PDCD5、NRP1表达与NSCLC患者化疗效果及预后的关系

付 群

肿瘤调控蛋白的改变，能够在NSCLC的发生或者病情进展过程中发挥作用。程序化死亡因子5(PDCD5)是凋亡诱导相关蛋白，能够通过诱导程序性凋亡因子的激活，促进癌细胞的凋亡，最终促进肿瘤病灶的萎缩[1]；神经纤毛蛋白1(NRP1)是基因调控相关因子，能够通过提高癌细胞的变形和浸润能力，促进肿瘤细胞的异常增殖，加剧癌细胞的上皮-间质浸润和转移过程[2]。本次研究主要探讨PDCD5、NRP1的表达与NSCLC患者的病情及治疗结局的关系，为临床上NSCLC的诊疗及临床预后预测提供参考。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月到2018年11月在我院治疗的NSCLC患者102例作为NSCLC组，纳入标准：①均经病理学确诊；②临床分期为Ⅲ～Ⅳ期；③ECOG功能状态评分0～2分；④具有客观测量的病灶；⑤在我院接受以顺铂为基础的化疗方案；⑥临床随访资料完整。排除标准：①非初治患者；②合并有其他系统恶性肿瘤；③组织获取前有放化疗等抗肿瘤治疗。同时选取正常肺组织50例作为对照组。NSCLC组男性62例、女性40例，平均年龄(54.49±9.28)岁；对照组男性30例、女性20例，平均年龄(53.17±10.00)岁。2组性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 实验方法

采用石蜡切片，脱水操作后采用3%H2O2室温条件下孵育20 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，磷酸盐缓冲液稀释后的山羊血清封闭抗体5 min，倒去血清后不清洗，加入一抗(购自赛默飞世尔中国，浓度：1∶1000)5 ml，37 ℃孵育2 h，或者放置4 ℃冰箱过夜孵育，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入生物素荧光标记的二抗(购自赛默飞世尔中国，浓度：1∶2000)3 ml，37 ℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，加入Streptavidin/HRP辣根酶标记链霉卵白素，37 ℃孵育20～30 min，磷酸盐缓冲液清洗3次，每次5 min，增强型HRP-DAB底物显色试剂盒 (PA110)显色，自来水冲洗，复染，封片。

1.3 化疗方法

吉西他滨化疗，1 000 mg/m2，第1、8天；顺铂注射液，20 mg/m2，第1～5天，连续治疗28 d为1个周期，连续治疗3个周期。

1.4 疗效判断

治疗2个周期后，依据RECIST1.1实体瘤疗效评价标准[3]，完全缓解(CR)为病灶消失，且至少维持4周；部分缓解(PR)为病灶最大径之和减少≥30%，至少维持4周；疾病稳定(SD)为病灶最大径之和减小未达到PR或增大未达到PD；疾病进展(PD)的病灶最大径之和增加≥20%或出现新病灶。治疗有效=CR+PR。

1.5 免疫组化染色结果判断标准

在高倍镜下，对每张切片随机选取5个视野，每个视野计数20个，共计100个，对染色强度和阳性细胞比例进行评价，染色强度：无着色为0分，淡黄色为1分，黄色为2分，棕褐色为3分，阳性细胞比例：≤10%为0分，>10%～25%为1分，>25%～50%为2分，>50%～75%为3分，>75%为4分。染色强度和阳性细胞比例得分之和≥3分为阳性表达。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 NSCLC组和对照组PDCD5、NRP1表达比较

NSCLC组PDCD5阳性表达率明显低于对照组(P<0.05)，而NRP1阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 NSCLC组和对照组PDCD5、NRP1表达比较(例，%)

2.2 PDCD5、NRP1表达与NSCLC临床病理特征关系

TNM分期Ⅳ期、中低分化患者PDCD5阳性表达率明显低于Ⅲ期和高分化患者(P<0.05)；腺癌、TNM分期Ⅳ期患者NRP1阳性表达率明显高于鳞癌、Ⅲ期患者(P<0.05)。见表2。

表2 PDCD5、NRP1表达与临床病理特征关系(例，%)

2.3 化疗有效和无效患者PDCD5、NRP1表达率比较

化疗有效患者PDCD5阳性表达率明显高于无效患者(P<0.05)，而NRP1阳性表达率明显低于无效患者(P<0.05)。见表3。

表3 化疗有效和无效患者PDCD5、NRP1表达率比较(例，%)

2.4 PDCD5、NRP1表达与预后的关系

PDCD5阳性表达患者中位总生存时间为22个月(95%CI：21.07～22.93)，明显高于PDCD5阴性表达患者的12个月(95%CI：21.07～22.93)，差异比较有统计学意义(χ2=36.716，P<0.05)；NRP1阳性表达患者中位总生存时间为12个月(95%CI：16.74～21.27)，明显低于NRP1阴性表达患者的19个月(95%CI：16.74～21.27)，差异比较有统计学意义(χ2=33.327，P<0.05)；见图1。

