胶质瘤组织中Beclin1及Bcl-2的表达水平及其与术后复发的相关性

吴红举 贾东佩 胡 科 李春雷

胶质瘤是颅内最常见的、来源于神经上皮的恶性肿瘤，占颅内肿瘤的40%左右，病理类型包括室管膜瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、胶质母细胞瘤等，由于肿瘤多呈浸润性生长，手术治疗虽然有一定的效果，但是不易全切，在术后容易复发[1-2]。有研究认为胶质瘤患者术后常在短期内复发，多数发生在距原发灶≤2 cm的范围内，严重影响患者的预后[3]。多种因素可影响胶质瘤患者的预后，包括组织学分级、临床分期、年龄[4-5]，但对影响胶质瘤术后复发的因素还不明确。随着基因诊断学与现代分子生物学及的发展，部分分子标志物已被用于预测恶性肿瘤的预后[6]。自噬相关基因Beclin1是第1个被确认的自噬通路上的肿瘤抑制因子，也是酵母ATG6基因在哺乳动物中的同源物，其表达异常在恶性肿瘤的发生与发展中发挥重要作用[7-8]。B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)是调节细胞凋亡的重要因子，也是一种促癌因子，在多种恶性肿瘤组织中呈高表达状况[9-10]。本文具体探讨了胶质瘤组织中Beclin1及Bcl-2的表达水平及与术后复发的相关性，现总结报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

2017年3月到2020年2月选择在本院神经外科诊治的胶质瘤患者92例作为研究对象。纳入标准：临床与随访资料完整；首次神经外科手术；具有手术指征；病理诊断为胶质瘤；术前均未行放化疗及免疫治疗；年龄20～70岁。排除标准：标本资料被破坏者；临床与随访资料缺乏者；妊娠与哺乳期妇女。

入选的92例患者中男性48例，女性44例；年龄最小34岁，最大68岁，平均年龄(52.48±3.77)岁；病理类型：星形胶质细胞瘤48例，少突胶质细胞瘤32例，室管膜细胞瘤6例，多形性胶质母细胞瘤2例，髓母细胞瘤4例；临床分级：Ⅰ级36例，Ⅱ级24例，Ⅲ级18例，Ⅳ级14例；组织学分化：高分化38例，中分化32例，低分化22例；手术范围：非全切22例，全切70例；术后放疗34例，术后化疗28例。

1.2 Beclin1及Bcl-2表达检测

取所有患者的术后病灶组织标本(病灶组)与癌旁组织标本(癌旁组，距肿瘤边缘≥2 cm正常标本)，制成病理切片，采用酶联免疫法检测Beclin1及Bcl-2表达水平。Beclin1及Bcl-2一抗、二抗均购于美国BD公司，免疫组化试剂盒和二氨基联苯胺显色试剂盒购自福州迈新公司，病理染色严格按照说明书进行操作。以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照，以已知阳性切片作为阳性对照，每例切片在阳性反应区域选择5个200倍视野，计算染色区域累积光密度值与面积，取平均值，由病理科医生判断阳性情况。

1.3 复发随访

通过电话、微信及门诊随诊、门诊复查进行随访，记录患者术后复发情况，复发时间为术后至定期影像学复查发现复发病灶的间隔时间。本研究所有随访时间截至2020年9月1日。

1.4 统计方法

选择SPSS21.00软件对本研究数据进行分析，计量数据以均数±标准差(Mean±SD)表示(对比为t检验)，计数数据采用例数(百分比)，即n(%)表示(对比为卡方χ2分析)，采用多元Logistic逐步回归分析进行多因素分析，相关性分析采用Spearman相关性分析，P<0.05为统计学上差异有显著性。

2 结果

2.1 Beclin1及Bcl-2表达阳性率对比

病灶组的Beclin1及Bcl-2表达阳性率分别为34.8%和70.7%，癌旁组分别为72.8%和29.3%，组间对比差异都有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组Beclin1及Bcl-2表达阳性率对比(例，%)

2.2 复发情况

92例患者术后都得到随访，复发32例，复发率为34.8%，平均复发时间为(12.01±2.17)个月。

2.3 一般资料对比

92例患者按是否复发分为复发组和未复发组，复发组的性别、年龄、病理类型与未复发组对比差异无统计学意义(P>0.05)；2组的临床分级、组织学分化、手术范围、术后放疗、术后化疗等对比差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组一般资料对比

