5-HT和CRH在肝癌中的表达及与其病理特征的相关性研究

姬粉芝 张志伟

肝癌是常见的恶性肿瘤之一，是指起源于肝细胞和肝内胆管上皮细胞的恶性肿瘤，其中90%以上为肝细胞癌[1]。由于该病发病隐匿，进展迅速，发现时多数患者已处于中晚期，为此肝癌的死亡率一直居高不下，且具有恶性程度高、侵袭性强等特点[2]。肝癌的治疗方法包括手术治疗和非手术治疗，不过很多患者在确诊时已失去了手术治疗指征。肝癌的非手术治疗方法包括经肝动脉导管栓塞治疗、化疗、放疗、中医中药治疗、射频消融治疗、生物治疗。肝癌的病因复杂，其发病的具体机制还不明确，不过也是涉及多途径、多基因调控、多信号通路相互作用的复杂过程[3]。5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)在调节机体情绪、情感和睡眠中发挥重要作用，5-HT表达下降可导致机体产生抑郁，从而在临床上出现认知障碍、自残自杀等行为[4]。5-HT也具有调节细胞增殖、促进细胞凋亡的作用，但目前5-HT与恶性肿瘤的发生、发展的关系还不明确。促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)最初在神经系统中发现，是1个含有41个氨基酸的多肽，其由下丘脑释放作用于垂体，可释放促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic Hormone，ACTH)与促进垂体合成，从而参与机体的应激反应[5]。有研究表明CRH在部分恶性肿瘤中存在高表达，其可能参与疾病发生和发展过程[6-7]。本文具体探讨了5-HT、CRH在肝癌中的表达与病理特征的相关性，希望为明确肝癌的发生机制提供一定的参考。现总结报告如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

2016年7月至2019年12月选择在本院诊治的肝癌患者880例作为研究对象，纳入标准：本院伦理委员会批准了此次研究；患者签署了知情同意书；年龄20～70岁；患者均经临床检查、影像学检查及手术病理检查确诊为肝癌；患者入院前均未接受相关抗肿瘤治疗；临床病历资料完整。排除标准：正参与其他研究者；妊娠与哺乳期妇女；伴有心、肝、肾等脏器功能严重障碍者；存在神经系统疾病或交流沟通障碍者；继发性肝癌或肝脓肿血管瘤者；合并其他恶性肿瘤者；术前进行过放疗、化疗及相关治疗的患者。

在880例患者中，男性520例，女性360例；年龄32岁～68岁，平均年龄(48.52±2.19)岁；平均肿瘤直径(5.19±0.24)cm；单发病灶576例，多发病灶304例；门静脉癌栓448例，肝外转移160例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期432例，Ⅲ～Ⅳ期448例；组织学分化：高分化200例，中分化440例，低分化240例。

1.2 5-HT、CRH表达检测

取所有患者的病灶组织样本(病灶组)与癌旁组织样本(离病灶组织≥2 cm，癌旁组)，制作成病理切片。用5%血清进行室温封闭30 min左右，加入1∶1000的单克隆抗体(抗5-HT抗体与抗CRH抗体)4 ℃过夜孵育。隔天加入1∶2000 的二抗，37 ℃孵育30 min。然后进行常规显色、封片，在镜下观察，记录5-HT、CRH表达情况。染色强度：不着色0分,黄色1分,棕黄色2分，黄褐色3分；阳性细胞所占比例评分标准:阳性细胞数<10% 0分;，10%～40% 1分，40%～70% 2分，≥70% 3分。两种评分相加，≥3分表明表达阳性。

1.3 病理特征调查

调查所有患者一般资料，包括性别、年龄。同时记录患者的病理特征，包括肿瘤直径、病灶类型、临床分期、转移情况、门静脉癌栓、组织学分化等。

1.4 统计方法

应用SPSS 19.00软件对本研究进行分析，计量数据以均数±标准差表示，对比为t检验；计数数据以百分比表示，对比为卡方χ2检验等，三组间对比采用方差分析，使用Logistic回归分析进行影响因素分析，相关性分析采用Pearson相关分析，以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 5-HT、CRH表达水平对比

病灶组5-HT、CRH表达阳性率为分别为70.9%和20.0%，癌旁组分别为15.5%和60.9%，对比差异都有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组5-HT、CRH表达水平对比(例，%)

