自噬相关基因Beclin1与乳腺癌病理相关性分析

邹华伟 陈澎涛 刘 洋

乳腺癌发病率逐年升高，以成为我国女性最好发的肿瘤。当前乳腺癌发病的原因与乳腺癌家族史和易感基因、放射线环境、高脂肪饮食以及体内的雌激素水平等有着很大关系。其并发症多、危险性大，预后差，早期临床症状并不明显，大多数病人出现乳房皮肤改变、引流区淋巴结肿大时已是疾病晚期[1-3]。因此，需要更多分子生物学指标来判断乳腺癌患者对不同治疗的反应及恶性程度。Beclin1是在哺乳动物之中发现和自噬相关的1种遗爱基因，它可以激活细胞程序性死亡过程并调节自噬活性。相关研究表明[4-6]，Beclin1能够抑制肿瘤发展和发生，对于乳腺癌患者的病情恶化程度有着重要价值。因此，本文选取我院收治的120例乳腺癌患者作为研究对象，具体报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取我院2015年6月至2020年6月共收治的120例乳腺癌患者作为研究对象，将其分为研究组，所有患者均行手术或空心针穿刺病理证实为乳腺癌，另取同期120例良性乳腺肿瘤患者作为对照组。两组患者一般资料如下所示，见表 1。

表1 两组患者一般资料对比分析

1.2 入选标准与排除标准

入选标准：临床资料与病理资料完整，患者治疗依从性好；术后依照乳腺癌诊疗规范并依照病情进行相应的治疗；沟通手术后的病理诊断确诊为乳腺癌患者；在术前未经免疫治疗、化疗以及放疗等；无手术禁忌症，具备手术指征；所有患者对本研究知情并签署知情同意书。

排除标准：临床资料不全；严重器官功能不全；不愿意接受病理检查的患者；孕妇或者哺乳期妇女；合并其他恶性肿瘤患者；合并精神类疾病或认知障碍患者。

1.3 方法

免疫组织化学法：将收集的标本在冰上进行石蜡包埋，注意尽量将所有组织覆盖，然后放入-20℃冰箱20～30 min，设置切片机3 μm，连续切片，认真选取形态较好、组织完整的切片放到35 ℃温水中，等到切片完全展平后收于防脱载玻片上，晾干后置于玻片架上，放入烤箱，调节烤箱温度为65 ℃，烘烤2 h。

总RNA提取：从零下80 ℃的冰箱中取出不同类型的乳腺癌组织，将100 mg组织放入研钵之中加入氮液研磨，最后磨成粉末，加入BufferRLT 1 ml进行反复的吹打，让样品能够充分的裂解，并在室温5 min等待核酸蛋白复合物分离，之后按照说明严格步骤提取RNA，并进行逆转录合成cDNA。

免疫组化结果判定：应用半定量计分法，细胞核内和细胞质出现棕黄色颗粒，判定为阳性。并依照切片之中细胞染色强度与阳性细胞总数分析。其中阳性着色重度为3分，中度为2分，轻度为1分，背景清晰无色为0分。阳性细胞数量>75%为3分，25%～75%为2分，<25%为1分。总分计3～6分为阳性[7]。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 三组患者自噬相关基因Beclin1mRNA表达水平

通过对比三组中自噬相关基因Beclin1mRNA表达水平发现，良性组和恶性组均显著低于对照组，且恶性组显著低于良性组，对比差异显著(P<0.05)，见表2。

表2 三组患者自噬相关基因Beclin1mRNA表达水平

2.2 三组患者自噬相关基因Beclin1蛋白表达阳性率

通过对比三组自噬相关基因Beclin1蛋白表达阳性率发现，良性组阳性率为60.00%，恶性组阳性率为26.67%，对照组阳性率为91.67%，对比差异显著(P<0.05)，见表3。

表3 三组患者自噬相关基因Beclin1蛋白表达阳性率(例，%)

