C.obsoletus；全国范围内，都有BTV媒介库蠓存在，而在西南地区，病媒种类多达5种以上，这主要和库蠓喜欢温暖、潮湿的生活习性有关。

3 BTV-8起源、分布及流行情况

3.1 起源

2006年，北欧出现并传播了一种新的BTV血清型——BTV-8[5]。BTV-8感染引起的临床症状多表现为发热、消瘦、口腔黏膜糜烂、精神沉郁、流涎、吞咽困难，头部、嘴唇和下巴水肿以及跛行、流产及产奶量下降等[17]。

BTV-8的起源和传入欧洲的途径还未确定。早前曾有关于BTV-8在印度、加勒比海的多米尼加共和国以及非洲地区暴发的报道，但没有关于BTV-8相关疾病性质和严重程度的详细报道[18]。2006年8月，有报道[5]称，荷兰BTV-8毒株与非洲撒哈拉以南分离的BTV-8毒株非常相似，表明该病毒可能起源于非洲。

Rajko-Nenow等[2]对入侵塞浦路斯的BTV-8进行溯源，通过大气扩散模型分析，认为有可能在7—9月，因干燥天气，BTV-8随库蠓携带从黎巴嫩、叙利亚或以色列海岸线进入塞浦路斯拉纳卡地区；而“空中历史”模拟也支持了携带BTV-8的库蠓可以随风从黎巴嫩中部海岸线经地中海到拉纳卡地区的假设。库蠓飞行距离一般为2 km。而有人认为在风中可以达到700 km，如果该假设成立，那么BTV-8可以从非洲地区随库蠓通过风被动传播进入欧洲。

2006年BTV-8感染疫情暴发前，在北欧和南欧进行的研究表明：C.obsoletus、C.pulicaris和C.imicola是最有可能的BTV潜在媒介物种；后期发现，BTV-8在北欧的传播与C.imicola无关，因为在最初受疫情影响的地区没有这种库蠓，而C.obsoletus、C.dewulfi、C.scoticus和C.chiopterus等被认为是欧洲北部和西部的BTV-8传播者[5]。

Pascall等[4]对2006—2010年和2015年法国两轮疫情进行了研究，构建了引发第二轮疫情的BTV-8祖先序列，发现两轮疫情相隔5年，BTV-8似乎休眠了，没有进化痕迹，这不符合自然状态，认为第二轮疫情暴发很大可能不是病毒自然传播，而是人为失误（暴露的冷冻精液或实验室冷冻病毒材料泄漏）。迄今，溯源工作仍没有定论。

3.2 欧洲地区分布及流行情况

2006年，荷兰首次发现BTV-8，同年BTV-8蔓延到比利时、德国、法国及卢森堡[19]，并成功越冬在这些国家流行至2007年5—6月，同时继续扩散至丹麦、瑞士、西班牙、捷克、英国和意大利，2008年再次蔓延至奥地利、瑞典和匈牙利[12]。2006—2008年欧洲地区BTV-8感染的暴发次数见图1。研究者认为，2008年北欧的BTV-8流行造成的经济损失比以往其他单一血清型都要大[2]。

图1 2006—2008年BTV-8感染在欧洲地区的暴发次数统计[12]

在使用灭活疫苗进行强制接种后，一些欧洲国家在2010—2012年恢复至无BTV-8状态[5]。法国消灭BTV-8流行3年后，又于2015年9月在阿利埃省的一个牛羊农场再次发现BTV-8。基因组序列比对结果显示，该毒株与2006—2010年在法国流行的BTV-8毒株同源性高达99.9%[5]。

研究人员认为，BTV-8重新出现的原因可能是该血清型自2006年首次出现以来的低水平循环[20]。但也有人认为：2015年法国再次出现BTV-8是由一种自第一次暴发以来，缺乏进化的病毒所引起的，或者是因污染冷冻材料的意外释放引起的[4]。

自2015年以来，法国报告了近3 000例BTV-8感染病例，主要来自出口前检测的牛。与法国第一轮BTV-8流行相比，这些病例很少观察到临床症状。这可能是因为动物在2006年的初次感染期间产生了部分免疫力，或者是因为2010年实施了强制疫苗接种，然而也不能排除病毒毒力降低的可能性[21]。

2017年BTV-8又出现在瑞士[22]。与2006—2009年传播的病毒株相比，此次检出的BTV-8毒株似乎致病性较小，尽管病毒基因组保持稳定[21]。

对比欧洲2006—2010年和2015年至今两轮BTV-8感染暴发情况，发现后一轮疫情呈局部暴发，范围较小（图2）。

图2 欧洲两轮BTV-8 感染疫情的区域分布对比[5]

2018年，土耳其首次发现BTV-8[2]。土耳其横跨欧亚两洲，这意味着肆虐欧洲的BTV-8已进入亚洲。

4 传入风险因素分析

我国已经分离到13种BTV血清型，但截至目前尚未检出BTV-8，也没有关于BTV-8感染病例的报道。但鉴于欧洲BTV-8不断流行的状况，BTV-8依然有传入我国的风险。

4.1 传染源

感染BTV-8的反刍动物及携带BTV-8的库蠓是本病传染源。除欧洲存在BTV-8流行外，非洲以及印度、多米尼加等也有可能存在BTV-8，而我国也有传播BTV-8的库蠓种属C.obsoletus，因此存在BTV-8传入扩散风险。

