丝线结扎诱导种植体周围黏膜炎的实验研究

蔡榕 王新革 王金 雷家琪 张照欣 李德华

种植术后并发症是种植失败的一个主要原因，分为种植体周围黏膜炎和种植体周围炎。种植体周围黏膜炎的病变局限于黏膜，不伴随进行性边缘骨吸收［1］，患病率约为 43%～50%［1－2］。种植体周围炎的病变突破软组织封闭，伴随边缘骨吸收［3］，患病率约为12%～40%［1］。种植体周围黏膜炎不治疗可能发展成种植体周围炎，治疗则可能恢复健康［4］。由于种植体周围炎缺乏有效的治疗方法，所以早期诊断、治疗种植体周围黏膜炎，防止其进一步发展至关重要［5］。

在动物体内诱导种植体周围黏膜炎是研究其防治的基础，主要方法为菌斑自然堆积法和丝线结扎辅助菌斑堆积法。Martins等［4］发现菌斑自然堆积6周后比格犬出现种植体周围黏膜炎，17周后出现种植体周围炎；Berglundh等［6］通过菌斑堆积3周在比格犬口内诱导了种植体周围黏膜炎，在作者的另一项实验中，菌斑堆积90 d后种植体周围黏膜炎状态仍然持续［7］。可见菌斑自然堆积法诱导种植体周围黏膜炎的时效性不佳，且诱导时间不易控。

Trejo等［8］通过丝线结扎辅助菌斑堆积法在恒河猴口内诱导了种植体周围黏膜炎，作者用丝线在种植体周围结扎1周后取出，待菌斑自然堆积2周后再用丝线结扎3周，但未说明丝线结扎的位置，若丝线结扎在龈沟内，则可能破坏种植体周围软组织封闭，引发异物反应，诱导种植体周围炎，且多次操作增加了动物麻醉的风险。Schou等［9］通过龈缘丝线结扎3周在食蟹猴口内诱导了种植体周围黏膜炎，但缺乏对结果的全面评估。

本实验拟采用颈缘丝线结扎辅助菌斑堆积法诱导种植体周围黏膜炎，并通过口内检查、探诊、龈沟液检测、影像学检查证明其可靠性，为种植体周围黏膜炎的研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 基本材料

1.1.1 实验动物 12月龄雄性比格犬3只，体重13 kg左右（成都达硕实验动物有限公司）。本实验已通过第四军医大学口腔医院动物伦理委员会审批。

1.1.2 主要实验仪器与试剂 速眠新 II（吉林圣达动物药品有限公司）；戊巴比妥钠（第四军医大学口腔医院动物实验中心）；复方盐酸阿替卡因注射液（碧兰公司，法国）；种植体（TL，LN，3.3 mm×8 mm，江苏创英医疗器械有限公司）；愈合帽（1.5 mm，江苏创英医疗器械有限公司）；种植机（西诺普公司，瑞士）；0.25 N压力敏感探针（科尔公司，瑞士）；30号吸潮纸尖（北京达雅鼎医疗器械有限公司）；3－0丝线（上海金环医疗用品股份有限公司）；数字化牙片机（西诺德有限公司，德国）。

1.2 实验方法

1.2.1 牙拔除术 比格犬术前8～12 h禁食禁水，于臀大肌注射速眠新 II（0.1 mL/kg）与 2.5%戊巴比妥钠溶液（0.5 mL/kg）进行麻醉。用1%碘伏进行口内消毒，碧兰麻进行局部浸润麻醉，微创拔除比格犬下颌第二至四前磨牙，间断缝合。术后3 d皮下注射安痛定（0.2 mL/kg，1次/d），术后 1周皮下注射青霉素（10 000 U/kg，1次/d）。

1.2.2 种植体植入术 愈合3个月后行种植体植入术，麻醉及用药同前。翻开黏骨膜瓣，平整骨面，逐级备洞，下颌每侧植入3颗种植体，植入扭矩为35 N·cm，种植体的粗糙面上缘与骨面齐平，种植体之间和与牙之间距离7 mm，安装愈合帽，间断缝合。术后软食喂养，种植体和其余牙每周刷3次。

1.2.3 分组 使用SPSS 22.0软件生成随机数组，将每只比格犬的左右侧随机分为健康组（PH）和黏膜炎组（PM）。每组种植体数为9颗。

1.2.4 丝线结扎 于比格犬臀大肌注射速眠新II（0.03 mL/kg）与 2.5%戊巴比妥钠溶液（0.2 mL/kg）进行麻醉。黏膜炎组种植体在植入后第8～11周结扎3－0丝线，丝线结扎位置为愈合帽－种植体连接处，位于龈缘上，结扎期间停止种植体周围卫生维护。

1.3 观察指标

1.3.1 口内检查 检查每个愈合帽的近中颊面、正中颊面、远中颊面以及舌面，按下述标准进行记分：

牙龈指数（GI）：0，牙龈健康；1，牙龈轻度炎症：牙龈的颜色有轻度改变并轻度水肿；2，牙龈中度炎症：牙龈色红，水肿光亮；3，牙龈重度炎症：牙龈明显红肿或有溃疡，并有自动出血倾向。

