FOXK1、SATB2在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数及预后的相关性分析

沙金平 徐 赟 刁云辉

胃癌是起源于胃粘膜上皮的恶性肿瘤，该病常隐匿发病，无特异性症状，患者多表现为恶心、呕吐等消化不良症状[1]。近些年，有研究发现，特异AT序列结合蛋白2(Special AT-rich sequence-binding protein 2，SATB2)、叉头框转录因子1(forkhead box k1，FOXK1)与乳腺癌、大肠癌、结直肠癌的发生密切相关，而胃腺癌与结直肠癌的形态学较为相似，免疫表型也存在共同点[2]，但目前有关其与胃癌的关系尚不可知，故本研究分析癌组织FOXK1、SATB2在胃癌组织中的表达及与临床病理参数的关系，旨在探究其对胃癌的诊断价值及预后的相关性，为胃癌的早期诊断及治疗提供理论参考依据，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

以2013年7月至2015年7月在我院就诊的胃癌患者153例为研究对象，其中男性90例，女性63例；年龄46～78岁，平均(63.27±6.39)岁；淋巴结转移者91例，远处转移者64例；分化程度：高分化51例、中分化62例、低分化40例；TNM分期：Ⅰ期46例、Ⅱ期68例、Ⅲ期21例、Ⅳ期18例；组织学分型：管状腺癌69例、印戒细胞癌41例、黏液腺癌25例、乳头状腺癌18例。

1.2 纳入标准

①符合《胃癌规范化诊疗指南(试行)》[3]关于胃癌的诊断标准；②患者均知晓本研究的研究内容，且已签署同意书；③经组织病理学检查确诊为胃癌患者；④行手术治疗者。

1.3 排除标准

①严重肝肾功能异常者；②其他原发性肿瘤患者；③临床资料缺失者；④入组前已接受抗肿瘤治疗者；⑤严重感染性疾病患者；⑥严重免疫缺陷疾病患者。

1.4 方法

取距肿瘤边缘5 cm的癌旁组织(经快速病理检查确定为正常组织，且切缘肿瘤细胞存留为阴性)经胃镜活检切除后放置于-80 ℃下保存备用。

FOXK1表达情况检测：取备用标本应用10%甲醛溶液固定，然后分别应用95%乙醇及无水乙醇浸泡12 h、2 h，用石蜡包埋后切片，采用苏木精-伊红进行染色染色，在高倍镜下分析FOXK1表达情况，根据显色及阳性细胞率进行量化评分。判断标准[4-5]：显色：0分：不显色，1分：浅黄色，2分：黄色，3分：棕黄色，4分：棕褐色；阳性细胞率：0分：无阳性细胞，1分：阳性细胞数占视野的25%以下，2分：阳性细胞数占视野的25%～50%，3分：阳性细胞数占视野的50%～75%，4分：占视野的75%以上，如显色+阳性细胞率得分>3分即为阳性表达。

SATB2表达情况检测：取备用组织切片后在60 ℃下烘烤2 h，然后应用枸缘酸钠修复10 min，冷却后在3%的过氧化氢下浸泡，加PBS水洗，在4 ℃环境下孵育过夜，再次用PBS冲洗后滴加二抗，用二联苯胺进行显色处理，然后用苏木精复染、脱水后封固。SATB2表达于细胞核，故可根据显色及阳性细胞率量化评分来判断表达情况，判断标准同FOXK1检测。

1.5 观察指标

①比较胃癌组织及癌旁组织FOXK1、SATB2表达情况。②收集患者的临床资料，分析患者胃癌组织FOXK1、SATB2表达水平与临床病理参数的关系，采用logistics回归分析影响胃癌患者FOXK1、SATB2表达的相关因素。③采用电话随访的方式对患者术后生存情况进行随访，随访时间为术后6个月、1年、2年、3年、5年，分析胃癌患者FOXK1、SATB2表达与预后的关系。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 胃癌组织及癌旁组织中FOXK1、SATB2阳性表达率比较

胃癌组织中FOXK1、SATB2阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05)，见表1。

表1 胃癌组织及癌旁组织中FOXK1、SATB2阳性表达率比较/%

2.2 FOXK1、SATB2表达对胃癌的诊断价值分析

FOXK1、SATB2表达联合检测诊断胃癌的AUC大于单独检测(P<0.05)，见表2、图1。

表2 FOXK1、SATB2表达对胃癌的诊断价值分析

图1 FOXK1、SATB2阳性表达诊断胃癌的ROC曲线分析

2.3 胃癌患者FOXK1、SATB2表达与临床病理参数的关系

FOXK1阳性在肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高方面的例数比例高于FOXK1阴性组，SATB2阳性在肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、分化程度高方面的例数比例高于SATB2阴性组(P<0.05)，见表3。

