探讨熊去氧胆酸胶囊原料的粉碎工艺及不同粉碎工艺对该药中有关物质体外溶出度的影响

邱科先

〔安士制药（中山）有限公司，广东 中山 528437〕

熊去氧胆酸胶囊是临床上治疗固醇性胆囊结石、胆汁淤积性肝病及胆汁返流性胃炎等疾病的常用药。我国的医药市场上有很多熊去氧胆酸类药品（大多是片剂），其药物成分与该药的原研药品之间存在一定的差异。在本世纪初，我国药监总局批准从国外进口该药的原研药品。但这类进口药品的售价较高，给患者带来较大的经济压力。为了减轻患者的负担，让更多的患者能服用到药效好、价格低、副作用小的熊去氧胆酸类药物，我公司仿照该药的原研药品优思弗胶囊对熊去氧胆酸胶囊进行了制备。在制备熊去氧胆酸胶囊的过程中，我们发现，用不同的粉碎工艺制备的熊去氧胆酸胶囊原料，其中有关物质的体外溶出度存在很大的差异[1]。在本次研究中，我们对熊去氧胆酸胶囊原料的粉碎工艺进行了探讨，并分析采用不同的粉碎工艺对该药中有关物质体外溶出度的影响。

1 制备熊去氧胆酸胶囊的实验仪器

制备熊去氧胆酸胶囊时所需要的实验仪器见表1。

表1 制备熊去氧胆酸胶囊的实验仪器及说明

2 熊去氧胆酸胶囊的处方说明、产品标准及处方工艺

2.1 熊去氧胆酸胶囊的处方说明及产品标准

熊去氧胆酸胶囊的处方说明见表2，该药的产品标准见表3

表2 熊去氧胆酸胶囊的处方说明（按1000粒计）

表3 熊去氧胆酸胶囊的产品标准

2.2 熊去氧胆酸胶囊的处方工艺

取300 g制备熊去氧胆酸胶囊的原料，将其分成10份，分别用高速万能粉碎机、锤式粉碎机、低温粉碎机、行星式球磨机、气流粉碎机五种粉碎机对其进行粉碎处理[2]。处理完毕后，将其中有关物质合格的原料与处方填充剂均匀地混合在一起，然后加入黏合剂进行制粒[3]。制粒完成后，在60℃的环境下对制备好的药物进行干燥处理。最后，将经过干燥处理的药物灌装成胶囊，并进行包装。

3 对用不同粉碎工艺制备的熊去氧胆酸胶囊原料中的有关物质进行检测

3.1 进行波长检测

严格按照处方取用熊去氧胆酸对照品，并用甲醇将其制备成浓度为3 mg/mL的溶液。用紫外分光光度计（UV）对所得的溶液进行扫描，扫描的波长为200～400 nm。由于熊去氧胆酸的最大吸收波段为205 nm，故该波长被看作高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）的检测波长[4]。

3.2 进行溶液配制

严格按照处方配制系统适用性溶液、胆酸对照品溶液、7-酮基胆石酸对照品溶液、鹅去氧胆酸对照品溶液、胆石酸对照品溶液、其他杂质对照品溶液和供试品溶液。

3.3 确定色谱条件及进行系统适用性试验

用Luna C18色谱柱，用乙腈-0.001 mol·L-1为流动相，流速为1.0 mL·min-1，柱温为40℃，检测波长为205 nm，进样量为30μl。取系统适用性溶液，按以上的色谱条件进样。

3.4 进行有关物质测定

取供试品溶液和有关物质的对照品溶液，在上述的色谱条件下进行测定。有关物质的选用标准为：胆酸含量在0.5%以下，7-酮基胆石酸含量在0.4%以下，鹅去氧胆酸含量在1.0%以下，胆石酸含量在0.1%以下[5]。在供试品溶液中，除上述物质以外，其他杂质的总量在0.5%以下。详见表4。

表4 用不同粉碎工艺制备的熊去氧胆酸胶囊原料中有关物质的检测结果

由表4可知，在处理制备熊去氧胆酸胶囊的原料时，将高速万能粉碎机、锤式粉碎机、低温粉碎机的工作时间分别设定为1 min、3 min、7 min，会导致所得物中的有关物质中的总杂增加明显。用行星式球磨机、气流粉碎机进行处理时，所得物中有关物质的含量变化不大[6]。因此，在本次研究中，仅将用行星式球磨机和气流粉碎机处理的熊去氧胆酸胶囊原料用于该药的制备，并对熊去氧胆酸胶囊原料中有关物质的体外溶出度进行评价。

4 对熊去氧胆酸胶囊原料中有关物质的体外溶出度进行评价

4.1 色谱条件

取空白溶出介质和自制的熊去氧胆酸溶出液，分别进样，并记录色谱。

4.2 线性范围

取熊去氧胆酸胶囊原料，严格按照要求用溶出介质将其溶解制备成不同浓度的溶液，然后按照上述的色谱条件（见3.3）对溶液进行测定，得出在0.01～0.50 mg/mL的浓度范围内，熊去氧胆酸的线性关系良好。

4.3 进行精密度试验、重复性试验、稳定性试验和回收率试验

严格按照规定对熊去氧胆酸溶液进行精密度试验、重复性试验、稳定性试验和回收率试验。检验仪器的精密度、按照上述色谱条件进样测定的重复性、稳定性、熊去氧胆酸的回收率，以确保检测的有效性。

