PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素在胃癌患者组织中的表达及作用研究

李 明，徐光辉，杨利萍，李 汀，宋 巍

1.西安市第四医院消化内科，陕西 西安710004；2.空军军医大学西京消化病医院

胃癌是一种严重威胁人类健康的疾病，其发病率及死亡率均居世界前4位，且有日益年轻化趋势，它的发生发展及分子机制较复杂[1]。原钙黏蛋白10(PCDH10)是一种表达于细胞膜表面的钙黏蛋白，主要在细胞与细胞之间的黏附中起调节作用，还可在细胞间起信号传导作用[2]。多项研究[3-5]表明，PCDH10基因的甲基化改变在结直肠癌、子宫内膜腺癌、肾癌等肿瘤的发生发展中起重要作用。因此可将其作为检测胃癌患者的一种辅助指标，可在淋巴结转移情况不明时起到辅助判断患者预后的作用。Neuritin是神经营养因子家族中一种小分子物质，在神经突起的生长、成熟及神经系统损伤中起重要作用。有研究[6]表明，Neuritin不仅在神经系统中表达，还在肿瘤组织中高表达，并且参与了肿瘤的进展。E-钙黏附素(E-cadherin)是细胞黏附分子家族中一种重要的钙依赖性黏附分子，主要存在于上皮细胞，可促使细胞与细胞、细胞与外基质间发生黏附，对维持组织结构稳定性、调节细胞运动具有重要作用。近年来有研究发现，其表达水平的高低与肿瘤的恶性程度有关[7]。孙硕彤等[8]研究表明，与正常胃组织相比，胃癌组织中CD44V6、E-钙黏附素表达差异较大，二者对胃癌细胞的转移及发展具有一定的作用。因此，本研究拟将PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素三者联合起来检测其在胃癌患者组织中的表达情况，为临床上筛查胃癌患者提供新的方向。

1 资料与方法

1.1 一般资料研究对象：选取2017年1月至2019年11月西安市第四医院手术后胃癌组织标本和癌旁组织标本各80例，胃癌组织中男45例，女35例，年龄(52.6±2.5)岁(38～78岁)，TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期：30例，Ⅲ～Ⅳ期：50例，癌旁组织中男50例，女30例，年龄(55.6±2.7)岁(35～80岁)，TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期：30例，Ⅲ～Ⅳ期：50例。两组患者在性别、年龄、TNM分期等资料中对比，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

纳入标准：均经胃镜检查，手术病理确诊为胃癌，无放化疗史。排除标准：胃癌患者伴有急性感染者；精神病患者；重大器官损伤患者；伴有自身免疫性疾病患者。

1.2 方法使用免疫组化染色及其试剂盒[厂家：齐一生物科技(上海)有限公司；货号：QY-H12005]检测PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素阳性表达。将二甲苯放置10 min后进行酒精水化，加入蛋白酶修复液，进行孵化30 min，温度为37 ℃，弃抗原；将切片移至湿盒中，加入3% H2O2，恒温冰箱孵育10 min，使用PBS冲洗；加入山羊血清，常温下封闭30 min，使用滤纸将封闭液吸取，加入PCDH10(厂家：圣克鲁斯生物技术公司；克隆号：57575；订购目录号：sc-405603)、Neuritin(厂家：圣克鲁斯生物技术公司；克隆号：51299；订购目录号：sc-402412)、E-钙黏附素蛋白抗体(厂家：广州健仑生物科技有限公司；克隆号：EP700Y；订购目录号：OB101)，置入湿盒，孵育1 h，进行PBS冲洗，经过DAB显色处理10 min，观察棕黄色阳性反应，采用PBS冲洗1 min；使用苏木精染色3 min，自来水冲洗1 min，脱水、封片处理。

2 结果

2.1 不同组织PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素的表达

癌旁组织PCDH10表达高于胃癌组织，而Neuritin、E-钙黏附素表达低于胃癌组织，且从其免疫组化染色可见，在胃癌组织中，PCDH10在细胞膜的表达低于癌旁组织，而Neuritin、E-钙黏附素在细胞质和细胞膜中的表达均高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1、图1)。

表1 不同组织PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素的表达比较Tab 1 Comparison of expressions of PCDH10,Neuritin and E-cadherin in different tissues %)

图1 不同组织PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素免疫组化染色图(放大400倍) Fig 1 Immunohistochemical staining of PCDH10,Neuritin,E-cadherin in different tissues

2.2 不同胃癌分期PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素的表达Ⅲ～Ⅳ期PCDH10表达低于Ⅰ～Ⅱ期，Neuritin、E-钙黏附素表达高于Ⅰ～Ⅱ期，两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)(见表2)。

