乳腺癌组织中miR218-5p、IGF-1的表达水平及其临床意义

黄方杰，黄波，张艺超，许酼敏

中国科学院大学深圳医院(光明)甲乳外科，广东 深圳 518106

乳腺癌是临床上常见的恶性肿瘤，也是女性的高发肿瘤之一，根据相关数据显示，我国每年由于乳腺癌致死的妇女约有1.3万人，且有着逐年增长的趋势[1-2]。该病常发生于乳腺上皮，当乳房某些细胞发生致病性基因突变时，细胞会不受控地增殖并导致肿瘤的形成[3-4]。细胞因子的作用在乳腺癌患者中的意义近年来也备受学者关注。目前的研究已证实，微小RNA-218-5p(miR218-5p)均参与诸多恶性肿瘤的发生和发展中，其高表达可促进细胞增殖、分化、转移等。胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的结构和胰岛素类似，近年来也有研究发现，在胃癌等较多恶性肿瘤中可检测出IGF-1的表达，与疾病的进展密切相关[5-6]，但目前关于miR218-5p、IGF-1在乳腺癌组织中的临床机制和临床意义研究较少。本文旨在探讨乳腺癌组织中miR218-5p、IGF-1表达水平的变化及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年6月至2019年8月在中国科学院大学深圳医院(光明)甲乳外科接受手术切除的120例乳腺癌组织蜡块标本作为乳腺癌组。纳入标准：①均符合乳腺癌诊断标准，并经病理组织学检查明确证实[7]，国际抗癌联盟的TNΜ分期结果为Ⅰ～Ⅳ期患者；②所有患者术前均没有接受过放化疗等治疗。排除标准：①合并其余恶性肿瘤；②合并其余重要器官功能障碍者；③合并心、脑血管系统性疾病。选择乳腺癌旁组织60例作为癌旁组，良性乳腺纤维瘤90例作为良性病变组。三组患者的基线资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性，见表1。本研究经医院医学伦理委员批准。

表1 三组一般资料比较(±s)

表1 三组一般资料比较(±s)

注：BΜI为体质量指数。

组别癌旁组良性病变组乳腺癌组F/t值P值例数60 90 120 BΜI(kg/㎡)25.70±2.16 25.68±2.50 26.40±2.13 3.019＞0.05年龄(年)45.51±3.24 46.40±3.18 45.45±3.30 2.468＞0.05病程(年)3.17±1.03 3.20±1.05 0.207＞0.05

1.2 方法

1.2.1 试剂及厂家 鼠抗人miR218-5p单克隆抗体、鼠抗人IGF-1单克隆抗体，均由于北京华夏远洋科技有限公司所提供，DAB显色试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司所提供。

1.2.2 检测方法 选择10%中性福尔马林溶液将所有的组织标本予以固定，常规进行石蜡、包埋、切片等处理，依次顺序编码；对所有组织切片采用免疫组织化学染色法予以染色处理，将PB作为阳性对照；miR218-5p、IGF-1阳性表达判定方法：主要表现为细胞质、细胞膜中出现棕褐色、黄色着色现象，选择400倍的光镜、随机5个视野，并对1 000个细胞里存在阳性染色情况的结果予以记录，阳性细胞率=(阳性表达细胞数/1 000)×100%。

1.3 统计学方法 应用SPSS18.0软件进行数据统计学分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验，计数资料以率表示，采用χ2检验，采用Spearman相关性分析法分析miR218-5p、IGF-1与TNΜ分期的相关性，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 三组标本组织中的miR218-5p、IGF-1阳性细胞表达率比较 乳腺癌组织中miR218-5p的阳性细胞表达率明显低于良性病变组和癌旁组，IGF-1的阳性细胞表达率明显高于良性病变组和癌旁组，良性病变组组织中miR218-5p阳性细胞表达率明显低于癌旁组，IGF-1的阳性细胞表达率明显高于癌旁组，组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 三组标本组织的miR218-5p、IGF-1阳性细胞表达率比较(±s，%)

表2 三组标本组织的miR218-5p、IGF-1阳性细胞表达率比较(±s，%)

注：与癌旁组比较，a P＜0.05；与良性病变组比较，b P＜0.05。

组别癌旁组良性病变组乳腺癌组F值P值例数60 90 120 miR218-5p 1.21±0.28 0.70±0.11a 0.44±0.09ab 474.945＜0.05 IGF-1 2.63±0.20 3.80±0.55a 6.51±1.10 a 556.731＜0.05 b

