顶空固相微萃取气质联用法分析羊耳菊花的挥发性成分

许培增，刘明娟，罗贞贵，曾雅静，蔡 伟，2，3

（1.湖南医药学院，湖南 怀化 418000；2.湖南医药学院新型抗体药物及其智能运输系统湖南省重点实验室，湖南 怀化 418000；3.湖南医药学院侗医药研究湖南省重点实验室，湖南 怀化 418000）

羊耳菊（Inula cappa）属菊科羊耳菊属植物，广泛分布于湖南、广西、贵州、广东、印度、越南和泰国［1］，是一种重要的民族药，民间以其全草或根入药，其味辛，微苦，性平，具有祛痰定喘、活血调经及治跌打损伤等作用，可用于治疗感冒发热［2］、咽喉肿痛［3］、风湿肿痛［4］、疟疾、痢疾和肝炎［5］。羊耳菊的主要化学成分有三萜类、甾体类、黄酮类和倍半萜内酯类化合物［6-9］。目前，关于羊耳菊根和地上部分的挥发性成分研究报道较少［10，11］，未见国内外文献中有利用顶空固相微萃取法结合气质联用技术对羊耳菊花的挥发性成分进行分析的报道。因此，本研究首次采用了顶空固相微萃取气质联用法对羊耳菊花中的挥发性成分进行鉴定，为其药效物质基础研究和质量控制研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

羊耳菊于2018年10月采摘自湖南省怀化市，由湖南医药学院蔡伟副教授鉴定为羊耳菊。

1.2 仪器

75μm CAR-PDMS微萃取纤维头（美国SUPELCO公司），容积为4 mL的顶空瓶，毛细管柱（5%苯基二甲基聚硅氧烷，30 m×0.25 mm，0.25μm，Thermo Scientific，USA），Thermo ISQLT低温质谱仪（Thermo Scientific，Bremen，Germany），Thermo trace 1300气相色谱（Thermo Scientific，Bremen，Germany），质谱检索数据库NIST 17。

1.3 方法

1.3.1 挥发性成分的提取 挥发性成分通过SUPELCO公司（美国）提供的配4 mL顶空瓶和75μm CAR∕PDMS纤维的手动固相微萃取（SPME）支架提取。

1.3.2 固相微萃取条件 固体微萃取手柄首次使用前，萃取头插入至进样口中，在65℃预活化5 min后方可使用。然后，将羊耳菊花粉末（约20 mg）放入装有SPME纤维的小瓶中，在65℃下将纤维暴露在密封小瓶的上部空间30 min以吸收挥发物。最后，取出SPME纤维并直接注入气相色谱-质谱入口，用于解吸挥发性成分5 min。

1.3.3 GC-MS分析

1）色谱条件。采用TG-5MS毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25μm）。升温程序：50℃保持3 min，以2℃∕min升至100℃，保持5 min，然后以2℃∕min升至160℃，保持3 min，最后以10℃∕min升至280℃，保持5 min；载气为（纯度为99.999%）He气，柱流量1 mL∕min，分流模式下前进样口温度为300℃，分流比50∶1。

2）质谱条件。离子源：EI源；离子化能量：70 eV；离子源温度280℃；全扫描范围40～620m∕z；无溶剂延迟。

2 结果与分析

通过保留指数（RI，在相同的试验条件下计算C7-C30正构烷烃的保留时间）和MS库检索（NIST 17）对化合物进行了鉴定。羊耳菊花的挥发性成分及其含量见表1，总离子流如图1所示。

图1 高分辨提取总离子流

表1 羊耳菊的挥发性成分

由表1可知，共检测鉴定出50种化合物，占挥发性成分的86.74%。主要成分为百里酚（19.70%）、（-）-β-石竹烯（12.19%）、香芹酚（8.13%）和异丁酸百里香酯（8.13%）。百里酚又名麝香草酚，是一种单萜酚类植物源化合物，因其抗菌、抗氧化、抗炎、低毒性、安全性高等特点在食品防腐保鲜中广泛应用［12，13］。（-）-β-石竹烯有抗炎、镇痛、神经保护、抗肿瘤、防治肝损伤等生物活性，具有抗肿瘤、抗糖尿病、保护肝、防治骨质疏松、调节血脂等作用，还可以治疗类风湿性关节炎［14，15］；香芹酚具有良好的抗氧化、抗炎、抑菌等生物活性［16］。所以推测羊耳菊花中起抗炎作用的主要成分可能是百里酚、（-）-β-石竹烯和香芹酚，起镇痛作用的主要成分可能是（-）-β-石竹烯。

3 结论

羊耳菊的全草或根可供药用，有除痰定喘、活血调经及治跌打损伤等作用。对羊耳菊花的化学成分研究表明，其主要成分为三萜类、甾体类、黄酮类和倍半萜内酯类化合物。根据顶空固相微萃取气质联用法共鉴定出羊耳菊花50种化合物，该方法能快速获得其组成成分，有利于提取易挥发性化合物，可用于羊耳菊的药效物质基础和质量控制研究。