4.1.1 引种传入风险 自2006年荷兰首次发现BTV-8感染以来，疫情由北欧迅速向西、向东扩散，已波及整个欧洲。至2019年，已有荷兰、法国、德国、奥地利、瑞典、比利时、卢森堡、挪威、丹麦、瑞士、英国等多个国家报道发现BTV-8感染病例，因此欧洲已成为最大的BTV-8传染源地。随着畜牧业的发展，我国与欧洲各国的畜产品贸易、畜种交易日趋频繁，每年从欧洲引进的牛羊种畜或畜产品数量巨大，BTV-8传入风险较高。

4.1.2 放牧及随野生动物传入风险 欧亚大陆陆海相通，BTV-8向亚洲蔓延扩散完全具备传播的地理条件。我国幅员辽阔，边境线长，北疆、西部、西南部与他国陆地相连，在边境线有许多自由活动的反刍类家畜及野生动物，如麝科、牛科和鹿科等反刍类动物，存在感染传入风险。

4.1.3 技术传入风险 在人工饲养的畜牧业程序中，牛的人工受精、胚胎移植及其公牛精液的广泛使用，导致疫病传播风险较高。在患病的公牛和公羊精液中可检测到BTV。病毒在母体内引发感染，并可垂直传播到胚胎，而被污染的胚胎可在植入时引起传播。因此，精液和胚胎都可能是BTV-8传入的潜在来源。考虑到BTV-8可通过口腔传播，被污染的冷冻初乳也是一个潜在的传入来源[18]。

4.2 传播途径

BTV一般可以通过以下4种方式传播：①通过动物流动（家畜和野生反刍动物）或动物产品运输（精液、胚胎）；②由各种活的（植物、动物）或无生命的（飞机、船舶）载体携带的受感染媒介库蚊；③通过病媒库蠓的主动传播（局部传播）；④通过被感染的病媒库蠓在风中的被动传播（远距离传播）[23]。这4种传播方式在我国都客观存在。

4.3 易感动物

牛科及其他反刍类动物为BT易感动物，其中绵羊最敏感，山羊次之，牛一般不表现临床症状。我国牛羊养殖数量庞大，牛存栏量在9 000万头左右，羊存栏量在3亿只左右。据海关总署不完全统计，2020年我国累计进口大中种畜277 564头，累计进口种牛85 750头。

我国不仅拥有庞大规模的BTV易感动物群体，还大量从欧洲原产地或第三国引进牛羊优良品种，如夏洛来牛（原产法国）、西门塔尔牛（原产瑞士）、利木赞牛（原产法国）、安格斯牛（原产英国）、荷兰奶牛、丹麦红牛、夏洛莱羊（原产法国）、特克赛尔羊（原产荷兰）、德国美利奴羊、萨福克羊（原产英国）、波尔羊（原产南非）。因此，BTV-8传入我国并扩散的风险极高。

4.4 国内防控现状

面对欧洲BTV-8感染疫情，国家兽医部门采取监测境外疫情，广泛开展国内病原学及阳性抗体监测，分析境外疫情流行态势等主动防御措施。2017年，根据《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》及 《动物防疫法》等法律法规规定，制定了《2017年国家动物疫病监测与流行病学调查计划》，将BT（BTV-8型）列入监测和调查病种，对各级兽医部门下达了监测任务，提出了监测要点，明确了监测要求。海关总署在2021年进境反刍动物的疫病监测技术要求中，将BT作为重点疫病监测对象对反刍动物进行逐头检测。

我国拥有成熟的针对BTV-8的检验检疫技术，包括定型微量中和试验、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、荧光RT-PCR等，能够快速、准确地完成监测、检疫工作。同时，我国也具有成熟的疫苗、试剂研发能力及规模生产能力，能快速应对突发的疫情事件。

5 风险评估结果

综上分析认为：（1）BTV-8 的变异、进化、增殖和传播需要的只是条件，因此存在由境外传入或由本土其他类型病毒变异而发生BTV-8 感染疫情的风险；（2）欧洲BTV-8 感染疫情快速蔓延并有向东扩散趋势，因此通过陆路感染放牧家畜或野生反刍动物，进而传入我国的可能性极大；（3）我国近年来引进的牛羊优良品种几乎都来自欧洲，再加上牛羊人工授精、胚胎移植等繁殖技术的大量应用，BTV-8 随引种传入风险极高；（4）库蠓是BTV-8 的主要传播媒介，生物种群强大，完全可能搭乘各类载体或随风进入我国，因此BTV-8 进入我国也只是时间问题。

6 风险管理

BTV-8传入国内并发生疫情的风险较大，必须高度警惕。一是加强边境口岸检验检疫，对进境动物坚持落地检疫、隔离检疫制度，对报检动物严格按照国家标准完成检疫程序，不减免检疫项目；对报检反刍动物按国家规定重点疫病清单增设BTV-8监测项目；严厉打击牛羊走私活动，防止病畜逃检。二是加强国内牛羊等反刍动物以及库蠓的BTV-8监测，做到主动与被动监测相结合，病原与抗体监测相结合，定点与常规监测相结合，专项与紧急调查相结合，监测与净化评估相结合，确保监测结果真实、准确，并及时上报，做到早发现、早控制。