2.2 不同病理特征肝癌患者5-HT、CRH表达水平对比

不同肿瘤直径、临床分期、转移情况、门静脉癌栓、组织学分化患者5-HT、CRH表达阳性率对比差异有统计学意义(P<0.05)，不同病理类型、性别、年龄患者5-HT、CRH表达阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 不同病理特征肝癌患者5-HT、CRH表达水平对比(例，%)

2.3 相关性分析

在880例患者中，Pearson相关分析显示：5-HT、CRH表达与肿瘤直径、临床分期、肝外转移、门静脉癌栓、组织学分化都存在相关性(P<0.05)，见表3。

2.4 影响因素分析

在880例患者中，以5-HT、CRH作为因变量，以肿瘤直径、临床分期、肝外转移、门静脉癌栓、组织学分化作为自变量，Logistic回归分析显示：临床分期、肝外转移、门静脉癌栓为影响5-HT、CRH表达的主要因素(P<0.05)，见表4与表5。

表4 影响肝癌患者5-HT表达的病理特征多因素分析(n=880)

表5 影响肝癌患者CRH表达的病理特征多因素分析(n=880)

3 讨论

肝癌是目前全球第二大癌症死亡原因，以肝细胞癌和肝内胆管癌最为常见。由于肝癌发病较为隐匿，多数患者在确诊时已属中晚期，具有恶性程度高、侵袭性强、死亡率高等特点，也丧失了手术根治的最佳时机[8]。有研究显示中晚期肝癌5年生存率仅为10～20个月，并且由于放射性肝损伤、抗肿瘤药物不良反应、肿瘤耐药性等多种问题的存在，肝癌的非手术治疗的效果也一直不佳[9]。

肝癌的发生发展是1个复杂过程，是多种生长因子参与、多种信号传导通路的过程，完整的信号传导通路包括调节细胞凋亡、入侵和血管生成等，通路受到中断则可能导致肝癌的发生[10-11]。有研究表明肝癌的发生与神经-内分泌-免疫网络失调有关，而5-HT是该网络的重要因子之一[12]。生理状态下机体内存在一定的5-HT，以维持肝脏正常的运动和分泌功能；而在肝脏压力增加、过敏反应、十二指肠酸化、迷走神经刺激等刺激下可导致细胞释放更多的5-HT。5-HT受体广泛分布于肠道及中枢，5-HT及能与其受体结合的配体介导不同的病理生理过程，可通过感知外周及中枢途径调节肝脏的运动、分泌和感觉，从而调节肝脏功能。CRH可参与炎症和肿瘤的发生和发展，能够调节两种PLA2的表达，即钙离子非依赖型磷脂酶A2和胞质型磷脂酶A2的表达，进而影响恶性肿瘤的增殖与迁移[13]。本研究显示病灶组的5-HT、CRH表达阳性率为分别为70.9%和20.0%，癌旁组分别为15.5%和60.9%，对比差异都有统计学意义(P<0.05)，表明肝癌患者多伴随有5-HT的高表达与CRH的低表达。

中晚期肝癌患者由于癌细胞转移、肝外转移、门静脉癌栓、肿瘤体积、数目等原因，已不适合或不能耐受手术，导致预后一直比较差。5-HT可激活内源性初级感觉神经及外在性初级感觉神经，借助不同的5-HT受体亚型激活不同的神经-内源性感觉，从而诱导肝癌的发生[14]。正常肝细胞中5-HT表达较低，并起到调控细胞有丝分裂，促进细胞凋亡的作用；当5-HT表达增加时，恶性肿瘤细胞的有丝分裂增加，凋亡降低，使得肿瘤恶性程度增加[15]。当前也有研究表明CRH可能属于抑癌基因，可能是通过间接作用，从而对恶性肿瘤的发生产生抑制作用[16]。本研究显示Pearson相关分析显示肝癌患者的5-HT、CRH表达与肿瘤直径、临床分期、肝外转移、门静脉癌栓、组织学分化都存在相关性(P<0.05)；Logistic回归分析分析显示临床分期、肝外转移、门静脉癌栓为影响肝癌患者5-HT、CRH表达的主要因素(P<0.05)，表明5-HT、CRH在肝癌中的表达与病理特征存在显著相关性。本研究也存在一定的不足，纳入的病例数量较少，病理特征分析指标也比较少，且只进行了免疫组化分析，将在后续研究中深入探讨。

总之，肝癌患者多伴随有5-HT的高表达与CRH的低表达，临床分期、肝外转移、门静脉癌栓为影响肝癌患者5-HT、CRH表达的主要因素。