表2 不同胃癌分期PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素的表达比较Tab 2 Comparison of expressions of PCDH10,Neuritin and E-cadherin in different stages of gastric cancer %)

2.3 有无淋巴结转移时PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素的表达胃癌患者中，淋巴结转移者47例，无淋巴结转移者33例。结果表明，淋巴结转移者PCDH10表达低于无淋巴结转移者，而Neuritin、E-钙黏附素表达却高于无淋巴结转移者，差异有统计学意义(P<0.05)(见表3)。

表3 有无淋巴结转移时PCDH10、Neuritin、E-钙黏附素的表达比较Tab 3 Comparison of expressions of PCDH10,Neuritin and E-cadherin with or without lymph node metastasis %)

3 讨论

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率、患病率居肿瘤疾病第三位和第二位[9]，在其发展过程中，癌细胞的不断浸润生长及上皮间质转化是影响疾病预后的重要环节。早期患者可无明显症状或仅有上腹部不适，易被忽视，发现时已多处于中晚期，故发现及筛查早期胃癌患者对后续肿瘤治疗及预后具有重要意义。崔金朵等[10]研究表明，肿瘤浸润深度、脉管累及和分化类型是早期胃癌患者淋巴结转移的独立危险因素，对于淋巴结转移高风险患者应密切随访，必要时及时追加外科手术。

洪莲莲等[11]研究发现，PCDH10在胃癌组织中表达下调，与肿瘤发生进展及患者预后相关。田浩等[12]研究表明，PCDH10在胃癌组织中低表达，并与肿瘤TNM分期、有无淋巴结转移有关，且PCDH10可影响肿瘤信号通路的激活，抑制癌基因的活性，并能稳定肿瘤细胞的周期，抑制肿瘤的发生及进展；林莹等[13]研究也表明，PCDH10高表达时，其TNM分期多较早，预后也较好。本研究显示，癌旁组织PCDH10表达高于胃癌组织，说明PCDH10能够作为检测胃癌的指标之一；而Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者PCDH10表达低于Ⅰ～Ⅱ期，说明PCDH10表达与疾病的进展严重程度有关。蔡云鹏等[14]研究表明，Neuritin蛋白在脑损伤组织中表达明显增高，提示其可能在脑损伤后修复中起着重要作用；而张建庆等[15]研究表明，Neuritin可能作为非小细胞肺癌(NSCLC)潜在的生物标志物，在NSCLC的发生发展中发挥一定的生物学功能；童莹等[16]研究发现，Neuritin蛋白在NSCLC及其癌旁组织中均有表达，但在肿瘤组织中呈高表达状态，并且与其分化程度、大小、基因突变等均有关，进而说明其表达水平与NSCLC的发生发展有关。Neuritin的高表达可能通过Notch信号通路进而激活胃癌细胞的增殖，但其是否能通过Notch信号通路切实影响胃癌的侵袭和转移，还需进一步研究[17]。本研究显示，癌旁组织Neuritin表达较低，与胃癌组织的表达相比其差异有统计学意义，说明Neuritin表达水平与不同组织有关，并且Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者Neuritin表达高于Ⅰ～Ⅱ期，说明Neuritin表达与肿瘤TNM分期成正比，即病症越严重，分级越晚，其表达越高；此外，我们也发现有淋巴结转移者Neuritin表达高于无淋巴结转移者，说明Neuritin的表达与淋巴结转移亦呈正相关。E-钙黏附素是钙黏附素家族中的一员。近年来对它的研究显示：其在多种癌细胞及癌组织中表达下降，但在胃癌中呈高表达[18-19]。本研究显示：胃癌组织E-钙黏附素表达高于癌旁组织，即癌旁组织低表达，提示其表达水平能够作为检测胃癌的指标。Bure等[20]研究表明，E-钙黏附素参与多种致癌信号途径，如Wnt/β-catenin、Rho-GTPase和EGF/EGFR，从而于包括胃癌在内的许多肿瘤中发挥作用；Chen等[21]研究表明，原钙黏蛋白7可作为胃癌诊断和预后的新生物标志物。此外，我们还发现Ⅲ～Ⅳ期胃癌者E-钙黏附素表达高于Ⅰ～Ⅱ期，说明E-钙黏附素表达与疾病的严重程度呈正相关；有淋巴结转移患者E-钙黏附素表达高于无淋巴结转移者，表明其表达高低程度与胃癌的浸润转移也呈正相关。因此可证实降低E-钙黏附素的表达能够降低肿瘤转移的发生率[22]，与本研究结果一致。

综上所述，Neuritin、E-钙黏附素在胃癌组织中高表达，而PCDH10低表达，其能够作为判断胃癌生物学行为的重要指标；将三者联合起来检测，可为临床上提高胃癌患者筛查及评估肿瘤的进展程度、判断预后提供一个新的手段。