艾滋病抗病毒治疗对HIV-1 感染者肠道微生态疗效探究

李战英

（广西平果市人民院，广西 平果 531400）

0 引言

HIV病毒会对人体免疫能力造成破坏，使免疫系统丧失抵抗力。尤其是CD4作为HIV病毒主要攻击的T淋巴细胞，一旦发生HIV感染后则会出现大量消耗的情况，促使淋巴组织结构发生改变以及肠道黏膜屏障功能异常，为肠道细菌产物的转移创造一定条件，最终导致肠道微生态失调与全身炎症[1-2]。联合抗反转录病毒治疗法（cART）虽然可对HIV的复制发挥抑制作用，降低患者死亡率，但经过长期观察发现，患者经cART治疗后慢性免疫激活、高炎症状态均未得到改善，可能是肠道菌群失调造成的结果。基于此，本文就艾滋病抗病毒治疗对HIV-1感染者肠道微生态的影响进行研究，总结如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料。选取2019年8月至2021年8月广西平果市人民院诊治的208例HIV感染患者作为研究对象。将患者是否接受联合抗反转录病毒（cART）治疗依据进行分组，将187例接受cART治疗的患者纳入cART治疗组，余下21例未接受cART治疗的患者纳入cART未治疗组。cART治疗组中，男100例，女87例；年龄23～48岁，平均（35.62±3.27）岁：体重：45～65 kg，平均（51.14±2.16）kg。cART未治疗组中，男13例，女8例；年龄24～49岁，平均（35.76±3.14）岁；体重：45～65 kg，平均（51.29±2.30）kg。两组一般资料无统计学意义存在（P＞0.05），本次研究已获得医院伦理委员会批准。纳入标准：①患者符合《中国艾滋病诊疗指南（2018版）》[3]制定的相关诊断标准；②患者知情且同意加入研究。排除标准：①合并消化系统疾病者；②合并良性或恶性肿瘤者；③经手术切除肠道者。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂：应用仪器包括常温离心机、冷冻离心机、流式细胞分析仪、PCR仪、电泳仪、荧光定量系统、白细胞分化原CD3/CD4/CD45检测试剂盒等。

1.2.2 CD4计数：应用EDTA-K2抗凝血真空管对患者静脉血进行采集、混匀后保存；依次将荧光抗体、50 μL EDTA-K2抗凝血加入塑料试管内混匀，放置于室温暗处15 min，通过TQ-PREP仪做溶血与固定处理，最后应用流式细胞仪计算CD4细胞。

1.2.3 肠道微生物DNA扩增与测序：在粪便DNA保存管内留取1管患者粪便，放置于室温下3 d后保存于-70℃冰箱中；应用刮刀将200 mg粪便刮取后保存于2 mL离心管内，在E.Z.N.A.®Stool DNA Kit说明书指导下对DNA进行提取；提取结束后，首先通过琼脂糖凝胶电泳对DNA提取质量做检测处理，检测合格即可扩增；应用引物扩增16S rRNA可变区（V3+V4），扩增技术为PCR法，通过2%琼脂糖凝胶电泳处理扩增产物，并回收目标片段；通过荧光定量系统在文库上定量纯化后的PCR产物，处理结束后测序。

1.2.4 生物信息学分析：在生物信息学分析过程中应用Flash1.2.8软件进行，首先设定序列相似性＞97%干净数据为一个操作分类单元（OTU），同时选择最佳聚类中心序列视为该OTU的代表序列，再通过blast做序列比对处理；将OTU代表序列同时比对核糖体数据库（RDP）、NCBI-16S数据库，为各代表性序列进行物种注释。应用QIIME18.0软件对α多样性进行分析，其中包括Observed sPecies、Chao1、Shannon、SimPson 和Goods coverage。

1.3 统计学分析。处理工具为SPSS 22.0统计软件。计量数据（）比较行t检验，计数数据（%）比较行χ2检验。比较差异有统计学意义以P＜0.05表示。

2 结果

2.1 对比HIV-1感染患者OTU数。cART治疗组、cART未治疗组患者OTU数M（QR）各为158（142.00）、230（215.00），对比发现差异无统计学意义（P＞0.05）；cART组187例患者中，CD4细胞计数＜200个/mm3的患者共有103例，OTU数为128.54（93.00）；CD4细胞计数≥200个/mm3的患者共有84例，OTU数为198.00（100.00），对比发现差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 对比cART治疗组、cART未治疗组α多样性指数。cART治疗组SimPson指数低于cART未治疗组（P＜0.05）。见表1。

表1 比较cART治疗组、cART未治疗组α多样性指数[M（QR）]

2.3 对比cART治疗组患者α多样性指数。CD4细胞计数≥200个/mm3组Observed sPecies 与Chao1指数均高于CD4细胞计数＜200个/mm3组（P＜0.05）。见表2。

表2 比较cART治疗组患者α多样性指数[M（QR）]

2.4 对比cART治疗组、cART未治疗组肠道微生物主要门与属构成情况。在变形菌门、蓝细菌、埃希菌属、链球菌属、罗氏菌属比较上，cART治疗组与cART未治疗组存在统计学意义（P＜0.05）；在其他门、属水平优势物种构成比较上，两组不存在统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 比较HIV-1感染患者肠道微生物主要门与属构成情况[M（Qs），%]

2.5 对比cART治疗组肠道微生物主要门与属构成情况。在蓝细菌构成比较上，CD4细胞计数＜200个/mm3组与CD4细胞计数≥200个/mm3存在统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 比较cART治疗组肠道微生物主要门与属构成情况[M（Qs），%]

3 讨论

HIV-1感染患者因为肠道菌群失调，经cART治疗处于慢性免疫激活及炎症状态中，如研究结果显示：CD4细胞计数≥200个/mm3组Observed sPecies 与Chao1指数均高于CD4细胞计数＜200个/mm3组患者（P＜0.05），差异有统计学意义（P＜0.05）。表明若HIV-1感染患者CD4水平越低，其接受cART治疗后肠道通透性发生改变的可能性则越大，并且易加重微生物移位现象[4]。α多样性指数是研究与比较群落多样性、生态多样性的手段，其中Observed sPecies 和 Chao1 指数具有评估物种总数的作用，两项指数与样本所含物种数量呈正比，而SimPson 和 Shannon 指数则是物种丰富度、均匀度的综合体现[5-6]。研究结果显示：cART治疗组SimPson指数低于cART未治疗（P＜0.05），说明HIV-1感染患者经cART治疗后微生物群组组成的变化受到限制，且肠道生态失调程度加重，可能是HIV病毒复制、免疫机制重建与cART治疗药物作用导致[7-8]。本研究中，cART治疗组与cART未治疗组的变形菌门、蓝细菌、埃希菌属、链球菌属、罗氏菌属存在统计学意义（P＜0.05）。CD4细胞计数＜200个/mm3组蓝细菌构成比与CD4细胞计数≥200个/mm3组存在统计学意义（P＜0.05）。分析可知，患者行cART治疗后厚壁菌门属减少，如链球菌属。同时，厚壁菌门中还存在着产生短链脂肪酸丁酸盐的物种，酸丁盐具有调节肠内稳态的作用，不仅可为上皮细胞提供能量，而且又能对肠道免疫细胞反应信号分子进行调节，表明cART治疗会影响HIV-1感染者的肠道稳态，引起胃肠道症状[9]。

综上所述，cART治疗会使HIV-1患者治疗后肠道微生态紊乱，且不同CD4细胞水平的HIV-1感染患者肠道微生物会发生动态变化。