表3 FOXK1、SATB2表达与胃癌临床病理参数的关系/例

2.4 影响胃癌患者FOXK1、SATB2表达的危险因素分析

肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高是影响FOXK1表达的危险因素，肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、分化程度高是影响SATB2表达的危险因素(P<0.05)，见表4。

表4 影响胃癌患者FOXK1、SATB2表达的危险因素分析

2.5 FOXK1、SATB2表达与胃癌患者预后的关系分析

FOXK1阳性组生存率低于FOXK1阴性组，SATB2阳性组生存率低于SATB2阴性组(P<0.05)，见表5、图2。

图2 胃癌患者中FOXK1、SATB2表达的生存曲线分析

表5 FOXK1、SATB2表达与胃癌患者预后的关系分析/%

3 讨论

FOXO1是FOX家族中的一员，其参与了蛋白质的磷酸化和去磷酸化过程，对细胞生长、增殖和代谢具有调控作用[6]。孙宇等[7]报道指出，正常机体的FOXO1阳性表达率较低，而乳腺癌患者存在过表达的现象，提示其可能与肿瘤的发生过程有关。FOXO1可与转录因子蛋白结合，抑制DNA损伤诱导基因的表达，降低DNA修复能力，易使细胞发生突变[8]。FOXO1正常情况下均在细胞核内表达，但信号通路发生变化后后，FOXO1转移至细胞质，影响细胞的DNA复制、转录过程。导致细胞异常增殖[9]。本研究发现，胃癌组织的FOXK1阳性表达率高于癌旁组织，表明胃癌组织中存在FOXK1过表达的现象。

SATB2位于2号染色体上，既是顺序特异性DNA结合蛋白，也是组织特异性的 核基质结合蛋白和转录因子，参与了染色质结构的形成和组织特异性基因的表达调控，与多种器官分化密切相关[10]。有研究证实，SATB2蛋白参与了骨骼的形成及神经系统的发育过程[11]。徐卫国等[12]研究指出，其肽链一致性较高的SATB2基因过表达可促进乳腺癌转移，提示其可能也与某类肿瘤的发生发展过程有关。本研究结果显示，胃癌组织的SATB2阳性表达率高于癌旁组织，表明SATB2在胃癌组织中存在高表达的现象，提示其可能与胃癌的发生过程有关，或可通过检测SATB2表达对胃癌进行初步诊断。为此，本研究进行了进一步分析，结果发现FOXK1、SATB2表达联合检测对胃癌具有较高的诊断价值，故可通过检测胃部组织中的FOXK1、SATB2表达情况判断其是否患有胃癌。

胃癌在我国各种恶性肿瘤的发病率中居于首位，患者多表现为上腹部隐痛、嗳气等症状，易于胃部良性疾病混淆，该病早期预后较好，但较多患者一经发现已至中晚期，延误了最佳治疗时机，但是死亡率升高[13-14]。田浩等[15]研究指出，大肠癌患者存在SATB2表达异常的现象，且其表达情况与分化程度呈正相关。SATB是一种重要的核基质结合蛋白，在转录、调控和染色质重组等过程中发挥重要作用，可与核基质附着区结合改变染色质构象从而发挥调控基因的转录功能，其过表达可促进细胞增殖及癌细胞远处转移[16-17]。本研究结果显示，肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、分化程度高是影响FOXK1、SATB2表达的危险因素，表明癌细胞增殖分化及转移会导致胃癌组织的FOXK1、SATB2过表达。而淋巴结转移及病理组织分化程度高会影响患者预后，因而FOXK1、SATB2表达可能与预后有关。Chen等[18]研究指出，SATB2过表达提高患者术后3年死亡率。本研究发现，FOXK1阳性及SATB2阳性表达患者的预后较差，这可能与FOXK1、SATB2表达与肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度有关，FOXK1、SATB2过表达或会促进癌细胞增殖、周围组织浸润，进而影响患者预后。

综上所述，胃癌组织的FOXK1、SATB2阳性表达率均较高，肿瘤大小≥5 cm、淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期、分化程度高是影响胃癌组织FOXK1、SATB2的危险因素，并且FOXK1、SATB2阳性表达患者预后较差。