2.4 Beclin1及Bcl-2的表达阳性率及与术后复发的相关性

复发组的Beclin1、Bcl-2的表达阳性率与未复发组对比差异都有统计学意义(P<0.05)。见表3。Spearman相关性分析胶质瘤患者Beclin1、Bcl-2的表达阳性率与术后复发存在相关性(γ=-0.655、0.598，P=0.000)。

表3 Beclin1及Bcl-2的表达阳性率及与术后复发的相关性(例，%)

2.5 影响因素分析

多元Logistic逐步回归分析显示Beclin1(OR=4.293)、Bcl-2(OR=2.821)是胶质瘤患者术后复发的独立影响因素(P<0.05)。见表4。

表4 影响胶质瘤患者术后复发的多因素分析(n=92)

3 讨论

有研究显示胶质瘤患者经单纯手术治疗后的5年生存率≦25%，而经过化疗、放疗、手术等综合治疗方法，中位生存时间也很少超过15个月[11]，主要在于胶质瘤具有肿瘤浸润性及高度间变的生长特点，病灶多处于脑部重要结构，且与正常脑组织界限不明确，手术难以彻底切除[12-13]。本研究显示病灶组的Beclin1及Bcl-2表达阳性率分别为34.8%和70.7%，癌旁组分别为72.8%和29.3%，组间对比差异都有统计学意义(P<0.05)。从机制上分析，Beclin1可通过Ⅲ型PI3K形成一个复合体定位于自噬前体结构，从而发挥调节自噬活性。Beclin1表达缺失可使得多种恶性肿瘤逃避自噬死亡，从而使得肿瘤恶性增殖[14]。Bcl-2定位于人类染色体18a21上，主要发挥细胞凋亡调控的作用。Bcl-2的高表达可促使Racl由失活状态向激活状态转变，进而影响细胞的极化性，促进细胞运动和迁移[15]。

胶质瘤的总体预后随着外科手术及辅助治疗手段的不断更新改进，已经有了很大的改善，但是很多患者在术后容易发生复发，直接影响患者的预后[16]。胶质瘤术后复发定位为原发性胶质瘤术后再次出现复发灶，呈多中心性或散在病灶，可单发也可多发[17]。本研究中92例患者术后复发32例，复发率为34.8%，平均复发时间为(12.01±2.17)个月。复发组的性别、年龄、病理类型与未复发组对比差异无统计学意义(P>0.05)，2组的临床分级、组织学分化、手术范围、术后放疗、术后化疗等对比差异有统计学意义(P<0.05)。从机制上分析，肿瘤的临床分级越高与组织学分化越低，其恶性程度越高，侵袭性越强，术后更加容易复发。手术范围、术后放疗、术后化疗也是影响患者术后复发的基础因素，此外，长期治疗也会对患者的身心状态与免疫功能造成负面影响[18]。

胶质瘤术后复发的原因复杂，与多种分子生物学因素有关。因而探寻相关基因在胶质瘤的发生及发展机制，对评估预后胶质瘤的复发具有非常重要的价值。本研究显示复发组的Beclin1、Bcl-2的表达阳性率与未复发组对比差异都有统计学意义(P<0.05)；Spearman相关性分析胶质瘤患者Beclin1、Bcl-2的表达阳性率与术后复发存在相关性(γ=-0.655，0.598，P=0.000)；多元Logistic逐步回归分析显示Beclin1(OR=4.293)、Bcl-2(OR=2.821)是胶质瘤患者术后复发的独立影响因素(P<0.05)。从机制上分析，自噬是亚细胞水平变化的1种进化保守的细胞功能，有利于细胞适应环境与保持细胞功能稳定[19]。Beclin1位于人染色体17q21，不仅可参与自噬体的形成，诱导细胞凋亡，还可促进细胞增殖[20-21]。Bcl-2蛋白是1种重要的抗细胞凋亡分子，在维持线粒体完整性中发挥重要作用[22]。Bcl-2可在肿瘤细胞中发挥抑制细胞凋亡的作用，从而有利于细胞增殖与侵袭[23]。本研究也存在一定的不足，观察时间不够长，未观察到总生存时间，存在一定的偏倚性，将在后续研究中深入探讨。

总之，胶质瘤患者术后容易出现复发，且伴随有Beclin1及Bcl-2异常表达，Beclin1、Bcl-2的表达水平与术后复发存在相关性，也是影响患者复发的主要因素。