超高效液相色谱-串联质谱测定桑葚中抗蚜威残留量

李国烈柯玲菊

(1.南充农产品质量监测检验中心，四川 南充 637000；2.黑龙江中医药大学药学院，黑龙江 哈尔滨 150040)

抗蚜威(Pirimicarb)化学名称为2-二甲氨基-5，6-二甲基嘧啶-4-二甲基氨基甲酸酯，是一种氨基甲酸酯类农药，具有触杀、熏蒸和叶面渗透作用，杀虫迅速，残效期短，能有效防治对有机磷杀虫剂产生抗药性的除棉蚜虫外的所有蚜虫，被广泛应用于果树、蔬菜和粮食作物的蚜虫防治上[1-3]。按我国农药毒性分级标准，抗蚜威属于中等毒性杀虫剂，《GB 2763-2019食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》规定了抗蚜威在水果、蔬菜、谷物和其它食品类别中的最大残留限量。

桑葚为木本桑树的果穗，是国家卫生部批准的药食同源农产品，自古享有中华“果皇”、“民间圣果”之美誉。桑葚作为药食同源类中药，性寒，味甘，入心、肝、肾经，具有滋阴、补肝、补肾、补血、明目、生津止渴、乌发养颜、治疗失眠和神经衰弱、抗疲劳、防治便秘、风热水肿等功效，在药用和食用价值方面市场发展前景广阔[4-7]。果桑病虫害的防治通常以化学防治为主[8]，但在实际生产中，用药不当会造成桑葚中化学农药残留污染，危害健康和产业发展。李国烈等[9-13]报道了通过超高效液相色谱-串联质谱方法测定桑葚中醚菌酯、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒、克百威和烯酰吗啉的残留量；覃明丽和赵鑫等[14,15]报道了桑葚中乐果、甲基硫菌灵和腐霉利的残留分析。到目前为止，尚未见关于抗蚜威在桑葚中的残留检测报道。本试验采用超高效液相色谱-串联质谱方法测定桑葚中抗蚜威残留量，以期为桑葚中抗蚜威的残留检测提供参考。

1 材料与方法

1.1 标准品和试剂

抗蚜威标准品购于农业部环境保护科研监测所(编号：GSB05-2304-2016)；甲醇(质谱级)、乙腈(质谱级)、甲酸(质谱级)、甲苯(色谱级)购于美国Fisher公司；氯化钠(分析纯)购自天津科密欧化学试剂有限公司；蒸馏水购于广州屈臣氏食品饮料有限公司。

1.2 仪器和设备

超高效液相色谱-质谱仪(Waters，Acquity UPLC/Xevo TQ-S)、摇床(IKA，HS501)、离心机(Sigma，3-18KS)、分析天平(Mettler Toledo，ML802)、旋涡混合器(IKA，Vortex Genius 3)、旋转蒸发仪(上海亚荣，RE-2000A)；固相萃取装置(Agilent)、色谱柱(Waters，Xbridge C18，3.5μm 3.0mm×100mm)、固相萃取小柱(Agilent，Mega BE CARB/NH2500mg·6mL-1)、50mL离心管(Eppendorf)以及微孔滤膜(津腾，PTFE 0.22μm)等。

1.3 样品处理

准确称取匀浆后的桑葚样品10.00g(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入乙腈20.00mL，置于摇床上振荡提取30min(300r·min-1)，加入氯化钠5g，再振荡5min(300r·min-1)，6000r·min-1离心5min，取上清液10.00mL待净化；固相萃取小柱先用5mL乙腈加甲苯(体积比为3∶1)活化，将上述待净化液过柱，收集滤液，再用25mL乙腈加甲苯(体积比为3∶1)洗脱，合并洗脱液，于40℃水浴旋蒸近干，用50%甲醇5.00mL复溶，涡旋混匀，过滤膜装瓶待检测。

1.4 仪器条件

采用0.10%甲酸甲醇溶液(A)、0.10%甲酸溶液(B)和0.10%甲酸乙腈溶液(C)作为流动相，梯度洗脱程序见表1。色谱柱温度30℃，样品室温度20℃，进样量为2μL。质谱采用多反应监测方式进行采集。脱溶剂气(1000L·h-1)和锥孔气(150L·h-1)均为高纯氮气，碰撞气(0.10mL·min-1)为高纯氩气，脱溶剂温度为500℃。定量离子对、定性离子对、毛细管电压、锥孔电压和碰撞电压等相关参数见表2。

