早期胃癌患者血清microRNA-633和microRNA-601的表达及临床价值分析

黄婷婷 彭鑫 符鑫 廖雪霞 羊明娟

早期胃癌是一种癌组织浸润仅限于粘膜层及粘膜下层的恶性肿瘤，一般无明显症状，部分患者可出现上腹隐痛、饱胀不适、食欲不振、消化不良等临床表现，易被误诊为普通胃炎而被忽视，错过最佳治疗时机[1]。因而，寻找一种早期胃癌筛查的生物学标志物对胃癌的早发现、早治疗尤为重要。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）是一类长度在21～25 nt的非编码小分子RNA，参与细胞增殖、分化、凋亡和新陈代谢等过程，在胃肠道肿瘤的发生发展中起到重要的作用[2]。近年来的研究发现，miR-633及miR-601在胃肠道肿瘤患者中异常表达，并能通过调控多种信号通路参与胃肠道肿瘤的发生发展，可能在胃肠道肿瘤的诊断、治疗和预后方面扮演重要角色[3，4]。糖类抗原72-4（carbohydrate antigen 72-4，CA72-4）及糖链抗原19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）是胃肠道肿瘤最常见的血清肿瘤标志物，在胃癌诊断及预后评估中具有一定的作用[5，6]。本研究通过检测早期胃癌血清miR-633、miR-601的表达及CA72-4、CA19-9的水平，分析其对早期胃癌的诊断价值，以期为早期胃癌的筛查提供指导。

资料与方法

1 研究对象 选取2016年1月1日～2019年12月31日儋州市人民医院收治的胃癌患者116例，其中男性80例，女性36例，年龄30～77岁，平均年龄（57.20±10.65）岁。116例胃癌的病理类型为腺癌84例，印戒细胞癌21例，粘液癌11例。纳入标准：（1）根据胃镜检查及组织病理学结果诊断为胃癌，参照WHO胃癌的病理学分类；（2）各指标检测前均未接受放疗、化疗、免疫治疗及手术切除者。排除合并其他恶性肿瘤、血液系统疾病、免疫系统疾病及严重肝肾疾病者。另选取同期50例健康体检者作为对照组，其中男性32例，女性18例，年龄35～75岁，平均年龄（58.42±10.15）岁。本研究经我院伦理委员会批准（伦理审批号：2016-1128），并与患者签署知情同意书。

2 分组方法 根据胃癌患者病情进展程度，分为早期胃癌组48例和进展期胃癌组68例，早期胃癌和进展期胃癌的诊断参考《2014版胃癌临床实践指南》[7]。早期胃癌指肿瘤局限于胃粘膜的粘膜层和粘膜下层，未突破基底膜，临床症状较轻，可出现腹部饱胀、上腹疼痛、消化不良等不适；进展期胃癌指癌组织浸润到粘膜下层，进入肌层或已穿过肌层达浆膜者，临床症状有上腹疼痛剧烈，严重者难以忍受，可有出血存在。

3 观察指标 所有研究对象均采集空腹静脉血5 mL置于未加抗凝剂的离心管中，离心分离血清，-80℃低温冰箱保存待测。在ABI 7500型荧光定量PCR仪（美国ABI公司）上进行实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）。反应体系为20 μL：TaqMan MicroRNA Assay 1.00 μL，cDNA 1.33 μL，TaqMan 2× Universal PCR Master Mix 10.00 μL，dd H2O 7.67 μL，混合后离心放入定量PCR仪。扩增条件为：95 ℃预变性10 min、95 ℃变性15 s、60 ℃复性60 s进行45个循环，实验重复3次。以U6为内参照，采用2-△△Ct法计算miR-633及miR-601的相对表达水平，其中△Ct=Ct目的基因-CtU6。另采用罗氏E411电化学发光免疫分析仪及配套试剂盒，化学发光法测定血清CA72-4及CA19-9水平。

结 果

1 各组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比较 胃癌组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.001）。见表1。

表1 各组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比较

表1 各组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比较

组别 n miR-633 miR-601 CA72-4（U/mL） CA19-9（U/mL）对照组 50 0.62±0.14 3.80±1.27 3.28±0.85 15.60±5.83胃癌组 116 1.93±0.86 9.16±2.50 30.74±7.35 51.38±12.95 t值 13.635 17.412 13.984 9.206 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2 进展期胃癌组和早期胃癌组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比较 进展期胃癌组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平均明显高于早期胃癌组和对照组，且早期胃癌组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.001）。见表2。

表2 进展期胃癌组和早期胃癌组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比较

表2 进展期胃癌组和早期胃癌组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平比较

注：与对照组比较，aP＜0.01；与早期胃癌组比较，bP＜0.01

组别 n miR-633 miR-601 CA72-4（U/mL） CA19-9（U/mL）对照组 50 0.62±0.14 3.80±1.27 3.28±0.85 15.60±5.83早期胃癌组 48 1.24±0.57a 7.15±1.96a 16.65±4.70a 36.20±10.18a进展期胃癌组 68 2.58±1.16ab 10.92±3.48ab 40.52±10.35ab 64.15±17.42ab t值 10.240 14.610 11.513 7.517 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

