血浆OPN、VEGF与老年冠心病患者冠状动脉侧支循环形成的相关性研究

秦 磊，赖亚宇，华 蕾，毛 梅△

解放军第九五八医院：1.全科医学科；2.心血管内科，重庆 400020

冠心病(CHD)是老年人常见病，病死率较高[1]。若CHD患者的冠状动脉侧支循环(CCC)形成良好，则往往能取得更好的预后[2-3]。而CCC形成可能与新生血管生成有关[4]。骨桥蛋白(OPN)对血管平滑肌细胞迁移及增殖有促进作用，且有利于新生血管生成[5]。此外，血管内皮生长因子(VEGF)对血管内皮细胞增殖有促进作用，可使血管通透性增加，它也有利于新生血管、动脉形成[6]。因此，为了进一步明确血浆OPN、VEGF与老年CHD患者CCC形成的相关性，本次纳入110例老年CHD病例进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性选择本院2018年9月至2020年5月收治的老年CHD患者110例作为研究对象，所有患者入院后均行冠状动脉造影确诊CHD。患者中男59例，女51例；年龄60～82岁，平均(70.29±8.76)岁；高血压28例，糖尿病23例；冠状动脉病变1支45例，2支42例，≥3支23例；冠状动脉狭窄50%～<75%者33例，75%～<90% 37例，90%～<99% 23例，99%～100% 17例；有吸烟史26例，饮酒史22例，心肌梗死病史29例。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2纳入与排除标准

1.2.1纳入标准 (1)经冠状动脉造影提示，至少有1支血管管腔狭窄超过50%，年龄≥60岁；(2)意识正常，精神状态良好；(3)认知功能正常；(4)病例资料齐全；(5)对研究内容知情同意。

1.2.2排除标准 (1)恶性肿瘤患者；(2)近期有慢性/急性感染病史者；(3)血液系统疾病患者；(4)急性冠状动脉综合征、心脏瓣膜病患者；(5)结核病患者；(6)肝、肾等脏器严重受损患者。

1.3方法

1.3.1冠状动脉造影方法 经数字减影心血管造影机(FD20，荷兰飞利浦)对受检者进行检查，均由同一名医生操作，行多体位投照。左冠、右冠分别选取6个、3个体位投照，碘影时间≥4个心动周期/次，必要情况下，可增加其他体位，并将时间延长。冠状动脉分支造影剂必须彻底充盈，且清晰显像。经定量冠状动脉造影行定量分析，明确冠状动脉狭窄程度。冠状动脉狭窄标准[7]：冠状动脉狭窄≥0%提示阳性，50%～<75%、75%～<90%、90%～<99%、99%、100%分别代表轻度、中度、重度狭窄，功能性闭塞、完全闭塞。

1.3.2血浆OPN、VEGF检测 所有受检者入院后均采集空腹4 mL肘静脉血，将标本抗凝处理，以半径10 cm，3 000 r/min离心15 min，分离上层血浆，存放于低温冰箱待测。采用酶联免疫吸附法(试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供)测定血浆OPN、VEGF水平。操作如下：(1)于包被板设置10个标准品孔，第1、2孔取100 μL标准品加入，然后取50 μL标准品稀释液加入，混合。从第1、2孔分别取100 μL液体，加入第3、4孔，并取50 μL标准品稀释液加入，混合。从第3、4孔分别取50 μL液体弃除，然后取50 μL加入第5、6孔，并取50 μL标准品稀释液加入，混合。以此类推，直到加入第9、10孔，取50 μL标准品稀释液加入，混合，从第9、10孔内分别取50 μL弃除。(2)设空白孔、待测样品孔，空白孔无需加酶标试剂、样品。取40 μL样品稀释液加入待测样品孔，并取10 μL待测样品加入，操作时尽可能避免与孔壁接触。(3)封板，在37 ℃下孵育30 min。(4)经蒸馏水对浓缩洗涤液进行稀释，备用。(5)将封板膜揭开，弃液体并甩干，取洗涤液加满，放置30 s，重复操作5次，拍干。(6)每孔取50 μL酶标试剂加入，空白孔无需添加。(7)在37 ℃条件下温育30 min。(8)再次洗涤，操作与(5)相同。(9)每孔分别取50 μL显色剂A、B加入，混合，避光显色。(10)取50 μL终止液加入，使反应终止，在这种情况下，液体从蓝变黄。(11)测定吸光度(A450)。

