不同蒸制方法对苗药莴比苷(商陆)总多糖含量的影响*

王小波，杜洪志，王先菊，蒙燕瑶，石金钱，陈志琳，李 玮

(贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)

苗药莴比苷(商陆)为商陆科植物商陆PhytoluaccaacinosaRoxb.或垂序商陆PhytolaccaamericanaL.的干燥根。其生品性冷，味苦，属冷药，入热经，有毒。具有洼沃(泻水)、达洼渥(利尿)之功，主用于普嘎秋(水臌病)、岗秀布(皮肤湿疹)等病症[1]。其药用历史悠久，始载于《神农本草经》，疗效突出，但因其作用峻烈，毒性较强，故列为下品。

毒性药物临床应用时，为降低其毒性，多炮制后入药，以保证临床用药的安全有效。2020版《中国药典》收载商陆的炮制方法为“醋炙商陆”，炮制后作用缓和，苦寒之性降低，以逐水消肿为主，但仍有一定毒性。《雷公炮炙论》中记载：“每修事商陆，刮粗皮，薄切，以水浸两宿，然后漉出甑蒸，以豆叶一重与商陆一重，如斯蒸，从午至亥出，去豆叶暴干，细锉用”。结合民族药专著的查阅，在苗医药的临床应用中，莴比苷(商陆)通过特殊蒸制为熟品后，味甜性补，可降低毒性，减缓峻泻作用[1]。根据相关文献，莴比苷(商陆)中化学成分主要有皂苷类[2]、多糖类[3]等成分，其蒸制后“味甜性补”可能与成分变化有关，其中多糖类主要有商陆多糖-I(PAP-I)和商陆多糖-Ⅱ(PAP-Ⅱ)[4]，商陆多糖-I能诱生肿瘤坏死因子，提高免疫能力[5]，商陆均一多糖可促进小鼠脾细胞增殖[6]；而商陆多糖-II有增强免疫和促进造血功能的作用，能促进小鼠脾淋巴细胞增殖[7]。有关莴比苷(商陆)不同蒸制方法中总多糖含量变化未见相关研究报道。

基于此，本文结合实地调研及相关文献资料记载，以总多糖含量为评价指标，采用紫外-可见分光光度法及苯酚-硫酸法，探讨趁鲜蒸制、烘干后蒸制、流水浸后蒸制等不同炮制方法下，苗药莴比苷(商陆)样品中总多糖含量的变化。研究不同蒸制时间与总多糖含量之间的内在联系动态变化规律。研究结果为莴比苷(商陆)的炮制加工、药效物质及临床应用奠定良好的实验基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

TU-1810型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；ME204E万分之一分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；HH-S4型恒温水浴锅(上海况胜实业发展公司)；HS10260D型超声清洗仪(上海易净超声波仪器有限公司)；101-3AB型电热恒温鼓风干燥箱(天津市泰士特仪器有限公司)；XL-02A型新型密封式粉碎机(广州市旭朗机械设备有限公司)。

1.2 试药

无水乙醇(天津市富宇精细化工有限公司，分析纯)；浓硫酸(重庆川东化工有限责任公司，分析纯)；苯酚(成都市科龙化工试剂厂，分析纯)；无水葡萄糖对照品(批号：GZDD-0523，贵州迪大生物科技有限责任公司)；蒸馏水为实验室自制。

莴比苷(商陆)药材采自贵州省贵阳市花溪区，经贵州中医药大学魏升华教授鉴定为商陆科植物垂序商陆PhytolaccaamericanaL.的根。

2 方法与结果

2.1 莴比苷(商陆)不同炮制品的制备

2.1.1 生品

取莴比苷(商陆)鲜药材，除去杂质，洗净泥土，刮去外皮，趁鲜切厚片(0.2～0.4 cm)，60 ℃烘干，取出，得生品样品。

2.1.2 醋炙品

取烘干后的净莴比苷(商陆)片，根据2020版《中国药典》中收载的商陆“醋炙法”，进行醋炙炮制。炒至表面黄棕色，微有醋香气，取出，摊开放凉，得醋炙品样品。

2.1.3 趁鲜蒸制

取定量鲜莴比苷(商陆)片，大小分档，置于蒸制容器中，用鲜大豆叶层层隔开，底部以及顶部覆盖，一层大豆叶一层商陆片，隔水加热，分别蒸制2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、18 h、22 h、26 h、32 h，取出，冷却，60 ℃烘干，得趁鲜蒸制样品。

2.1.4 烘干后蒸制

取适量直接烘干后的莴比苷(商陆)片，喷淋适量清水后，润透，按“2.1.3”项蒸制法，分别蒸制2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、18 h、22 h、26 h、32 h，取出，冷却，60 ℃烘干，得烘干后蒸制样品。

2.1.5 流水浸后蒸制

取定量鲜莴比苷(商陆)片，流水浸泡3 d，取出，沥干水，按“2.1.3”项蒸制法蒸制12 h。取出，冷却，60 ℃烘干，得莴比苷(商陆)流水浸后蒸制样品。

2.2 供试品溶液的制备

取样品粉末(过二号筛)0.5 g，精密称定，置于100 mL具塞锥形瓶中，加入60 mL无水乙醇，回流提取两次，每次0.5 h，趁热过滤。剩余的残渣用10 mL无水乙醇洗涤两次，弃去滤液。将残渣和滤纸自然挥干后放入100 mL锥形瓶中，加入10 mL蒸馏水，超声提取(功率300 W，50 kHz)1 h，趁热过滤，精密吸取续滤液1 mL置于100 mL量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液的制备