4.4 溶出介质的选择

参照原研药品优思弗的质量标准，选用pH为7.5的磷酸盐缓冲液（PSB）作为溶出介质。熊去氧胆酸在该缓冲液中的溶解度为0.992 mg/mL，溶出介质的体积为900 mL，符合熊去氧胆酸的漏槽条件。

4.5 溶出度的测定

取适量的熊去氧胆酸胶囊原料，按照我国药典中规定的溶出测定法，以900 mL pH为7.5的PSB作为溶出介质，然后在6个时间点提取溶液（见表5），每次提取5 mL，并进行0.45 μm的过滤，然后将续溶液作为供试品溶液。严格按照要求取熊去氧胆酸对照品溶液，向其中加入氢氧化钠溶液进行溶解，并用pH为7.5的PSB溶解液进行稀释。稀释后，每1 mL的溶液中含有0.28 mg的对照品溶液。分别选取50μL的上述两种溶液，按照上述的色谱条件（见3.3）进样测定，并用外标法以峰面积计算累计的溶出度。

表5 用不同的粉碎工艺制备的熊去氧胆酸胶囊体外溶出度的对比

由表5可知，用不同的粉碎工艺得到的熊去氧胆酸胶囊原料粒径存在很大的差异。用行星式球磨机粉碎3 min、5 min、用气流粉碎机粉碎所得的熊去氧胆酸胶囊原料制成的药品，其中有关物质的体外溶出度基本符合原研药品的标准。其中，用以行星式球磨机粉碎3 min所得的熊去氧胆酸胶囊原料制成的药品，其体外溶出度与原研药品的拟合度最高。因此，该工艺是熊去氧胆酸胶囊原料最佳的处理工艺[7]。气流粉碎方式也基本上可以达到相似结果，但效率相对低一些。

4.6 粒径

利用马尔文2000激光粒度仪分别对熊去氧胆酸的普通原料药、粉碎原料、参比品、研制品及稳定性样品的晶型进行研究，结果显示，其原料药、研制品与参比品的晶形、粒径一致。下图附普通原料和微粉原料粒度分布检测部分结果

原料批号 粒度分布测定结果(µm)批号 d（0.1） d（0.5） d（0.9）X12006，普通原料 3.865 20.812 82.578 D19001 0.816 5.214 20.501 D19002 0.844 5.296 20.537

4.7 晶型

应用《中华人民共和国药典》（2015年版四部）中0451 X射线粉末衍射法第二法中的粉末X射线衍射法，分别对熊去氧胆酸的原料药、研制品、参比制剂的晶型进行研究，结果显示，熊去氧胆酸的原料药、研制品和参比制剂的晶型一致。参比制剂的批号为18B01832L，研制品的批号为G00119R。

4.8 一致性评价

参照日本橙皮书设定的熊去氧胆酸的溶出条件、BP2016熊去氧胆酸胶囊的质量标准及优思弗质量标准中的溶出条件，得出溶出介质条件。设定取样的时间点、测定方法，得出熊去氧胆酸胶囊自制品与市售原研药品优思弗在四种介质中溶出度的测定结果。详见表6。

表6 熊去氧胆酸胶囊自制品与市售原研药品优思弗在四种介质中溶出度的测定结果

由表6可知，熊去氧胆酸胶囊自制品与原研药品优思弗在四种不同溶出介质中的F2因子均大于50（其中有两个介质溶出太低，不计算F2），表明这两种药品的溶出曲线具有很高的相似性，其体外溶出行为基本一致。

5 讨论

熊去氧胆酸胶囊原料的粉碎工艺是仿制其原研药品优思弗的关键。而且，用不同的粉碎工艺对熊去氧胆酸胶囊的原料进行处理后，所得物中有关物质的含量存在较大的差异。用球磨机、气流粉碎机等较为温和的粉碎工艺对熊去氧胆酸胶囊原料进行处理后，所得物中有关物质增加的幅度较小，基本符合规定的标准。用高速万能粉碎机等粉碎工艺对熊去氧胆酸胶囊原料进行处理后，由于粉碎的方式较为剧烈，所得物中有关物质的含量有时规定的标准[8]。

用相同的粉碎工艺（如行星式球磨机粉碎工艺）对熊去氧胆酸胶囊的原料进行处理时，设定的粉碎时间不同，所得物中有关物质的平均粒径、分布宽度均存在明显的差异[9]。因此，在本次研究中，我们着重对用球磨机和气流粉碎机这两种粉碎工艺处理的熊去氧胆酸胶囊原料，用四种介质进行溶出度的测定。对熊去氧胆酸胶囊自制品与市售原研药品优思弗在四种介质中的溶出度进行一致性评价的结果表明，用行星式球磨机粉碎3 min的工艺所得的熊去氧胆酸胶囊原料配制而成的熊去氧胆酸胶囊，其中有关物质的体外溶出度与由德国福克制药公司生产的原研药品优思弗相一致。这说明，该工艺是熊去氧胆酸胶囊原料最佳的粉碎工艺，用该工艺可制备出高质量的熊去氧胆酸胶囊。