1.3.3CCC形成评估与分组 所有患者行冠状动脉造影后，经Rentrop分级法评价患者有无CCC形成。评估标准[8]：(1)0级，缺血部分未见侧支循环充盈；(2)1级，缺血部分可观察到侧支循环充盈分支，但心外膜下血管未见充盈；(3)2级，缺血部分可观察到侧支循环充盈分支，且心外膜下血管可见部分充盈；(4)3级，缺血部分可观察到侧支循环充盈分支，且心外膜下血管完全充盈。0级者提示无CCC形成，1、2、3级者提示有CCC形成。根据有无CCC，将患者分为无CCC组(52例)和CCC组(58例)，比较2组血浆OPN、VEGF水平，分析二者对老年冠心病患者CCC形成的评估价值。CCC组根据侧支循环Rentrop分级情况分为CCC不良组(23例)、CCC良好组(35例)，其中1级代表侧支循环不良，2、3级代表侧支循环良好。比较2组血浆OPN、VEGF水平，分析二者对CCC不良的评估价值。

2 结 果

2.1CCC组、无CCC组临床资料及血浆OPN、VEGF水平比较 2组在性别、年龄、高血压、糖尿病、饮酒史方面比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；2组在冠状动脉病变支数、冠状动脉狭窄程度、吸烟史、心肌梗死病史方面比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，且CCC组血浆OPN、VEGF水平均高于无CCC组(P<0.05)，见表1。

表1 CCC组、无CCC组的临床资料及血浆OPN、VEGF水平比较

2.2老年CHD患者CCC形成的影响因素分析 将相关变量纳入Logistic多因素模型行量化赋值，冠状动脉病变支数赋值为1支=0，2支=1，≥3支=2；冠状动脉狭窄程度赋值为50%～<75%=0，75%～<90%=1，90%～<99%=2，99%～100%=3；吸烟史、心肌梗死病史赋值为无=0，有=1；血浆OPN、VEGF以中位数为界赋值，OPN<32.42 ng/mL=0，≥32.42 ng/mL=1，VEGF<297.82 ng/L=0，≥297.82 ng/L=1。以有无CCC形成为因变量Y(无=0，有=1)，以表中各变量为自变量X。结果显示，冠脉病变支数多、冠状动脉狭窄程度重、有吸烟史、有心肌梗死病史以及血浆OPN、VEGF水平增高均为CCC形成的影响因素(P<0.05)，见表2。

表2 老年CHD患者CCC形成的影响因素分析

2.3血浆OPN、VEGF水平对CCC形成的评估价值 绘制血浆OPN、VEGF单独及联合检测评估CCC形成的ROC曲线，结果显示，OPN、VEGF单独检测评估CCC形成的最佳临界值分别为34.34 ng/mL、284.89 ng/L，OPN、VEGF单独及联合检测评估CCC形成的AUC分别为0.694(95%CI:0.592～0.795)、0.803(95%CI:0.723～0.883)、0.891(95%CI:0.823～0.958)，见图1、表3。

图1 血浆OPN、VEGF评估CCC形成的ROC曲线

表3 血浆OPN、VEGF对CCC形成的评估价值

2.4CCC不良组、CCC良好组的血浆OPN、VEGF水平比较 CCC良好组血浆OPN、VEGF水平高于CCC不良组(P<0.05)，见表4。

表4 CCC不良组、CCC良好组的血浆OPN、VEGF水平比较

2.5血浆OPN、VEGF水平对CCC形成不良的评估价值 绘制血浆OPN、VEGF单独及联合检测评估CCC形成不良的ROC曲线，结果显示，OPN、VEGF单独检测评估CCC形成不良的最佳临界值分别为34.01 ng/mL、370.00 ng/L，OPN、VEGF单独及联合检测评估CCC形成不良的AUC分别为0.647(95%CI:0.503～0.791)、0.684(95%CI: 0.547～0.821)、0.806(95%CI:0.683～0.928)，见表5、图2。

表5 血浆OPN、VEGF水平对CCC形成不良的评估价值

图2 血浆OPN、VEGF评估CCC形成不良的ROC曲线

2.6老年CHD患者血浆OPN水平与VEGF的相关性 经Pearson相关分析显示，血浆OPN水平与VEGF呈正相关(r=0.801，P<0.05)，见图3。

图3 血浆OPN与VEGF的线性相关图

3 讨 论

近年来，CHD在老年人中患病率呈逐年增长趋势，已成为常见的致死因素[9]。CHD进展期间会出现心肌缺血，严重情况下，甚至诱发急性心肌梗死，对患者预后影响非常大。研究表明，在病理作用影响下，机体可伴有新生血管生成，对冠心病心肌缺血具有改善作用，但改善过程比较缓慢，且范围较小[10]。基于此，有学者提出，可通过细胞治疗、应用蛋白等方式，对血管生成进行刺激，达到治疗目的[11]。近年来研究发现，VEGF能改善CHD患者缺血部位的血流灌注，且表现出剂量依赖性特点[12]，表明VEGF的促血管生成作用可能对CHD病情有影响。另有研究认为，VEGF的促血管再生作用可能影响CCC形成，而CCC形成良好有利于改善心肌局部缺血、缺氧症状，对改善病情有益[13]。此外，研究表明，OPN也有促血管再生功能，其与结肠癌、肺癌等多种恶性肿瘤的血管生成存在关联[14]。基于此，临床考虑OPN也可能对CCC形成产生影响。为了进一步了解VEGF、OPN与CHD患者CCC形成的关系，临床仍需大量研究予以论证。