2.2 不同TNΜ分期患者中miR218-5p、IGF-1阳性细胞率比较 Ⅲ级和Ⅳ级乳腺癌患者miR218-5p阳性细胞率明显低于Ⅰ级和Ⅱ级乳腺癌患者，IGF-1阳性细胞率明显高于Ⅰ级和Ⅱ级乳腺癌患者，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3不同TNM分期患者中miR218-5p、IGF-1阳性细胞率比较(±s，%)

表3不同TNM分期患者中miR218-5p、IGF-1阳性细胞率比较(±s，%)

TNΜ分期Ⅰ级和Ⅱ级Ⅲ级和Ⅳ级t值P值例数78 42 miR218-5p 0.35±0.03 0.23±0.01 25.139＜0.05 IGF-1 6.90±1.34 11.85±2.12 15.644＜0.05

2.3 乳腺癌组织中miR218-5p、IGF-1与TNΜ分期的相关性 将TNΜ分期作为因变量，miR218-5p、IGF-1指标作为自变量，经Spearman相关分析结果显示，miR218-5p与TNΜ分期呈负相关(r＝-0.385，P＜0.05)，IGF-1与TNΜ分期呈正相关(r＝0.693，P＜0.05)。

2.4 miR218-5p与IGF-1表达的相关性 经Spearman相关分析结果显示，乳腺癌组织中miR218-5p与IGF-1的表达呈负相关(r＝-0.326，P＜0.05)。

3 讨论

乳腺癌大多来自乳腺腺体小叶或导管的上皮细胞，主要表现类型分为四类，包括早期浸润性癌、非浸润性癌、特殊及非特殊型浸润性癌[8]。当乳腺癌出现后，会逐渐向周围扩散，并对上皮肤和深部组织造成侵袭[9-10]。上皮肤侵袭可导致乳房皮肤发生凹陷、水肿，出现桔皮样改变，向深部组织侵袭后，可对肋骨、胸肌等造成侵犯，从而加重病情[11]。

目前的研究发现，miRNA异常表达参与着诸多恶性肿瘤的发生和发展，约有50%发生注解的miRNAs基因组可在肿瘤相关的脆性位点中发生定位，并可发挥抑癌基因和癌基因的功效[12]。miR218-5p是miRNA的常见表现形式，其对蛋白质的合成、细胞的生成、发育及凋亡等过程可发挥调控作用，其在恶性肿瘤中的表现形式可分为两种，不仅可作为抑癌基因，对恶性肿瘤的形成发挥控制效果，又可作为诱癌基因，促使恶性肿瘤的发生和发展。IGF-1的主要组成包括70个氨基酸，和胰岛素具有较高的同源性，主要的合成和分泌来自于肝脏细胞。临床上的IGF-1具有广泛的生物学活性，不仅具有类似胰岛素的代谢活性及免疫调节作用，且有助于促进细胞增殖及分化，还对细胞凋亡具有抑制作用。近年来有研究表明，早期乳腺癌患者中IGF-1指标水平呈现升高的趋势，IGF-1的表达情况与乳腺癌恶性表型密切相关。因此，IGF-1在临床中逐渐成为预测乳腺癌发生情况的生物标志物[13]。

本研究通过观察显示，和癌旁组织和良性病变组相比，乳腺癌组织中IGF-1阳性率表达情况明显更高，而miR218-5p阳性表达明显更低，通过分析是由于在乳腺癌中，①IGF-1作为生长因子可作为促细胞分裂剂，能通过调控ΜAPK和PI3K/AKT信号通路，促进细胞增殖和凋亡，转而促进肿瘤的发生[14]；②而miR218-5p在肿瘤的发展、转化过程中具有着关键调控作用，有助于对肿瘤细胞的增殖产生调节作用，抑制细胞凋亡，当miR218-5p表达的降低，其抑制细胞凋亡的能力也随之减弱，从而诱导了肿瘤的发生。在SHI等[15]试验中发现，miR218-5p通过靶向TFF1以Erk1/2依赖的方式，对胃癌患者的增殖、浸润、转移等过程发挥调节作用，通过提高其表达可能有助于抑制肿瘤进展。此外，本研究中的Spearman相关性分析结果也显示，miR218-5p、IGF-1和乳腺癌患者的肿瘤大小、分化程度、TNΜ分期、淋巴结转移、浸润程度之间均有着密切联系，且miR218-5p和IGF-1两者之间也呈现者负相关的表达结果，也进一步显示了miR218-5p、IGF-1参与了乳腺癌患者病情的发生和发展，但miR218-5p和IGF-1两者之间具体的生物学关系仍需持续探讨。

综上所述，乳腺癌患者组织中，miR218-5p表达较低，IGF-1有明显高表达，miR218-5p、IGF-1水平变化和临床病理特征有明显相关性，本研究能为乳腺癌诊断、筛查等提供了一定依据。