石杉碱甲在中国老年受试者中药动学和安全性研究*

钱泓洁，张梦琪，邹扬，刘淑云，王伟，陈倩，刘罡一，刘昀，余琛，贾晶莹

(1.上海市徐汇区中心医院中心实验室，上海药物I期临床暨药物一致性评价工程技术研究中心 上海 200031；2.上海市徐汇区中心医院急诊科，上海 200031)

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是最常见的神经退行性疾病，我国65岁以上老年人中AD患病率为3.21%[1]，严重影响患者生活质量，并造成巨大的社会负担。基于AD的胆碱能假说，已有多种胆碱酯酶抑制剂(cholinesterase inhibitors，ChEI)被批准用于AD的治疗[2]。石杉碱甲是从石杉科植物千层塔(蛇足石杉)中提取的一种可逆性ChEI，本研究旨在考察石杉碱甲在中国老年受试者体内的药动学(pharmacokinetics，PK)特点和安全性，对老年群体用药提供一定的参考。

1 资料与方法

1.1研究对象 本研究纳入60～80岁无重要脏器功能障碍的男性和女性老年受试者。入选标准包括：心、肝、肾功能基本正常；血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)≤1.5倍正常值上限；内生肌酐清除率不低于参考值的80%。主要排除标准为给予研究药物前3个月内出现以下情况者：心肌梗死、严重/不稳定型心绞痛、冠状动脉/外周动脉旁路移植、充血性心力衰竭、脑血管意外，包括短暂性脑缺血发作，癫、肾功能不全、机械性肠梗阻、心动过缓、支气管哮喘等疾病，以及严重糖尿病患者。允许对基础疾病使用合并用药，并记录使用的药物和用法用量。本研究经本院伦理委员会批准，研究过程符合赫尔辛基宣言，严格遵守CFDA-GCP进行。所有受试者均自愿签署知情同意书。

1.2试验设计 所有入组受试者单次服用石杉碱甲片(上海医科大学红旗制药厂，批号：110303，规格：每片0.05 mg)0.1 mg。分别于给药前、给药后0.25，0.5，0.75，1，1.25，1.5，2，3，4，6，8，12，24，36，48 h采集血样1.5 mL，分离血浆后在-20 ℃储存直到分析。在给药前和给药后0～2、2～4、4～8、8～12、12～24、24～36、36～48 h收集PK尿样，记录体积，取5 mL样本在-20 ℃储存直至分析。在整个研究过程中监测受试者生命体征和记录不良事件，在筛选时和给药后第3天接受体格检查、12导联心电图和实验室检查(血常规、尿常规、肝肾功能、血糖)。

1.3生物分析 采用经验证的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定血浆和尿液中石杉碱甲浓度，符合《中华人民共和国药典》中生物样品定量分析方法验证指导原则的规定。

仪器：QTRAP®5500串联质谱仪(美国AB Sciex公司)；液相系统(日本岛津公司)。在血浆中加入内标石杉碱乙，用乙腈直接沉淀蛋白法处理样品。采用SeQuant ZIC-HILIC(100 mm×2.1 mm，3.5 μm)色谱柱进行分离，柱温35 ℃；流动相为含5 mmol·L-1甲酸铵0.1%甲酸溶液-乙腈；流速0.3 mL·min-1；柱温35 ℃；梯度洗脱；进样体积5 μL；正离子多反应检测(MRM)，离子通道分别为m/z243.2 →210.2(石杉碱甲)，m/z257.2→198.6(石杉碱乙)。结果显示石杉碱甲线性范围0.05～10 μg·L-1(r>0.999)，定量下限0.05 μg·L-1，提取回收率81.0%～95.4%，批内、批间精密度RSD均<8%，内标的基质效应因子在2.11～2.28[3]。

1.4统计学方法 使用WinNonlin 6.4版软件(美国Pharsight公司)采用非房室模型进行PK参数分析，包括峰浓度(Cmax)、峰时间(tmax)、血浆浓度-时间曲线下面积(AUC(0-72 h))、AUC(0-∞)、半衰期(t1/2)等。并计算给药后48 h内尿液排泄率。采用SPSS 22.0版软件进行统计学分析，采用独立样本t检验对男女受试者PK参数进行比较，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1患者基线资料 14例老年受试者(男、女各7例)，年龄63～79岁，平均(69.4±5.2)岁，均按计划完成研究。平均身高为(158.6±9.0) cm，平均体质量为(65.7±9.9) kg。其中10例伴有基础疾病，包括高血压、糖尿病、高脂血症和前列腺增生，在研究期间未停用相应的合并用药。

2.2PK分析 老年受试者单次口服石杉碱甲0.1 mg，平均血浆药物浓度-时间曲线见图1。主要的PK参数：Cmax为(0.92±0.28) ng·mL-1，tmax为(2.61±1.67) h，AUC(0-72h)为(15.12±4.73) ng·h·mL-1，AUC(0-∞)为(16.99±4.92) ng·h·mL-1，t1/2为(14.38±3.87) h；同时对既往石杉碱甲PK和生物等效性研究文献进行检索，见表1。老年受试者单次服用石杉碱甲0.1 mg后48 h累计尿液药物排泄率为34.77%，见表2。