3 血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平对早期胃癌的诊断价值 血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平诊断早期胃癌的最佳截断值分别为1.08、6.28、12.50 U/mL、28.42 U/mL，四项联合诊断早期胃癌的曲线下面积（0.917，95%CI：0.857～0.975）明显高于单项miR-633（0.811，95%CI：0.750～0.871）、miR-601（0.842，95%CI：0.783～0.902）、CA72-4（0.820，95%CI：0.762～0.878）及CA19-9（0.725，95%CI：0.663～0.783），差异有统计学意义（Z=5.208，4.850、4.975、7.216，P＜0.05），其敏感度和特异度为95.7%和82.6%。见表3和图1。

图1 血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平诊断早期胃癌的ROC曲线

表3 血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平对早期胃癌的诊断价值

4 早期胃癌患者血清miR-633、miR-601水平与CA72-4及CA19-9的相关性 Pearson相关分析显示，早期胃癌患者血清miR-633水平与CA72-4、CA19-9均呈正相关（r=0.760，P＜0.001；r=0.712，P＜0.001），miR-601水平与CA72-4、CA19-9均呈正相关（r=0.828，P＜0.001；r=0.725，P＜0.001）。见图2。

讨 论

早期胃癌是我国最常见的消化道肿瘤之一，其临床症状不明显，发病早期易误诊和漏诊，而患者出现明显的临床症状时，多属于进展期胃癌，致使其预后差、病死率高。CA72-4及CA19-9是胃肠道肿瘤常用的血清肿瘤标志物，对晚期胃癌的诊断及预后判断具有较好的临床价值[8]，但这些肿瘤标志物在早期胃癌诊断中的敏感度较低，单项指标诊断早期胃癌的价值有限，联合应用生物学标志物可对早期胃癌的诊疗提供新的思路。miRNA是一类在转录后水平调节基因表达的非编码单链小分子RNA，参与恶性肿瘤的发生发展过程，有望成为恶性肿瘤诊断和治疗的重要靶点[9]。另有研究表明，miR-633及miR-601参与恶性肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，在肿瘤转移的调控中发挥一定作用，对恶性肿瘤的诊断、转移及预后判断等方面具有重要的价值[10，11]。

本研究显示，胃癌组血清miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9水平均明显高于对照组，提示血清miR-633及miR-601在胃癌患者中异常高表达，其可能通过发挥癌基因的作用来调节胃癌的发生发展过程。ZOU等[12]研究指出，miRNA异常表达可能影响胃黏膜上皮细胞的增殖、分化和凋亡，进而影响胃癌的发生、发展和转移，可作为胃癌诊断及靶向治疗和预后的生物标志物。YU等[13]研究发现，胃癌患者血清CA72-4及CA19-9水平高于胃良性疾病组和对照组，提示CA72-4及CA19-9水平变化与胃癌发病有关。本研究中进展期胃癌组血清miR-633及miR-601水平均明显高于早期胃癌组，分析其原因可能是进展期胃癌患者肿瘤负荷较大，肿瘤组织可释放更多具有原癌基因作用的miR-633及miR-601进入血液。这提示miR-633及miR-601与胃癌进展有关，水平升高可能会促进胃癌的病情进展。KONG等[14]研究表明，miRNA在胃癌患者中明显升高，其可能参与胃癌的发生和发展，其表达差异与肿瘤复发及淋巴结转移密切相关，是影响胃癌患者总生存率的独立预后因素。另有研究认为，miRNA表达水平与胃癌的临床分期、淋巴结转移及预后密切相关，可能是胃癌诊断、预后评估及靶向治疗的新型生物学标志物[15]。本研究应用ROC曲线分析，结果显示血清miR-633及miR-601水平对早期胃癌的诊断具有良好的价值，联合传统肿瘤标志物CA72-4及CA19-9检测有助于提高早期胃癌的诊断效能。相关分析显示，早期胃癌患者血清miR-633、miR-601水平与CA72-4及CA19-9均呈正相关，这说明miR-633、miR-601、CA72-4及CA19-9四项联合检测对早期胃癌的诊断具有重要的价值。MIN等[16]研究发现，miR-601在胃癌组织和细胞中的表达明显高于对照组，miR-601的高表达可促进胃癌的进展，与胃癌患者生存率低有关，可作为胃癌预后预测的生物学标志物。另有研究表明，miRNA表达异常与胃癌的发生和淋巴结转移有关，对早期胃癌的诊断较好，可作为检测早期胃癌的新型非侵入性生物标志物[17]。

综上所述，早期胃癌患者血清miR-633及miR-601水平明显升高，联合传统肿瘤标志物CA72-4及CA19-9检测有助于提高早期胃癌诊断的敏感度，为早期胃癌筛查提供了一种非侵入性的辅助诊断方法。但这些研究仍处于初步探索阶段，未来仍需更多的多中心、大样本的临床研究来验证。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突