菌斑指数（PI）：0，龈缘区无菌斑；1，龈缘区愈合帽表面有薄的菌斑，但视诊不可见，若用探针尖刮可见牙菌斑；2，可见中等量菌斑；3，大量软垢；每颗种植体的记分为记分之和除以4，每组记分为种植体记分之和除以数目。

取出黏膜炎组的丝线，所有种植体更换新愈合帽，每颗种植体探诊颊舌侧两个位点，记录探诊出血指数（BOP）、探诊深度（PD）。

1.3.2 龈沟液检测 剪去吸潮纸尖尖端5 mm，6根一组置于Ep管中，电子天平称重。棉卷隔湿，气枪轻吹种植体及周围牙龈，2 min后将吸潮纸尖插入种植体颊、舌侧的近中、正中、远中龈缘下1 mm，30 s后取出，若纸尖沾有血液和唾液，则弃去该管，间隔2 min重复取样，然后将吸潮纸尖放回原Ep管称重，按1 g/mL换算成龈沟液体积。剪除吸潮纸尖干燥段，保留湿润段，加入200μL PBS缓冲液，混匀5 min，离心5 min（4℃、3 000 r/min），置于 －80℃冰箱保存。检测前将龈沟液标本恢复至室温，混匀2 min，用酶联免疫反应（ELISA）测定 IL-1β、IL-6、TNF-α含量。

1.3.3 影像学检查 两组在第 8周与11周拍摄X线片，以种植体的直径为参照，测量种植体近远中两侧骨结合顶点（BCI）到种植体肩台（IS）处的距离。

1.4 统计学分析

采用SPSS 20.0软件对数据进行独立样本t检验，结果用±s表示，P＜0.05为具有统计学差异。

2 结 果

实验动物健康，种植体骨结合良好，未出现松动、脱落。

2.1 口内检查

健康组愈合帽表面无明显软垢，种植体周围牙龈色泽、质地正常；黏膜炎组9个愈合帽在丝线结扎3周后表面均覆盖大量软垢、菌斑，牙龈出现红肿（图1），且 GI、PI明显上升（P＜0.001）（表 1）。

图1 口内观察Fig 1 Intraoral observation

黏膜炎组种植体在丝线结扎3周后BOP显著高于健康组（P＜0.001），2组PD无统计学差异（P＞0.05）（表 1）。

表1 口内检查结果Tab1 Intraoral examination results

2.2 龈沟液检测

2组种植体在第11周时龈沟液重量和IL-1β、IL-6、TNF-α含量存在显著差异（P＜0.05）（表 2）。

表2 龈沟液量及其中炎症因子含量Tab 2 Volume of gingival fluid and inflammatory factor content

2.3 影像学检查

2组在第8与11周时IS-BCI的长度无统计学差异（P＞0.05），即边缘骨水平稳定（图 2）。

图2 影像学检查Fig 2 Radiographic examination

3 讨 论

3.1 实验动物以及种植体植入术要点

表3 影像学检查结果 （mm）Tab 3 Radiographic examination results （mm）

研究种植体周围黏膜炎的动物包括犬、灵长类动物、小型猪。犬具有操作方便、易于维护卫生的优点，且骨骼微观特点与人类相近，拔牙创愈合周期、骨愈合周期与人类相似，因此应用最为广泛［10］。灵长类动物下颌骨的解剖学特征要求植入减径种植体，且动物购买和饲养价格昂贵，在种植体周围黏膜炎研究中很少使用［10］。小型猪的骨愈合周期等还需要更多的研究［11］。因此本实验选用比格犬作为实验动物。

比格犬下颌第一前磨牙位于尖牙牙根上方，且距离颏孔较近，因此通常在第二前磨牙至第一磨牙区域植入种植体。种植体直径宜选“窄”（3.0～3.75 mm）或“超窄”（＜3.0 mm），种植体长度宜选“短”（6～10 mm）或“超短”（≤6 mm）［12］。

比格犬边缘骨水平在种植体植入术后3～5周稳定［13］，骨结合率在第4周稳定［14］，结合上皮宽度在第6周稳定，软组织屏障在第6～8周成熟［15］，因此本实验的丝线结扎起始时间为种植体植入术后第8周。

比格犬的牙龈厚度约（1.723±0.281）mm，龈沟深度约1 mm［16］，使用软组织水平种植体能排除二期手术对黏膜的影响，1.8 mm穿黏膜高度也使愈合帽－种植体界面结扎的丝线位于龈缘，不进入龈沟内，排除了丝线对软组织封闭的影响。

3.2 诱导种植体周围黏膜炎的实验结果

黏膜炎组种植体周围组织均出现炎症表现，牙龈指数、菌斑指数、探诊出血指数、龈沟液体积和IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著高于健康组，两组探诊深度无统计学差异，两组边缘骨水平均稳定。上述结果表明龈缘丝线结扎3周可以诱导比格犬种植体周围黏膜炎。

4 结 论

本实验改良了丝线结扎诱导比格犬种植体周围黏膜炎的方法。结果表明，龈缘丝线结扎3周可以诱导比格犬种植体周围黏膜炎，为种植体周围黏膜炎的研究提供了参考，而结扎时间及材料对炎症的影响还需进一步研究。