表1 既往研究和本研究中的主要PK参数

表2 石杉碱甲尿液排泄

图1 单次口服石杉碱甲0.1 mg后中国老年受试者体内的药物浓度-时间曲线

在所有分析的PK参数中，男性受试者t1/2(17.20±3.05 )h 显著长于女性受试者(11.56±2.15)h，P=0.002，其他参数比较差异无统计学意义，见表3。

表3 不同性别受试者的主要PK参数

2.3安全性 试验期间未发生严重不良事件。1例(7.1%)受试者在给药当天出现发热、腹泻、腹痛和低钾血症，并接受了静脉补液、抗菌药物和补钾治疗。研究医生判断上述不良事件与研究药物可能无关。

3 讨论

既往石杉碱甲动物实验结果显示，在大鼠肝微粒体中，石杉碱甲的代谢主要由细胞色素P450(CYP)1A2介导，CYP 3A1/2可能起次要作用[8]，同时，在药理学剂量下，石杉碱甲对肝CYP同工酶的活性和表达没有影响，这表明石杉碱甲与其他伴随药物发生药物相互作用的概率较小[9]。在大鼠、小鼠和犬体内的实验表明，石杉碱甲具有很高的生物利用度，口服后几乎完全吸收[10-11]。

国内外在健康受试者中，曾开展过多项石杉碱甲临床研究。在6例平均年龄为27岁健康志愿者中进行单次口服石杉碱甲0.99 mg的PK研究[4]，平均血浆Cmax为8.4 ng·mL-1，tmax为79.6 min，终末消除半衰期(t1/2)为288.5 min。在另一项PK研究中，12例20～25岁健康志愿者口服单剂量石杉碱甲0.4 mg，平均血浆Cmax为2.59 ng·mL-1，tmax为58.33 min，AUC(0-∞)为2 450.34 mg·min·mL-1[5]。在中国健康受试者中单次给药剂量高达0.99 mg[4]，以及在美国轻中度AD患者中为期24周石杉碱甲给药剂量0.4 mg，bid临床研究中，均获得良好的安全性数据[12]。但上述研究的剂量均大于临床常用剂量，且在特殊人群尤其是神经退行性疾病(包括AD和其他类型的痴呆)的目标人群老年人，目前尚未建立完整的PK数据。

本研究中，笔者选择临床推荐剂量(0.1 mg)在无认知功能障碍的中国老年人进行单次给药的PK试验，耐受性良好。本研究的受试者人群大部分伴有基础疾病，包括高血压、糖尿病、高脂血症和前列腺增生，在研究期间使用相应的合并用药，这可能会对石杉碱甲的PK特性产生影响，然而，高血压、糖尿病和血脂异常均是老年人群常见的疾病，也是AD和血管性痴呆的危险因素，本研究对象在一定程度上代表适用石杉碱甲的实际老年人群，且石杉碱甲与本研究中的药物无已知的药物相互作用，因此考虑研究中合并用药的情况对本研究的结论无显著影响。

由于不同研究的给药剂量不同，根据现有数据无法对PK参数直接进行比较，笔者对既往石杉碱甲PK和生物等效性研究的文献进行检索并汇总[4-7]。与文献报道石杉碱甲临床研究不同，本研究选择的研究对象为老年受试者，更符合石杉碱甲临床应用的患者人群。在本研究中，Cmax为(0.92±0.28) ng·mL-1，与既往PK和生物等效性研究进行比较，Cmax与给药剂量基本成正比例关系；AUC(0-72h)，AUC(0-∞)均接近于既往非老年人群研究中0.2 mg剂量组AUC数据；尽管本研究给药剂量小于其他研究，但tmax和t1/2较其他研究更长。上述结果提示，老年人群对石杉碱甲的吸收和消除均较年轻人更为缓慢，这可能与老年人群胃肠道功能及肝肾功能减退有关，从而导致体内药物总的暴露量更高。

石杉碱甲在AD患者中通常是每天服用，因此消除减缓可能会导致体内药物蓄积，王月娥等[11]在小鼠实验中发现石杉碱甲可经尿液快速清除，认为其体内蓄积风险较小，但本研究中尿液PK数据显示服药后48 h内仅约35%从尿液中清除，提示石杉碱甲在老年人体内仍有蓄积的风险，应在临床用药中予以关注。然而，由于没有直接的对照研究设计，不能排除这些差异受到不同研究在制剂、试验设计和分析方法等方面不一致的影响。除此之外，男性老年受试者t1/2较女性显著延长，此类性别差异在以往的研究中没有报道，具体机制有待进一步探究。

综上所述，石杉碱甲在中国老年受试者中安全性、耐受性良好。药动学数据显示，与健康非老年受试者相比，老年受试者的AUC更高、tmax和t1/2更长，说明老年人服用石杉碱甲后的暴露程度更高，吸收和消除过程更缓慢，临床应用中需要引起注意。