多个肿瘤标志物联合检测诊断非小细胞肺癌的价值

闫 飞, 马艳宁, 宋 燕, 刘雪凯

(1. 航天中心医院 检验科, 北京, 100049; 2. 中国人民解放军总医院 检验科, 北京, 100039)

肺癌是世界范围内发病率和致死率较高的恶性肿瘤，已经逐渐发展成为严重的公共卫生健康问题和社会问题[1-2]。肺癌按组织形态学可以分为非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌，其中NSCLC约占85%以上[3]。肺癌早期症状不明显，确诊时多为晚期。晚期肺癌患者的5年生存率仅为5%，而早期肺癌的5年生存率可达57%[4]。因此，早发现、早治疗对延长肺癌患者生存时间及改善预后极为重要。临床上常采用血清肿瘤标志物对肺癌患者进行诊断，但不同的肿瘤标志物对不同类型肺癌的诊断灵敏度和特异度各不相同[5]。研究[6]报道在早期肺癌患者血清中可以检测到循环肿瘤细胞(CTCs)，而叶酸受体则是外周血CTCs的理想靶点，可用于多种实体瘤的早期诊断。本研究探讨检测叶酸受体阳性循环肿瘤细胞(FR+-CTCs)、神经元烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)在NSCLC诊断中的价值，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2019年1月—2020年8月呼吸内科收治的150例NSCLC患者为NSCLC组，其中男110例，女40例，平均年龄(62.30±13.20)岁。纳入标准: ① 年龄20～80岁者; ② 符合2018年版《NCCN非小细胞肺癌诊断指南》[7]的诊断标准者; ③ 初次发病，未进行放化疗治疗者。排除标准: ① 合并重要脏器疾病或其他恶性肿瘤者; ② 合并心脑血管疾病者; ③ 妊娠期女性。根据肺癌TNM分期标准[8]分为Ⅰ期50例, Ⅱ期51例, Ⅲ期39例, Ⅳ期10例。选取100例肺部良性病变患者作为良性病变组，其中男70例，女30例，平均年龄(61.20±12.70)岁; 良性病变均经影像学及组织病理学确诊，患者既往无恶性肿瘤史。选取体检中心健康体检者100例为对照组，其中男70例，女30例，平均年龄(61.80±13.00)岁; 受试者身心健康，无既往肺部疾病史。3组受试者年龄、性别分布比较，差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，所有研究对象知情同意。

1.2 检测方法

所有研究对象均空腹抽取静脉血2管，一管加入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血3 mL, 另一管无添加剂干燥真空管3 mL。FR+-CTCs检测方法: 在获得EDTA抗凝血3 mL血样后，采用免疫磁珠负向富集法捕获CTCs, 应用配体靶向聚合酶链式反应(PCR)检测FR+-CTCs。仪器为美国ABI7300实时定量PCR仪，采用格诺思博生物科技公司生产的试剂盒。在3 mL血液中检测到1个FR+-CTCs即判断为1 FU，阳性判断标准为≥8.7 FU。NSE、CYFRA21-1检测方法: 仪器为贝克曼DXI-800全自动免疫分析仪，采用配套试剂盒。NSE>16.5 ng/mL、CYFRA21-1>3.3 ng/mL为阳性。所有检测项目均严格按照试剂盒说明书及标准操作规程进行。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 3组FR+ -CTCs、NSE、CYFRA21-1水平比较

NSCLC组FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平高于良性病变组、对照组，良性病变组FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05), 见表1。

表1 3组FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平比较

2.2 不同TNM分期NSCLC患者相关指标阳性率比较

在TNM分期Ⅰ、Ⅱ期NSCLC患者中, FR+-CTCs阳性率高于NSE、CYFRA21-1阳性率，差异有统计学意义(P<0.05), 见表2。

表2 不同TNM分期NSCLC患者相关指标阳性率比较[n(%)]

2.3 不同临床病理特征NSCLC患者FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平比较

分析150例NSCLC患者临床病理特征发现, TNM分期为Ⅲ期及Ⅳ期、鳞癌、分化程度低、有淋巴结转移的患者FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平分别高于Ⅰ期及Ⅱ期、腺癌、分化程度高、无淋巴结转移的患者，差异有统计学意义(P<0.05), 见表3。

表3 不同临床病理特征NSCLC患者FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平比较

2.4 FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1对NSCLC患者的诊断效能分析

ROC曲线分析结果提示，联合检测的AUC、敏感度、特异度依次为0.938、90.1%、84.6%，均较单独检测具有更高的诊断效能，差异有统计学意义(P<0.05), 见表4。

表4 FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1对NSCLC患者诊断效能分析

3 讨 论

肺癌已成为中国城市人口首要的恶性肿瘤死亡原因，且80%以上为NSCLC[9]。NSCLC生长较慢、转移较晚，早期症状不明显，大多数患者就诊时已出现不同程度、部位的转移，无法进行手术治疗，导致晚期患者生存率低。

FR+-CTCs是近年来发现的新型肿瘤标志物。CTCs是由实体肿瘤或转移病灶释放入血，随着肿瘤细胞的浸润和转移时，部分肿瘤细胞可以通过结缔组织间隙或破裂的毛细血管进入血液循环[10]。叶酸是人体必需的维生素，主要从外界摄取，通过与细胞表面叶酸受体结合而进入细胞。叶酸受体在多种肿瘤细胞中高度表达，尤其是卵巢癌和肺癌，正常人机体中表达极低，叶酸受体已经成为检测CTCs的理想靶点[11]。NSE是一种糖酵解酶，主要分布于人体神经元和神经内分泌细胞内，在周围型NSCLC中显著升高[12]。但NSE在良性病变中也会出现高表达，因此存在一定假阳性。CYFRA21-1是细胞角蛋白家族的重要成员，在恶性肿瘤细胞的增殖过程中以外分泌的形式进入血液循环，在肺癌中可高度表达[13]。

本研究发现NSCLC患者的FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平显著升高，说明这些标志物与肺癌的发生、发展密切相关，与研究[14]结果相近。FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1联合检测的诊断效能明显提高，弥补了单独检测的各项不足，提高了肺癌早期检测的诊断效能。本研究还发现, FR+-CTCs在早期肺癌中具有更高的检出率，可能与肿瘤细胞释放入血而早期临床症状还不明显有关。本研究还显示, TNM分期为Ⅲ期及Ⅳ期、鳞癌、分化程度低、有淋巴结转移的患者FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平明显升高，因此临床需积极监测FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平以评估癌症进展情况，为临床治疗提供参考。

综述所述, FR+-CTCs在NSCLC早期具有较高的检出率, FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1联合检测可以进一步提高诊断效能，对NSCLC的早期诊断具有重要意义。