新生儿败血症血液标本主要病原菌构成及耐药性

陈秋芳，和俊杰，付荣

(濮阳市油田总医院 儿科，河南 濮阳 457000)

新生儿败血症是临床常见危重症，由于新生儿免疫功能较弱，尚未建立正常菌群，对产后所接触的细菌缺乏相应的免疫力，而感染后扩散可形成败血症，严重威胁患儿生命[1]。既往研究中，新生儿败血症主要病原菌为革兰阳性菌，且以葡萄球菌居多[2]。但不同地区新生儿败血症病原菌构成有差异，不同时间病原菌可能存在变迁，同时由于临床抗生素的广泛使用，不同病原菌对不同抗生素耐药性存在差异。因此，根据病原菌构成及耐药性合理选择抗生素具有重要的意义。本研究采集2018年8月至2020年2月濮阳市油田总医院收治的146例新生儿败血症血液标本，进行细菌培养及药敏试验，以分析主要病原菌构成及耐药性，为临床治疗提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2018年8月至2020年2月濮阳市油田总医院收治的146例败血症患儿作为研究对象，其中男85例，女61例，足月儿107例，早产儿39例。患儿家属签署知情同意书。本研究经濮阳市油田总医院医学伦理委员会审批。

1.2 选取标准(1)纳入标准：①根据血常规、临床症状体征及病原菌抗原检测等确诊为新生儿败血症；②出生时间18 h～26 d；③合并黄疸、肝脾大、出血倾向。(2)排除标准：①合并休克、脑水肿、低氧血症；②药物禁忌；③先天畸形；④合并其他血液系统疾病。

1.3 细菌培养及药敏试验方法选择法国生物梅里埃公司的全自动血培养仪及配套试剂瓶、细菌鉴定仪。首选桡动脉采血，若桡动脉穿刺失败则改为肱动脉穿刺，在抗菌药物使用前采集2～5 mL血液于含有抗菌药物吸附剂的专用血培养瓶中，采集完成后即刻送至细菌室进行培养；将标本置入全自动血培养仪，仪器报警后分离出致病菌株并进行药敏试验，若超过7 d仍未报警则认为细菌培养结果为阴性。以纸片琼脂扩散法进行药敏试验，加样选择直径为6.35 mm、吸水量为20 μL的药敏纸片，密封于-20 ℃无霜冷冻箱保存，注意保存时间勿超过1周，药敏纸片使用前需在室温下静置1～2 h；接种时用无菌棉拭子蘸取菌液，在琼脂表面均匀接种3次，每次旋转60°，内缘涂抹1周，平板在室温下干燥3～5 min，将含药纸片以纸片分离器贴于琼脂表面，接种时间<15 min，孵育箱设置为35 ℃，16～18 h后统计结果。质控菌株为铜绿假单胞菌ATCC27853、肺炎克雷伯菌ATCC700603、大肠埃希菌ATCC25922、白假丝酵母菌ATCC64550以及金黄色葡萄球菌ATCC25923。

1.4 统计学方法采用SPSS 22.0统计软件处理数据，计数资料以频数和率(%)表示。

2 结果

2.1 主要病原菌构成从146例败血症患儿中共分离致病菌株166株。其中革兰阳性菌居多，占比为71.08%，主要为凝固酶阴性葡萄球菌和金黄色葡萄球菌；革兰阴性菌占比为27.11%，主要为肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。见表1。

表1 主要病原菌构成(n，%)

2.2 主要革兰阳性菌耐药性凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌对替考拉宁、阿米卡星、万古霉素耐药性较低，对青霉素、氨苄西林耐药性较高。见表2。

表2 主要革兰阳性菌耐药性[n(%)]

2.3 主要革兰阴性菌耐药性肺炎克雷伯菌对亚胺培南、阿米卡星、诺氟沙星耐药性较低，对氨苄西林耐药性较高；大肠埃希菌对亚胺培南、阿米卡星、诺氟沙星耐药性较低，对氨苄西林、哌拉西林耐药性较高。见表3。

表3 主要革兰阴性菌耐药性[n(%)]

3 讨论

由于新生儿免疫功能尚未完善，自身免疫力差，出生后机体内菌群未完善，接触到细菌后易形成持续感染，扩散后诱发败血症[3-4]。抗生素是治疗感染的主要药物，但由于抗生素种类繁多，且由于临床抗生素的广泛使用，不同菌群对不同抗生素耐药性有所不同，若给予敏感性较低的抗生素，难以达到预期治疗效果，且进一步增强病原菌耐药性，延误治疗时机[5]。因此，明确新生儿败血症主要病原菌构成并针对性给予抗生素具有重要的临床指导意义。

本研究结果显示，从146例患儿中共分离致病菌株166株，其中以凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌为主的革兰阳性菌居多，占比为71.08%，以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌为主的革兰阴性菌占比为27.11%，提示败血症患儿主要病原菌为革兰阳性菌，且凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌居多。有研究对126例新生儿败血症进行细菌培养，发现革兰阴性菌占比为58.73%，革兰阳性菌占比为38.10%，真菌占比为3.17%[6]。另有研究显示，新生儿败血症中病原菌分布为革兰阳性菌(72.31%)、革兰阴性菌(24.62%)、真菌(3.08%)[7]。均与本研究数据存在一定的出入，说明不同地区、不同时间新生儿败血症病原菌构成存在一定差异，提示对败血症患儿实施细菌培养及药敏试验的必要性。

进一步对主要病原菌进行药敏试验，结果显示，以凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌为主的革兰阳性菌对替考拉宁、阿米卡星、万古霉素耐药性较低，以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌为主的革兰阴性菌对亚胺培南、阿米卡星、诺氟沙星耐药性较低。这说明对革兰阳性菌感染的败血症患儿可以替考拉宁、阿米卡星、万古霉素为临床经验用药，对革兰阴性菌感染的败血症患儿可以亚胺培南、阿米卡星、诺氟沙星为临床经验用药。但由于新生儿尚未发育成熟，器官功能较弱，解毒作用差，对药物副作用较敏感，导致临床对新生儿应用抗生素受到一定限制。李志博等[8]研究证实，万古霉素对新生儿凝固酶阴性葡萄球菌感染治疗效果显著，且肾毒性较小，具有较高的临床价值。因此，临床应更加重视万古霉素的使用频率，避免滥用，延缓耐药性的发生。而对头孢类药物、青霉素及半合成青霉素均显示耐药性较高，大环内酯类药物具有一定的脉管炎、肝损害风险，喹诺酮类药物会抑制成骨细胞成长，不利于新生儿健康成长，临床应尽量避免使用。需注意，由于小儿身体娇弱，临床应用抗菌药物时还应考虑小儿耐受程度、不良反应，关注血药浓度，确保治疗效果及安全性。

综上，新生儿败血症主要病原菌为以凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌为主的革兰阳性菌，革兰阴性菌较少，临床治疗时可通过细菌培养及药敏试验合理选择抗生素，确保治疗效果和用药安全。