称取无水葡萄糖对照品约5 mg，精密称定，置于50 mL量瓶中，加入蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得0.1014 mg/mL无水葡萄糖对照品溶液。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察

精密吸取0.1014 mg/mL无水葡萄糖对照品溶液2 mL、3 mL、4 mL、6 mL、7 mL、8 mL，分别置于10 mL量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，精密吸取不同浓度对照品溶液1 mL，再分别精密吸取5%苯酚溶液1.6 mL、浓H2SO47 mL，充分摇匀，进行显色，沸水浴5 min，冰水浴15 min。以蒸馏水溶液为空白对照，在最大吸收波长488 nm下测定吸光度，以吸光度Y为纵坐标，葡萄糖浓度X为横坐标，绘制工作曲线，得线性回归方程为：Y=8.682X-0.0073(R2=0.9999)，结果表明在0.02028 ～ 0.08112 mg/mL范围内线性关系良好。

2.4.2 精密度试验

吸取无水葡萄糖对照品溶液，共6份。按照“2.4.1”项方法进行显色，测定吸光度并计算RSD值。得RSD值为0.63%<3%，结果表明仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性试验

吸取同一供试品溶液1 mL，按照“2.4.1”项方法进行显色，分别在显色后0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h测定吸光度，计算RSD值。得RSD值为0.50%<3%，表明该样品在5 h内稳定性良好。

2.4.4 重复性试验

取同一样品共6份，每份0.5 g，精密称定，按照“2.2”项方法进行样品制备，按照“2.4.1”项方法进行 显色，测定吸光度，计算RSD值。得RSD值为2.32%<3%，表明供试品提取、显色方法的重复性良好。

2.4.5 加样回收率试验

取同一样品共6份，每份0.25 g，精密称定，分别加入适量无水葡萄糖对照品溶液，按照“2.2”项方法进行样品制备，按照“2.4.1”项方法进行显色，测其吸光度，计算加样回收率。得该方法的加样回收率平均值为103.89%，RSD值为2.39%<3%，说明检测方法的准确性良好。

2.5 不同炮制品总多糖含量测定

分别取莴比苷(商陆)不同炮制样品，按照“2.2”项方法进行样品制备，按照“2.4.1”项方法进行显色，测定不同样品中的总多糖含量，以干燥品计算，研究结果见表1和图1。

表1 莴比苷(商陆)不同炮制品总多糖含量测定结果(n=3)Tab.1 Content determination results of total polysaccharides inMiao medicine Vob Bix Gheib(Phytolaccae Radix)processed bydifferent methods(n=3)

图1 莴比苷(商陆)不同炮制品中总多糖含量趋势图Fig.1 Content of total polysaccharides in Miao medicine Vob Bix Gheib(Phytolaccae Radix) processed by different methods

由表1和图1可得，莴比苷(商陆)不同炮制方法中总多糖的含量差异较大，生品及醋炙品总多糖含量分别为8.73%和8.60%，趁鲜蒸制不同时间样品总多糖含量为7.65%～10.67%，烘干后蒸制不同时间样品的总多糖含量为6.99%～10.45%，流水浸后蒸制12 h样品总多糖含量为5.36%，其中以趁鲜蒸制12 h含量最高，为10.67%。同时，在一定蒸制时间内，含量随着蒸制时间的延长而增加，达最大值后呈下降趋势，其中趁鲜蒸制以12 h为最大值，烘干后蒸制以14 h为最大值。

3 结论与讨论

根据实验结果，以总多糖含量为评价指标，与生品与醋炙品比较，莴比苷(商陆)蒸制一定时间后，多糖含量有所增加，不同蒸制时间，总多糖含量不同，其中趁鲜蒸制以12 h为最大值，烘干后蒸制以14 h为最大值。结果表明蒸制不同时间后，多糖类物质发生改变，而流水浸后蒸制品含量最低，表明流水浸泡过程中，成分流失过多，研究结果为进一步探讨其炮制减毒增效作用奠定良好的实验依据。同时，为了进一步优选提取条件和显色条件，对提取方法、乙醇除杂浓度、提取时间、提取次数、料液比等提取条件以及显色剂用量、显色时间等显色条件进行了考察，为研究结果提供重要保证。

莴比苷(商陆)为少数民族地区常用药材，其分布广泛，药效明确，药用历史悠久，但因其毒性明显，临床应用受到限制，且其主要毒性物质目前尚无明确定论。但在苗医药临床应用中，通过炮制蒸熟后，其药性改变，毒性下降，具有补虚扶弱之功，且在古代本草《雷公炮炙论》中也有蒸制减毒的记载。通过文献资料的查阅，莴比苷(商陆)中多糖具有提高机体免疫力，增强巨噬细胞的吞噬作用[6-7]。故本文以总多糖为评价指标，筛选蒸制炮制工艺，进一步探讨莴比苷(商陆)蒸制不同时间后，其总多糖含量的动态变化。不同蒸制时间多糖含量的变化是否与药效结果相关，以及是否与炮制减毒存效作用机理相关有待进一步研究论证。