本研究结果提示，在老年CHD患者中，与无CCC组相比，CCC组的血浆OPN、VEGF均增高(P<0.05)，且通过ROC曲线发现二者对患者CCC形成有一定评估价值。OPN在动脉粥样硬化病变中发挥了重要作用，主要表现为促进细胞增殖、分化以及迁移。研究证实，OPN水平与动脉粥样硬化程度呈正相关，即OPN水平越高，硬化程度越重[15]。OPN可能参与了CHD患者的CCC形成过程，高水平的OPN有利于使冠状动脉侧支血管处于开放状态，其具备促血管生成功能，对CCC成熟存在促进作用，这可能是OPN促进CCC形成的机制[16]。VEGF作为生长因子，能为新生血管生成提供条件，其与OPN具备相同功能，二者均对细胞迁移、增殖有益。研究表明，VEGF与冠状动脉病变严重度密切相关，随着病变程度越重，血液中VEGF水平越高，原因在于在冠状动脉狭窄情况下，机体炎症因子释放增加，心肌缺氧、缺血症状加重，致VEGF释放入血，上调其表达水平[17]。而VEGF水平增加，有利于血管内皮细胞分化，使血管通透性增加，对侧支循环开放有利，可促进CCC形成[18]。由此可见，血浆OPN、VEGF水平增高均可通过促血管生成作用，为CCC形成提供条件。

本研究发现，血浆OPN、VEGF水平是CCC形成的影响因素，二者水平越高，越有利于CCC形成。通过上述分析，笔者认为其机制在于，OPN、VEGF水平增高，更有利于发挥其促血管再生作用，可帮助建立良好侧支循环，促进CCC形成。有学者发现，OPN表达与侧支循环密切相关，在侧支循环良好时，Rentrop分级越低，OPN水平则增高[19]，这与本次结论吻合。本研究还提示，CCC形成与冠状动脉病变支数、冠状动脉狭窄程度、吸烟史、心肌梗死病史也密切相关，其中吸烟史对CCC形成有抑制作用。可能原因为吸烟能促使内皮细胞迁移、分化等作用削弱，不利于CCC形成[20]。而本研究发现，冠状动脉病变支数增加、冠状动脉狭窄严重、有心肌梗死病史者更有利于CCC形成。机制可能在于，上述因素对血管内皮、平滑肌细胞的移行、分化有促进作用，有利于侧支血管开放，促进CCC形成[21]。

本研究显示，与CCC不良者相比，CCC良好者的血浆OPN、VEGF水平明显增高(P<0.05)，且ROC曲线提示二者对CCC形成不良有一定评估价值，进一步表明血浆OPN、VEGF水平增高有利于CCC形成良好。OPN与VEGF均为血管形成过程中的重要介质，本研究证实，二者血浆水平增高，能充分发挥其促血管生成、促侧支循环开放功能，从而促进CCC形成。OPN、VEGF在血浆中水平越高，则能更明显地对内皮细胞进行刺激，促进其分化、迁移，可帮助建立有效侧支循环，而当OPN、VEGF处于较低水平时，促血管生成机制未能启动，不能形成良好、有效的CCC[22-23]。因此，血浆OPN、VEGF水平增高，更有利于CCC形成良好。本研究发现，血浆OPN水平与VEGF呈正相关(r=0.801，P<0.05)，即二者在血浆内的表达趋势一致。有研究表明，VEGF、OPN在恶性肿瘤病例中可共同促进新生血管生成，这也提示二者相互作用、相互影响[24]。基于此，笔者推测，老年CHD患者的血浆VEGF、OPN水平同时增高，有利于进一步促进CCC形成良好。

本研究的创新之处在于，一方面，证实了血浆OPN、VEGF是CCC形成的影响因素，明确了二者评估CCC形成的价值，确定了最佳临界值，以血浆OPN≥34.34 ng/mL、VEGF≥284.89 ng/L时更有利于CCC形成。另一方面，本研究还发现血浆OPN、VEGF与CCC是否形成良好有关，以血浆OPN≥34.01 ng/mL、VEGF≥370.00 ng/L时更有利于CCC形成良好。临床或许能以本研究提供的数据作为参考，对老年CHD患者CCC形成及是否形成良好进行预测，分析患者病情，制订针对性治疗方案。但本研究也有局限性，如样本来源有限，样本量小，且涉及因素众多，未能对各临床因素予以深入探讨，未来将进一步研究以弥补上述不足。

综上所述，老年CHD患者CCC的形成与血浆OPN、VEGF水平密切相关，CCC形成者的血浆OPN、VEGF水平较无CCC形成者明显增高，二者在CCC形成良好者中的水平也较高，是CCC形成的影响因素，对CCC形成与CCC形成不良有一定评估价值。