2.3 120例乳腺癌患者Beclin1阳性与阴性患者临床病理特征对比分析

120例乳腺癌患者中，Beclin1阳性与Beclin1阴性患者月经状态、年龄、肿瘤大小对比无明显差异(P>0.05)，两组患者的临床分期、淋巴结转移、组织分化程度对比差异显著(P<0.05)，如表4所示。

表4 120例乳腺癌患者Beclin1阳性与阴性患者临床病理特征对比分析/例

2.4 自噬相关基因Beclin1与乳腺癌病理相关性分析

Spearman相关分析显示，月经状态、年龄、肿瘤大小与自噬相关基因Beclin1不相关(P>0.05)，临床分期、淋巴结转移和组织分化程度与自噬相关基因Beclin1呈负相关(P<0.05)，如表5所示。

表5 自噬相关基因Beclin1与乳腺癌病理相关性分析

3 讨论

自噬属于1种细胞维持自身内环境稳定的手段，一旦人体内自噬功能出现异常，可以导致细胞出现异常增生情况，严重者会出现癌变现象。因此深入了解细胞的自噬功能与肿瘤细胞的自噬功能，能够判断肿瘤患者的预后情况，并研究出针对于肿瘤治疗的有效药物。Beclin1又称BECN1基因，属于自噬启动的关键蛋白，其主要作用于细胞自噬成核时期。相关研究表明[8-10]，Beclin1表达在人类的卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌之中分别下降了75%、50%和40%。

本研究结果表明，通过对比三组中自噬相关基因Beclin1mRNA表达水平发现，良性组和恶性组均显著低于对照组，且恶性组显著低于良性组，对比差异显著(P<0.05)，相关研究表明[11]，Beclin1在膀胱癌组织之中的表达量明显低于正常膀胱组织，而且在膀胱癌的发展与发生过程中具有重要作用，与本研究相一致；通过对比三组自噬相关基因Beclin1蛋白表达阳性率发现，良性组的阳性率为60.00%，恶性组患者的阳性率为26.67%，对照组的阳性率为91.67%，对比差异显著(P<0.05)，由此证明，Beclin1在乳腺癌患者的阳性表达患者少于良性肿瘤组织和健康者，Beclin1的表达水平也就越低。由此可推测，Beclin1在乳腺细胞发生病变开始，会出现功能缺陷，这可能是因为肿瘤细胞的其他抑癌基因出现相互作用，从而导致Beclin1表达出现异常，对细胞的自噬功能产生抑制作用，从而导致其细胞恶性开始增殖，具体生物学通路还需要更多的细胞学实验和动物实验进行验证[12-14]；120例乳腺癌患者中，Beclin1阳性与Beclin1阴性患者月经状态、年龄、肿瘤大小对比无明显差异(P>0.05)，两组患者的临床分期、淋巴结转移、组织分化程度对比差异显著(P<0.05)；Spearman相关分析显示，月经状态、年龄、肿瘤大小与自噬相关基因Beclin1不相关(P>0.05)，临床分期、淋巴结转移和组织分化程度与自噬相关基因Beclin1呈负相关(P<0.05)，临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移以及肿瘤分化程度是体现肿瘤恶性程度的临床病理指标，对于乳腺癌患者具有重要的预测作用，因此本文以这三个指标来分析Beclin1和病理相关性。陈小林等[15]对上皮性卵巢癌组织中Beclin1表达及相关性研究发现，患者的临床分期、淋巴结转移情况与其明显相关，与本研究相符。

总而言之，自噬相关基因Beclin1在乳腺癌患者的癌组织中表达低于良性肿瘤患者和健康人士，随着患者病情加重，自噬相关基因Beclin1表达明显降低，Beclin1与乳腺癌患者的临床分期、淋巴结转移和组织分化程度呈负相关，因此可以应用自噬相关基因Beclin1来判断乳腺癌患者病情的严重程度。