表1 流动相及梯度洗脱程序

表2 质谱参数

1.5 标准曲线和检出限

用空白桑葚样品基质配制成质量浓度为1.00μg·L-1、2.00μg·L-1、5.00μg·L-1、10.00μg·L-1、20.00μg·L-1、50.00μg·L-1的基质标准溶液，采用1.4仪器条件进行分析。以质量浓度为横坐标，定量离子对的峰面积为纵坐标，用质谱数据处理软件拟合标准曲线。通过在最低质量浓度附近添加一系列已知质量浓度的样品进行测定，以S/N≥3时的样品质量浓度为方法检出限。

1.6 回收率和精密度

回收率试验采用加标回收试验法。按照1.00μg·kg-1、10.00μg·kg-1、50.00μg·kg-13个浓度水平向空白桑葚样品中加入相应的抗蚜威标品，每个浓度水平做6个平行。按1.3进行样品处理，1.4仪器条件进行样品分析，计算样品实测浓度。

回收率(%)=实测浓度/理论浓度×100%

精密度试验采用加入法，参照回收率试验方法，日间精密度连续测定3d。

1.7 基质效应

基质指的是样品中被分析物以外的组分，基质经常对分析物的分析过程有显著的干扰，并影响结果的准确性。基质效应采用比较不同条件下峰面积平均值的方法来评价[16]，用桑葚空白基质作溶剂配制的标液称为基质标液(B)，用50%甲醇溶液作溶剂配制标液称为试剂标液(A)，基质效应为B信号峰面积/A信号峰面积。

2 结果与分析

2.1 方法选择性

该试验条件下，抗蚜威采用反相液相色谱分离，流动相中加入0.1%体积分数的甲酸来提高ESI+的离子化效率。结果表明，抗蚜威保留时间为3.66min，峰形及分离度良好，且可获得较强的分子离子峰强度，桑葚基质对桑葚样品中抗蚜威的测定干扰小。抗蚜威试剂标样溶液图谱，桑葚空白样品图谱，抗蚜威桑葚基质标准溶液图谱以及抗蚜威加标样品图谱分别见图1至图4。各图中上图为定量离子对(239.2/72.0)色谱图，下图为定性离子对(239.2/182.1)色谱图。

2.2 标准曲线和检出限

该试验条件下，抗蚜威在质量浓度1.00～50.00μg·L-1时线性关系良好，标准曲线回归方程：

y=1.0119×105x+5283.68(R2=0.998)

权重为1/x。根据《GB/T 27417-2017合格评定 化学分析方法确认和验证指南》要求，以3倍基线噪音的药物浓度为最低检出限，抗蚜威在桑葚中的方法检出限为0.10μg·kg-1，为增加检测结果的可信性，以10倍的方法检出限为方法定量限，则方法定量限为1.0μg·kg-1。

2.3 方法回收率和精密度

在1.00μg·kg-1添加浓度水平下，抗蚜威的平均回收率为97.4%，相对标准偏差(RSD)为5.00%；在10.00μg·kg-1添加浓度水平下的平均回收率为95.9%，相对标准偏差(RSD)为2.86%；在50.00μg·kg-1添加浓度水平下的平均回收率为89.3%，相对标准偏差(RSD)为0.99%。结果表明，该方法具有较好的回收率和准确度。方法的精密度结果见表4，日内精密度(n=6)RSD分别为4.90%、2.50%、3.78%，日间精密度(n=3)RSD分别为5.77%、3.67%、4.94%。结果表明，该试验方法具有很好的重现性和稳定性。

表3 方法回收率(n=6)

表4 方法精密度

2.4 基质效应

该方法的基质效应结果见表5，在1.00μg·L-1、10.00μg·L-1和50.00μg·L-13个质量浓度水平下，抗蚜威在桑葚样品中的基质效应分别为90.62%、91.14%和95.09%，RSD分别为1.80%、0.56%和0.40%。由结果可知，在质量浓度为1.00～50.00μg·L-1范围内，抗蚜威在桑葚样品中的基质效应表现为基质抑制效应，并且值都大于90%。因此，在使用该方法测定桑葚中抗蚜威残留量时，基质效应对结果的影响比较小，可采用基质匹配标准溶液或纯溶剂标准溶液进行校正。

表5 方法基质效应(n=5)

3 结论

该试验采用乙腈提取桑葚样品，石墨化碳黑氨基复合柱净化，超高效液相色谱-串联质谱测定其中抗蚜威残留量。该方法前处理操作简便，方法选择性、检出限、回收率、精密度和标准曲线线性范围及其相关系数均满足样品分析要求，适用于桑葚中抗蚜威残留量的测定。