重症急性胰腺炎患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p与并发肺损伤的相关性*

2021-07-26沈琪琦童小文王伟吴洪

西部医学 2021年7期

沈琪琦童小文王伟吴洪

(上海交通大学医学院附属第九人民医院，上海 200011)

急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是急诊科常见急腹症，其中20%的患者为重症AP(severe acute pancreatitis,SAP)，这类患者病情进展快，极易发生全身性炎症反应，导致多脏器功能衰竭，病死率较高[1]。肺是AP进展过程中最易受到损伤的器官，研究表明，15%～60%的SAP患者伴有不同程度的急性肺损伤(acute lung injury，ALI)，一周内死亡率超过60%，严重威胁患者生命安全[2-3]。对于SAP患者，及早诊断肺损伤的存在并进行针对性治疗可改善患者预后，提高存活率，因此寻找有效的诊断标志物具有重要临床意义。当前随着分子生物学技术的发展，外周血核苷酸等物质在疾病中的应用价值逐渐受到关注，微小RNA(microRNA，miRNA)是一类参与多种生理活动的非编码小分子RNA，其可通过调控基因转录、翻译等影响细胞活动及新陈代谢等过程[4-5]。miR-21-3p、miR-22-3p是两种在胰腺组织内特异性表达的miRNA，其可在胰腺损伤时释放入血，导致血液中含量升高，检测其水平可为胰腺损伤及程度的评估提供一定帮助[6-8]。目前miR-21-3p、miR-22-3p水平与SAP并发肺损伤的关系较少有研究报道。本研究通过检测SAP并发肺损伤患者各指标差异，探讨其在SAP并发肺损伤诊断、病情评估及预后中的价值，为SAP的早期治疗提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2017年7月～2020年2月本院收治的124例SAP患者作为研究对象。纳入标准：符合中华医学会外科学分会胰腺外科学组制定的急性胰腺炎诊治指南相关标准[9]，经CT、生化检查明确诊断；对本研究知情并签署同意书。排除标准：合并严重肝肾功能疾病、心血管系统疾病；合并呼吸系统疾病者；合并自身免疫病、恶性肿瘤者；近期使用非甾体类抗炎药物者。另选择50例同期我院进行体检的健康志愿者作为对照组。患者均进行详细临床检查及生化检查，参考《急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征诊断及治疗指南(2006年版)》中ALI诊断标准[10]，按照是否合并ALI分为单纯SAP组(78例)、SAP合并ALI组(46例)。

1.2 方法收集患者性别、年龄、病因、影像学检查情况、急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分等资料。

1.3 标本采集及RNA提取各组受试者均采集晨起空腹静脉血，保存于EDTA抗凝管内，采用北京百泰克生物技术有限公司全血RNA试剂盒(RP1101)提取RNA，采用变性胶检测RNA质量，采用微量分光光度计检测浓度，保存备用。实时荧光反转录定量PCR：①逆转录：采用Thermo Scientific RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit逆转录试剂盒(K1621)合成cDNA。②PCR：引物序列miR-21-3p：sense(5′-ATCGTAGCTACTAGTACGTG-3′)，antisense(5′-GCATGCTCATGAGCATCG-3′)；miR-22-3p：sense(5′-CATTCAGCCAGTCTCCACGTGA-3′)；antisense(5′-GCTTCCAGTGATACGGCCTGT AACG-3′)；内参U6：sense(5′-CTCGCTTCGGCAG CACA-3′)；antisense(5′-AACGCTTCACGAATTT GCGT-3′)。反应体系：20 μL体系，TaqMan GE MASTER Mix 10 μL、产物1 μL、引物1 μL、补无RNA酶水至20 μL。反应程序：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s, 72 ℃ 20 s，40Cycle。以内参U6表达量作为参照，计算ΔCt值，ΔCt=目的扩增Ct值-内参Ct值，以2-ΔΔCt表示为目的产物的表达水平。

1.4 统计学分析采用SPSS19.0进行数据处理与统计学分析，计数资料以频数及率表示，组间比较行2检验或Fisher精确检验，计量资料以表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较行独立样本t检验；采用Logistic多因素回归分析ALI发生的影响因素，绘制受试者特征工作曲线(ROC)分析指标诊断价值，P<0.05为差异具统计学意义。

2 结果

2.1 各组患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达情况单纯SAP组、SAP合并ALI组患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p显著高于对照组(P<0.05)；SAP合并ALI组高于单纯SAP组(P<0.05)，见表1。