图1 生存曲线

3 讨论

不同内外因素导致的肺泡上皮细胞的异常病变，都会提高癌细胞的早期发生风险，同时在癌基因突变或者合并其他高危因素的群体中，NSCLC的发病率可持续上升[4]。临床上的观察分析发现，NSCLC患者的5年生存率或者3年生存率均显著下降，NSCLC的致残率明显上升[5]。辅助化疗能够在NSCLC的整体性治疗过程中发挥作用，通过静脉化疗能够显著促进肺癌肿瘤病灶的萎缩，改善NSCLC患者的高肿瘤临床负荷。但现阶段缺乏对于NSCLC临床预后评估的重要方式，影像学检查能够在NSCLC的诊疗过程中发挥作用，但影像学检查评估NSCLC的滞后性较为明显，其对于肺癌患者临床预后评估的可参考性较低。血清糖链蛋白199或者其他上皮糖链蛋白，能够在NSCLC的临床预后转归评估中发挥作用，但糖链蛋白199或者癌胚抗原等评估NSCLC临床预后或者化疗效果的符合率较低，同时癌胚抗原等指标检测的稳定性较差，检测的干扰因素较多。

PDCD5是程序性凋亡相关因子，主要表达于肿瘤细胞间质组织、内皮组织及神经未分化组织中。PDCD5蛋白结构上含有的可结合的脯氨酸结合区域，能够通过影响到癌细胞转录上游启动子的激活，最终促进癌细胞的凋亡[6]；NRP1是癌细胞生物学行为调控因子，能够影响到癌细胞的变形能力，促进癌细胞浸润和粘附能力的改变[7]。有部分研究者探讨了PDCD5在肺癌患者中的表达情况，认为在肺癌患者中，PDCD5蛋白的表达阳性率明显下降[8]，但对于PDCD5、NRP1的表达与肺癌化疗效果的关系分析不足。

本次研究通过对肺癌患者病灶组织中PDCD5、NRP1的分析，可以发现在NSCLC患者病灶组织中，PDCD5蛋白的阳性表达率明显下降，而NRP1蛋白的阳性表达率明显上升，PDCD5、NRP1的异常表达趋势提示二者可能在NSCLC的病情进展过程中发挥了重要作用。之所以存在PDCD5、NRP1的差异性表达，主要由于肺癌腺体上皮癌细胞肿瘤微环境的改变，影响到了肿瘤细胞的转录、凋亡及增殖调控过程，导致血管调控蛋白分泌的紊乱[9]。有其他研究者也发现，在肺癌患者病灶组织中，NRP1蛋白的阳性表达率可超过40%以上，在非小细胞肺癌患者中，NRP1蛋白的阳性表达率可随着非小细胞肺癌临床结局的恶化而上升[10]。在临床分期较晚或者癌细胞分化程度较差的肺癌中，PDCD5蛋白的阳性表达率较低，提示了PDCD5蛋白的表达缺失能够影响到肺癌患者的临床病理特征的进展。这主要由于PDCD5蛋白的下降，失去了对于癌细胞凋亡蛋白BCL或者BAX的诱导作用，导致肺癌细胞凋亡比例的下降，促进了癌细胞的浸润和转移进展。在腺癌或者临床分期较晚的患者中，NRP1蛋白的阳性表达率较高，提示了NRP1蛋白能够显著影响到肺癌患者临床病理特征的进展。这主要由于NRP1蛋白的表达上升，能够影响到癌细胞内信号通路MAPK的激活，促进了癌细胞浸润范围的增加，进而导致临床分期的进展。在化疗有效的患者中，PDCD5蛋白的阳性率较高，而NRP1的阳性率较低；在PDCD5阳性表达的患者中，肺癌患者的中位生存时间较长，而NRP1阳性表达的患者，其中位生存时间较短，提示了PDCD5的阳性表达能够改善肺癌患者的临床结局，而NRP1的阳性表达能够加剧肺癌临床预后的恶化。临床上可以通过检测PDCD5、NRP1蛋白，评估肺癌患者的临床预后。

NSCLC是肺癌的重要分型之一，但既往的研究往往集中分析本病的治疗方法，对本病癌细胞凋亡及生物学行为影响因子的研究较少。而本组研究的优势在于发现了PDCD5、NRP1可通过影响NSCLC癌细胞凋亡及生物学行为来参与本病发生、发展，并可一定程度上提示患者病情、治疗疗效及预后。

综上所述，NSCLC患者PDCD5表达降低，而NRP1表达升高，与病理类型、TNM分期及分化程度有一定关系，同时对化疗疗效和预后有一定影响。