GC法同时测定连花清瘟胶囊中百秋李醇、薄荷脑的含量

刘艳平，张秀花，曾庆真，李怀伟，朱 山

（菏泽市食品药品检验检测研究院，山东 菏泽 274000）

连花清瘟胶囊由连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏仁、石膏、板蓝根、绵马贯众、鱼腥草、广藿香、大黄、红景天、薄荷脑、甘草十三味中药组方[1]，具有良好的清瘟解毒，宣肺泄热功效，治疗热毒袭肺证的流行感冒。目前连花清瘟胶囊质量标准中的含量测定仅针对连翘，尚未对市场问题较多的广藿香、薄荷脑进行质量控制。前期有文献对组方中的薄荷含量进行质控[2]，未发现同时测定广藿香、薄荷脑含量的报道。查阅《中华人民共和国药典》2020年版一部发现，百秋李醇、薄荷脑分别为检测广藿香和薄荷的指标性成分。其中百秋李醇是广藿香挥发油中倍半萜类成分，薄荷脑是薄荷中单萜类成分，其分子量小，易挥发，沸点较低，化学性质稳定，宜于用气相色谱法检测其含量。本实验室通过GC法同时测定组方中的广藿香（百秋李醇）、薄荷脑含量测定，方法简便，稳定性可靠，可有效地控制连花清瘟的质量，保证其临床用药安全性提供依据。

1 材料

1.1 仪器

7890B安捷伦气相色谱仪（美国安捷伦公司，配置Openlab CDS 2色谱工作站）；XS-105电子天平（上海梅特勒）；KQ3200E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

薄荷脑对照品（110728-201707，含量为99.8 %）、百秋李醇对照品（110722-201608，含量为 99.8 %）均购自中国食品药品检定研究院；乙酸乙酯（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；3批市售连花清瘟胶囊，重新编号分别为：s1，s2，s3。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备 取百秋里醇对照品、薄荷脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯溶解并稀释制成：（1）含百秋李醇 20.98 μg/ml，薄荷脑0.4260 mg/ml的混合溶液；（2）分别含百秋李醇0.5245 mg/ml，薄荷脑 10.65 mg/ml 的溶液。

2.1.2 供试品溶液制备 取本品内容物，研细，取约1.5 g，精密称定，置入具塞锥形瓶，精密加入乙酸乙酯25 ml，称定重量，超声处理30 min（功率250 W，频率40 kHz），取出，放冷，再称定重量，用乙酸乙酯补足减失的重量，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，即得。

2.1.3 阴性样品溶液 按处方比例及工艺，制备缺广藿香、薄荷的阴性样品，按照“2.1.2”项方法制备相应的溶液，即得。

2.2 色谱条件

色谱柱：安捷伦HP-5MS色谱柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；程序升温：起始温度40 ℃，保持5 min，以8 ℃/min升至180 ℃，保持10 min；进样口温度240 ℃；FID检测器温度250 ℃；分流比10:1；气体流速1 ml/min；进样量1 μl。

2.3 专属性试验

精密量取“2.1”项下对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各适量，按照“2.2”项下条件进样，记录色谱图，见图1。结果表明，对照品溶液色谱图中两组分峰能够完全分离；供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱图相应位置上有相同保留时间的色谱峰；阴性对照溶液对测定无干扰，专属性好。

图1 GC色谱图

2.4 线性关系考察

分别精密量取2.1.1项下溶液2，4，8，10，12，15 μl，按照“2.2”项下条件进样，记录色谱图。以对照品的进样量（μg）为横坐标（X），以峰面积值为纵坐标（Y）进行回归，回归方程百秋醇Y=43.525X-1.2139，r=0.9999；薄荷脑 Y=306.38X+26.494，r=0.9995；在0.8520 ～6.390 μg 范围内百秋李醇有良好的线性关系；在41.96 ～629.4 ng范围内薄荷脑有良好的线性关系。

2.5 精密度实验

精密吸取同一供试品溶液（s1），进样1 μl，连续进样6次，百秋李醇峰面积RSD为0.12 %，薄荷脑峰面积RSD为0.12 % ，表明仪器的精密度较好。

2.6 重复性

取同一批号（s1）供试品粉末6份，按照“2.1.2”项方法制备溶液，按照“2.2”项条件进样，记录色谱图，结果百秋里醇平均含量0.26695，RSD为0.26 %，薄荷脑平均含量19.78，RSD为0.31 %（n=6），表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液（s1），分别于溶液制备后0，2，4，8，12，24 h进样测定，百秋李醇峰面积RSD为0.26 %，薄荷脑峰面积RSD为0.41 %，即供试液溶液在24 h内稳定。

2.8 加标回收率试验

取同一批号（s1）供试品粉末适量，精密称定，按照“2.1.2”项方法制备溶液，加入“2.1.1”项下（2）百秋李醇对照溶液 0.8 ml， 薄荷脑对照溶液1 ml，按照“2.2”项条件进样，测定供试品中百秋李醇及薄荷脑的含量，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=6）

2.9 供试品含量测定

取3个批次连花清瘟胶囊，精密称定，按照2.1.2项下制备溶液，按照2.2项下条件进样，测定每份供试品中百秋李醇及薄荷脑含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n=3）

3 讨论

由于中药材广藿香含量批次之间不均，薄荷脑具有挥发性，在生产过程中存在投料不匀，未严格按照要求贮藏，导致产品批次之间含量测定结果不均，是含量测定结果的RSD偏高的主要原因。

根据百秋李醇、薄荷脑的性质，参考相关文献[2-8]，考察了超声提取、超声加冰两种方法，并对正己烷、环己烷、无水乙醇、乙酸乙酯等不同溶剂和提取时间进行综合考察。结果表明，乙酸乙酯提取效果最好，最终选择用毒性小，价格便宜的乙酸乙酯作为提取溶剂，加冰与不加冰超声提取无显著差别，最终选择了简单省时的超声提取方法。

本方法用GC同时测定连花清瘟胶囊中的薄荷脑、百秋李醇两种成份含量的方法，专属性强、稳定性较好，准确度高，回收率较好，简单方便，能较好地控制产品质量，可为连花清瘟胶囊的质量控制提供参考依据。