表1 各组患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达情况

2.2 不同临床资料分级患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达情况不同CT分级、伴有胸水与否、APACHEⅡ评分患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p水平比较差异具统计学意义(P<0.05)；CT分级为E级、合并胸水、APACHEⅡ评分≥15分患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p水平高于CT分级为D级、无胸水、APACHEⅡ评分<15分的患者(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床资料患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达情况

2.3 SAP患者并发ALI的影响因素分析根据外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达水平，以两者中位值分别作为截点值，将miR-21-3p、miR-22-3p分别分为高表达组、低表达组；以是否并发ALI(否=0，是=1)作为因变量，以患者年龄(<50岁=1，50岁=2)、性别(男性=1，女性=2)、病因类型(胆源性=1，酒精性=2，高脂血症=3，其他类型=4)、CT分级(D=1，E=2)、胸水(无=1，有=2)、APACHEⅡ评分(<15分=1，15分=2)、外周血miR-21-3p(低表达=1，高表达=2)、miR-22-3p表达水平(低表达=1，高表达=2)等资料作为自变量进行Logistic回归，CT分级、胸水、外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达水平与SAP患者并发ALI相关(P<0.05)，见表3、4。

2.4 外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达诊断ALI发生的价值绘制外周血miR-21-3p、miR-22-3p诊断ALI发生的ROC曲线，两者单独诊断的曲线下面积(AUC)为0.770、0.812，当截点值为2.668、1.815时，约登指数最大，两者联合诊断AUC为0.869，见图1、表5。

表4 SAP并发ALI的多因素分析

图1 外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达诊断ALI的ROC曲线

表5 外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达诊断ALI发生的价值

3 讨论

miRNA分子小，在血液中均匀分布，稳定且较易被检测，明确其水平在疾病中的变化可为疾病诊断及评估提供一定参考[11-12]。目前SAP导致肺损伤的发生与胰酶的激活、炎症介质释放等作用相关，炎症反应在两者发病过程中均占据重要地位[13-15]。miR-21-3p是介导炎症反应相关的基因调节的miRNA，吴仕燕等[16]开展的一项研究证实血清miR-21-3p水平与脓毒症患儿急性肾损伤密切相关，其可能通过调控机体炎症反应对器官产生影响；国外有研究表明，miR-21-3p在胰腺组织中存在高度特异性表达，在胰腺炎发生时，胰腺细胞受损，可促使细胞释放miR-21-3p，其表达升高，而细胞状态也可导致miR-21-3p主动或被动释放入血液中，引起外周血miR-21-3p水平的升高[17-18]。miR-22-3p是哺乳动物常见miRNA，见于多种细胞及组织内，既往有研究表明，miR-22-3p等多种miRNA表达异常与炎症反应发生相关[19]。本研究结果显示，与对照组比较，SAP组患者外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达明显升高，且合并ALI的患者表达量更高，提示外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达量可能与胰腺炎的发生及程度相关。CT分级、APACHEⅢ均为反映SAP患者严重程度的指标[20-21]。本研究探讨了不同临床资料SAP患者各指标表达差异，结果显示CT分级较高，APACHEⅡ评分较高，存在胸水的患者各表达量较高。这一结果进一步证实外周血miR-21-3p、miR-22-3p表达量与胰腺炎的发生及程度密切相关。另外多因素分析结果也提示在校正其他因素后，外周血miR-21-3p、miR-22-3p水平与SAP患者ALI的发生存在一定关系。Dixit等[22]开展的一项动物研究表明，在小鼠AP模型中，可检测到miRNA-21-3p表达量的明显升高；吴开李等[23]开展的一项临床研究也证实AP患者外周血miRNA-21-3p表达量升高，其水平可作为诊断及预后评估指标；孙月玲等[24]证实在AP患者中也存在miR-22-3p表达量的升高，且其与SAP患者ALI并发相关。本研究在前人研究结果基础上进一步证实SAP患者miR-21-3p、miR-22-3p表达与ALI的发生密切相关。

外周血miR-21-3p、miR-22-3p水平与SAP患者严重程度及是否并发ALI密切相关，分析其水平或可明确SAP患者脏器衰竭情况，可帮助临床医师及时确定治疗方案，提高治疗效果。本研究绘制指标诊断ALI发生的ROC曲线，结果显示外周血miR-21-3p、miR-22-3p水平诊断SAP并发ALI的AUC均大于0.75，提示两者对于ALI的发生有一定诊断价值，另外两者联合诊断AUC更大，在临床中可检测两者水平并进行联合诊断。目前较少有研究报道miR-21-3p、miR-22-3p水平对SAP并发ALI的诊断价值，本研究结果可为临床提供一定参考。本研究存在一定局限性：样本量较少，对患者临床资料收集不全面，在进行多因素分析时可能存在较大偏移。